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  • 稳斑汤含药血清对巨噬细胞泡沫化自噬相关蛋白LC3B和Beclin1表达的影响

    作者:赵殿臣;宫丽鸿;肖福龙

    目的 探讨稳斑汤防治动脉粥样硬化的可能作用机制.方法 20只SD大鼠随机分为空白组及稳斑汤低、中、高浓度组各5只.稳斑汤低、中、高浓度组分别给予稳斑汤4.275、8.55、17.1 g/(kg·d)灌胃,空白组给予4 ml蒸馏水灌胃,每天1次,连续灌胃7天.灌胃第8天腹主动脉取血,离心后分离血清.体外培养小鼠巨噬细胞,分为空白对照组、模型组、雷帕霉素组及稳斑汤低、中、高浓度组,每组6孔.除空白对照组外其余各组均进行巨噬细胞泡沫化.空白对照组及模型组予10%大鼠空白血清培养;雷帕霉素组用雷帕霉素10μl/孔(终浓度10 nmol/L)培养;稳斑汤低、中、高浓度组分别用10%稳斑汤低、中、高浓度含药血清200μl/孔培养.48h后收集细胞,在透射电镜下观察各组细胞自噬体的变化,Western Blot法检测各组细胞LC3B和Beclin 1蛋白表达水平.结果 透射电镜下观察到,空白对照组无明显自噬体出现,模型组可见少量自噬体出现;与模型组比较,稳斑汤各浓度组与雷帕霉素组的自噬体数量均明显增加,雷帕霉素组数量更多.与空白对照组比较,其余各组LC3B和Beclin 1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,稳斑汤各浓度组及雷帕霉素组LC3B和Beclin 1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与雷帕霉素组比较,稳斑汤高浓度组LC3B和Beclin 1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 稳斑汤含药血清能够上调巨噬细胞泡沫化自噬相关蛋白LC3B和Beclin 1表达,促进泡沫化的巨噬细胞的自噬,从而抑制巨噬细胞泡沫化的进展,这可能是稳斑汤防治动脉粥样硬化的分子机制之一.

  • 羟基红花黄色素A对动脉粥样硬化早期脂肪酸的调控研究

    作者:魏紫奕;徐文娟;董姣姣;刘洁;贾志鑫;陈奕君;王明霞;阳娇;肖红斌

    动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种严重危害人类健康的复杂代谢紊乱综合征,其发生发展与游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)代谢轮廓改变直接相关.本文采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫化巨噬细胞作为动脉粥样硬化的早期模型,采用靶向代谢组学方法研究游离脂肪酸的代谢轮廓变化以及羟基红花黄色素A (hydroxysafflor yellow A,HSYA)的调控作用.通过动态多反应监测模式(dynamic MRM)在20 min内实现细胞内27种脂肪酸的定量分析,明确27种脂肪酸的含量分布.结合模式识别筛选出13个巨噬细胞泡沫化生物标志物,其中在巨噬细胞泡沫化过程中饱和脂肪酸总量升高,而十二碳酸、十四碳酸、十八碳烯酸及单不饱和脂肪酸总量降低,羟基红花黄色素A对十二碳酸、十四碳酸和十八碳烯酸异常代谢具有回调作用,网络分析表明与之相关的通路为脂肪酸生物合成通路(de novo fatty acid biosynthesis),oleoyl-(acyl-carrier-protein) hydrolase(OLAH)可能是羟基红花黄色素A调控脂肪酸代谢的潜在靶点.

  • 稳斑汤含药血清对巨噬细胞泡沫化凋亡相关蛋白Bax、Bcl2和Caspase3表达的影响

    作者:赵殿臣;宫丽鸿;肖福龙

    目的:观察稳斑汤含药血清对巨噬细胞泡沫化凋亡相关蛋白Bax、Bcl2和Caspase3表达的影响,探讨稳斑汤防治动脉粥样硬化的作用机制.方法:将20只SD大鼠按体重随机分为4组,空白组及稳斑汤低、中、高浓度组各5只.稳斑汤低、中、高浓度组分别以低、中、高浓度稳斑汤灌胃,空白组给予等体积的蒸馏水灌胃,均连续灌胃7d,每天1次.在灌胃第8天,给药2h后,腹主动脉取血,离心后分离血清.体外培养小鼠巨噬细胞,分为空白对照组,模型组,雷帕霉素组,稳斑汤低、中、高浓度组,除空白对照组外其余各组均进行巨噬细胞泡沫化,各组用相应含药血清干预,48 h后收集细胞,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western Blot检测各组细胞Bax、Bcl2和Caspase3的蛋白表达水平.结果:与空白对照组比较,模型组的细胞凋亡率升高(P<0.05);与模型组比较,稳斑汤高浓度组和雷帕霉素组的细胞凋亡率均降低(P<0.05);与雷帕霉素组比较,稳斑汤高浓度组的细胞凋亡率无明显差异(P>0.05).与空白对照组比较,模型组Bax和Caspase3的蛋白表达水平均升高(P<0.05),Bcl2的蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,稳斑汤各浓度组和雷帕霉素组Bax和Caspase3的蛋白表达水平均降低,Bcl2的蛋白表达水平升高(P<0.05);与雷帕霉素组比较,稳斑汤高浓度组Bax和Caspase3的蛋白表达水平均无明显差异(P>0.05),稳斑汤各浓度组Bcl2的蛋白表达水平均降低(P<0.05).结论:稳斑汤含药血清能够下调巨噬细胞泡沫化自噬相关蛋白Bax和Caspase3的表达,上调其Bcl2的表达,抑制泡沫化的巨噬细胞的凋亡,从而抑制巨噬细胞泡沫化的进展,这可能是稳斑汤早期防治动脉粥样硬化的分子机制之一.

  • 小檗碱对OX-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化的作用

    作者:王蜜蜜;沃兴德;周云;贾林;朱晓松

    目的:观察小檗碱对巨噬细胞泡沫化的保护作用.方法:利用ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7泡沫化,并在此过程中加入不同浓度小檗碱,通过油红O染色及胆固醇酯与总胆固醇的测定判断细胞泡沫化程度,评价小檗碱的作用效果.结果:与ox-LDL诱导的泡沫细胞组相比,小檗碱加入后细胞内脂质累积明显减少,而且泡沫化程度也降低了.结论:小檗碱能够降低ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化程度.

  • 中药抗巨噬细胞泡沫化的研究进展

    作者:李雪岩;杨玉玉;陈君

    单核细胞分化的巨噬细胞吞噬大量的氧化低密度脂蛋白(oxLDL),造成脂质聚集形成泡沫细胞,这一过程称为巨噬细胞泡沫化.巨噬细胞泡沫化是动脉粥样硬化早期病变的关键环节.oxLDL的过度摄取、过多胆固醇酯的聚集导致巨噬细胞中形成脂滴,是巨噬细胞泡沫化的主要机制.本文主要从中药调控胆固醇摄取及胆固醇逆转运的相关机制进行概述,总结近年来中药抗巨噬细胞泡沫化的相关研究进展,为中药抗动脉粥样硬化的进一步研究提供参考.

  • 泽泻汤对巨噬细胞泡沫化脂质沉积及其LXRα和ABCA1表达的影响

    作者:薛偕华;魏伟;陈彤;周晓茂;林志诚;陈立典

    目的 以大鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,经ox-LDL (50 mg/L)诱导后建立巨噬细胞泡沫化模型,观察泽泻汤对细胞LXRα和ABCA1表达的影响.方法 分别采用ox-LDL(50 mg/L)和Dil-ox-LDL(10 mg/L)处理大鼠腹腔巨噬细胞24h,同时20%泽泻汤血清干预后,油红O染色和荧光显微镜观察细胞内脂质沉积情况;蛋白免疫印迹检测细胞LXRα和ABCA1的表达情况.结果 ox-LDL(50 mg/L)和Dil-ox-LDL(10 mg/L)处理巨噬细胞成功建立巨噬细胞泡沫化模型;与空白组的巨噬细胞比较,模型组巨噬细胞内脂质沉积增加,泽泻汤血清干预组巨噬细胞内脂质沉积明显减少.空白组巨噬细胞和模型组巨噬细胞LXRα呈低水平表达,泽泻汤血清干预组细胞LXRα表达明显增加;与空白组比较,模型组巨噬细胞ABCA1表达明显增加,泽泻汤血清干预组巨噬细胞中ABCA1亦呈高表达,但较模型组略低.结论 ox-LDL(50 mg/L)和Dil-ox-LDL(10 mg/L)处理巨噬细胞可以成功建立巨噬细胞泡沫化模型;泽泻汤能改善巨噬细胞泡沫化过程的脂质沉积,可能通过上调LXRα表达来实现的.

  • 结核病相关泡沫巨噬细胞产生机制

    作者:刘军;李俊明

    巨噬细胞是结核分枝杆菌(MTB)在机体内的主要宿主细胞,巨噬细胞吞噬MTB后,对细胞外脂质的摄取、胞内的脂质代谢以及胞内脂质的外排等都会发生改变;导致脂质在巨噬细胞内大量堆积,形成泡沫巨噬细胞(FM).FM不仅不能有效地杀伤和清除胞内的MTB,还会抑制抗MTB特异性免疫应答的产生,其胞内蓄积的大量脂质还可为MTB的长期生存提供充足的营养.MTB、宿主免疫细胞和环境因素共同参与FM的形成,一系列与巨噬细胞脂质摄取、代谢和外排相关的分子也陆续被发现参与结核病相关FM的形成调控.我们总结了结核病相关FM的功能特点,以及形成的分子机制.

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