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联合应用神经生长因子和神经节苷脂对坐骨神经损伤大鼠脊髓神经元的保护作用探讨
目的 研究神经生长因子(NGF)联合神经节甘脂1(GM1)对于坐骨神经损伤大鼠的脊髓神经元保护作用.方法 选择实验用SD大鼠50只,随机分为A组(生理盐水NS组,14只)、B组(NGF,12只)、C组(GM1,12只)和D组(NGF+GM1,12只),造成5mm坐骨神经缺损,各组术中均以硅胶管进行局部加药,手术后于损伤侧小腿处予以相应药物肌注.结果 生长4周时,D组的脊髓运动神经元数以及神经传导速度均显著优于另外三组(P<0.05),且B、C组显著优于A组(P<0.05);生长8周时,B、C、D三组的脊髓运动神经元数以及神经传导速度均显著优于A组(P<0.05),但B、C、D三组间无明显差异(P>0.05).结论 NGF联合GM1对于坐骨神经损伤以后的脊髓运动神经元具有保护作用,且相比于单纯应用NGF或者GM1能够更早地发挥作用,且保护效果明显更好,值得推广应用.
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人参皂苷保护脊髓神经元与NO的关系
目的:探讨人参皂苷保护脊髓神经元与一氧化氮(NO)的关系.方法:体外培养鼠胚脊髓神经细胞,划痕法建立周围神经损伤模型,用Griess法间接测定NO含量.结果:损伤组的NO含量比非损伤组高,损伤时人参皂苷培养组的NO含量比常规培养基组的含量低.结论:周围神经损伤时NO含量增高,人参皂苷保护神经作用可能通过抑制NO释放实现的.
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肝细胞生长因子延长原代培养大鼠脊髓神经元的生存时间
目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对原代培养脊髓神经元的保护作用.方法 原代培养脊髓神经元转染不同滴度的绿色荧光蛋白或肝细胞生长因子重组腺病毒(Ad-GFP or Ad-HGF),用流式细胞仪检测转染率,PI-Hoechst双染色观察神经元生长状况.用ELISA、中性红、MTT和NSE-ELISA等方法分别检测Ad-HGF转染脊髓神经元后HGF的表达,以及HGF对神经元的保护和迁移作用.结果 在转染复数(M0I)为50时,Ad-GFP可高效转染脊髓神经细胞,且细胞生长状态好.转染Ad-HGF后,HGF能有效表达,同时HGF作用后的神经元活性明显高于对照组(P<0.05).并观察到HGF对脊髓神经元有明显促迁移作用.结论 HGF对体外培养的脊髓神经元有保护和迁移作用.
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培养的大鼠脊髓神经元中微管相关蛋白5与溶酶体的相关性
目的探讨微管相关蛋白5(MAP5)与溶酶体之间的相互关系. 方法神经细胞培养、免疫荧光细胞化学方法、激光共聚焦扫描显微镜. 结果在培养脊髓神经元中,MAP5及组织蛋白酶D均分布在胞质及突起中,融合图像中两者分布大致相似.分别使用Nocodazole及PMA处理后MAP5及组织蛋白酶D在培养脊髓神经元的变化具有一致性. 结论提示MAP5和溶酶体的形态及分布依赖于微管的完整性.
关键词: 脊髓神经元 微管相关蛋白5 溶酶体 激光共聚焦扫描显微镜 大鼠 -
体外培养脊髓神经元损伤后c-Jun蛋白表达
目的建立一个模拟脊髓全横断损伤后脊髓组分--原代培养的脊髓神经元损伤的模型.探讨中枢神经损伤后损伤应答基因c-jun的表达及变化.方法取Wistar大鼠(孕14 d)脊髓,培养10~12 d后,采用所设计的标准模板,直视下进行损伤.观察损伤前、后不同时间神经元的形态及即刻早期基因c-jun的表达及变化.结果脊髓神经元损伤10 min后胞核即有c-Jun标记,损伤2 h后多,而且阳性神经元的密度与划痕之间的距离呈明显的反比关系.结论受机械损伤的神经元中,c-jun表达阳性意味着此即刻早期基因产物已进入细胞核内起着"第三信使"的作用.
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rAAV-hGDNF对谷氨酸钠诱导原代培养大鼠胚胎脊髓神经元损伤的保护作用
目的探讨rAAV-hGDNF对谷氨酸钠诱导的大鼠脊髓神经元死亡的保护作用. 方法建立谷氨酸钠诱导体外培养大鼠脊髓神经元损伤模型,用自行包装的rAAV-hGDNF病毒感染原代培养大鼠脊髓神经元,经双醋酸荧光素和碘化丙啶法辨认存活细胞和死亡细胞,观察rAAV-hGDNF抑制兴奋性氨基酸对脊髓神经元的毒性作用;同时运用半定量RT-PCR法,以β-actin为内对照,检测脊髓神经元内NOS mRNA的表达. 结果 rAAV-hGDNF感染组的细胞死亡率为50%±0.02,对照组为59.25 %±0.023,统计分析两组有显著性差异(P<0.05).rAAV-hGDNF感染后的脊髓神经元N OS mRNA表达为0.97±0.05,未感染rAAV-hGDNF的对照组NOS mRNA表达为1.23±0.10 ,统计分析两组有显著性差异(P<0.01). 结论 rAAV-hGDNF能抑制兴奋性氨基酸诱导的神经元NOS的表达,增加体外培养的神经元对兴奋性氨基酸神经毒性的抵抗能力.
关键词: 胶质细胞源性神经营养因子 腺病毒相关病毒 脊髓神经元 一氧化氮合酶 -
疼痛刺激造成体内AMPA受体亚单位在脊髓神经元胞浆膜上再聚集
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实验性脊髓再生研究进展
成年哺乳动物脊髓神经元细胞已丧失有丝分裂能力,虽然损伤以后仍能够通过终末出芽、侧支出芽或代偿性出芽方式再生,但这种再生能力极为有限,很快夭折.这既与脊髓神经元周围环境有关,也与神经元内在因素有关,目前研究已取得一定的进展,本文就此作一综述.
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胶质细胞源性神经营养因子及其治疗脊髓损伤的研究进展
目前对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的治疗仍未取得突破性进展.近年来,随着对脊髓损伤及其修复机制的深入研究,发现神经营养因子在体内和离体的情况下都有维持损伤脊髓神经元的存活、促使轴突延伸等功能,在减轻脊髓继发性损伤及促进其修复过程中发挥重要作用 [1、2].
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神经元损伤修复机制研究的离体模型--体外培养原代神经元损伤模型的建立及损伤后c-Fos蛋白表达
目的:建立一个模拟脊髓全横断损伤后脊髓组分--原代培养的脊髓神经元损伤的模型.方法:取Wistar大鼠(孕14 d)脊髓,培养10~12 d后,采用所设计的标准模板,直视下进行损伤.观察损伤前后不同时间神经元的形态及即刻早期基因c-fos的表达变化.结果:在损伤8~12 h后,损伤两侧存活的神经元突起便开始朝着损伤部位生长,随着时间的延长,神经元突起甚至可跨越损伤处而延伸至对侧.c-fos基因在损伤后10 min即有表达,2 h达到高峰,随后逐渐下降.结论:此模型可用于模拟体外培养的脊髓神经元受到机械损伤以及观察神经元损伤后进行修复的一些分子事件,简便而可靠,实用性较强.
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周围神经损伤后运动神经元的保护
周围神经损伤后,不仅局部有病变,中枢神经元也发生一系列变化.神经元的变性坏死与损伤部位、损伤程度及伤者年龄有密切联系.胚胎期哺乳动物高位轴突损伤后,脊髓神经元接近100%死亡,成年动物轴突损伤后其脊髓神经元的病死率也在30%~100%.
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大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤中钙敏感受体对其凋亡的影响及意义
目的 探究大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤中钙敏感受体对其凋亡的影响及意义.方法 将新生SD大鼠脊髓神经元随机分为正常对照组、缺氧复氧组、激动剂(GdCl3)组和抑制剂(NPS-2390)组4组.采用95%氮气通入置有细胞培养板的密闭通气盒中15 min,37℃培养箱内培养1h,再用含2% B27、10%胎牛血清的Neurobasol-A液培养细胞24h复制缺氧复氧模型.应用免疫荧光技术鉴定脊髓神经元并观察钙敏感受体的表达定位,Westem blot法检测各组钙敏感受体及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达水平,激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙的变化,Tunel法观察各组细胞凋亡情况.结果 缺氧复氧组的钙敏感受体(=5.462,P=0.006)、细胞内游离钙(t=8.573,P=0.001)、细胞凋亡(t =4.899,P=0.008)、Caspase-3(t=5.118,P=0.007)和Bax (t=10.930,P=0.001)表达水平均明显高于对照组,激动剂组的钙敏感受体(t=4.975,P=0.008)、细胞内游离钙(t=4.899,P=0.008)、细胞凋亡(=7.746,P=0.002)、Caspase-3(=4.776,P=0.009)和Bax(t=5.281,P=0.006)表达水平均明显高于缺氧复氧组,抑制剂组的钙敏感受体(=3.674,P=0.021)、细胞内游离钙(t=3.846,P=0.018)、细胞凋亡(=4.281,P=0.013)、Caspase-3(t=3.521,P=0.024)和Bax(t=3.473,P=0.026)表达水平均明显低于缺氧复氧组;缺氧复氧组的Bcl-2表达水平明显低于对照组(t=6.242,P=0.003),激动剂组明显低于缺氧复氧组(t=3.028,P=0.004),抑制剂组明显高于缺氧复氧组(t=2.840,P=0.047).结论 在缺氧复氧损伤过程中,钙敏感受体表达增多,细胞内游离钙增加,脊髓神经元凋亡增多.
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脊髓缺血再灌流时脊髓神经元的电活动规律
脊髓损伤的救治是神经科学研究的难点,目前实验性药物治疗取得了较好的效果,但临床应用效果不理想,患者功能改善极为缓慢.加强损伤脊髓功能变化规律及其机制的研究十分必要.在脊髓电生理功能的研究方面,除大量诱发电位的研究外,有关损伤条件下神经元电活动、脊髓损伤电位及损伤电流等研究较少.本实验利用细胞外记录技术,观察脊髓缺血及再灌流损伤时脊髓神经元的电活动变化,以分析损伤条件下神经元功能的变化规律及其意义.
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脊髓全横断后腹角神经元NT-3的表达
目的 研究大鼠脊髓全横断后,NT-3在损伤部位相邻节段眷髓腹角神经元随时间的表达变化,为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据.方法 体重为250g左右成年SD大鼠48只,随机分为六组.分正常组、假手术组及胸10脊髓节段全横断术后1,3,7,14d组.动物到达存活时间后,应用免疫组织化学SABC法和图像分析技术检测NT-3在脊髓损伤相邻节段腹角的表达和分布.结果 正常组的NT-3免疫反应阳性细胞主要分布在腹角的大神经元和少量小神经元.损伤区上段的NT-3免疫反应阳性细胞数,在脊髓腹角的表达,均于术后1d组开始明显增高并达到高峰,术后3d、7d组逐渐回落,术后14d组接近正常水平.而损伤区下段的NT-3免疫反应阳性细胞数,在脊髓腹角的表达均于术后1d组开始明显增高,术后3d组达到高峰,于7d组开始下降,到14d组接近正常水平.结论 在脊髓全横断术后,脊髓腹角神经元对NT-3的需求增加,提示NT-3在脊髓修复中起重要作用.
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NO对单足致炎大鼠双侧脊髓背角FOS表达的影响
C-fos原癌基因是早期快反应基因大家族中的一员,当一定的刺激存在时,如细胞膜去极化、有神经递质或生长因子存在时,在许多不同类型的细胞中均可诱导c-fos的表达.其蛋白产物(FOS)可以通过免疫组化技术得以确认.刺激初级传入纤维可迅速诱导大鼠脊髓神经元内c-fos的表达.有证据表明c-fos可作为伤害性刺激后神经元兴奋性突触传递的标志物.
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小剂量氯胺酮用于术后镇痛的研究及其临床价值
N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA受体)的发现和它对疼痛过程及脊髓神经元可塑性变化的影响重新引起人们对氯胺酮(NMDA受体拮抗剂)作为潜在抗痛觉过敏药物的兴趣.
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丹参与脊髓损伤后神经元自我修复机制的实验研究
脊髓损伤(SCI)是一种发生率很高的中枢神经系统(CNS)损伤,每年全球有数百万患者发病,且发病率呈逐年增高的趋势。因此有学者把21世纪的前十年称为“脊髓年”[1]。SCI的继发性损伤是中枢神经系统功能障碍的主要原因,其中包括缺血再灌注损伤机制、兴奋性氨基酸的毒性作用、炎性因子学说、凋亡学说等机制[2]。这些机制在损伤后的不同时间段发生作用,并互相交织在一起,因而使得SCI很难彻底地治愈。本研究拟通过观察丹参对大鼠SCI后脊髓神经元再生情况的影响,以揭示其参与脊髓神经元再生的机制,为临床SCI的治疗提供实验依据。
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大鼠肢体缺血再灌注损伤后脊髓神经元Bax Fas的表达及前列地尔的干预效应
肢体缺血再灌注损伤(IRI)防治的终目的是促使肢体功能恢复,而神经系统作为支配肢体功能的关键系统,在肢体IRI的研究中,许多重要问题还缺乏基础实验予以阐明.本文拟探讨在肢体IRI过程中,脊髓相应节段神经元的分布特点及其初步的神经生物学特征,并观察前列地尔预处理对脊髓神经元功能的影响,旨在为进一步研究肢体IRI的中枢病理特征提供一些形态学证据,并为其药物防治提供一些思路.
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电镜观察培养脊髓神经元溶酶体的形态及影响因素
目的探讨初代培养脊髓神经元中线状溶酶体(NLY)与圆形溶酶体(SLY)的超微结构及其影响因素.方法应用电镜酸性磷酸酶(ACPase)细胞化学方法和透射电镜观察初代培养脊髓神经元中NLY与SLY的超微结构.结果培养脊髓神经元中存在ACPase阳性的NLY与SLY.诺考达唑处理后NLY明显减少,SLY明显增多,主要分布在核周.佛波醇酯(PMA)处理后可见NLY明显增多,靠近质膜处比靠近核膜处多,在突起中NLY沿着长轴分布,SLY明显减少.结论初代培养脊髓神经元中溶酶体的形态受微管解聚剂诺考达唑及微管聚合剂PMA的调控.
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培养脊髓神经元中微管相关蛋白5的表达
目的探讨初代培养脊髓神经元中微管相关蛋白(MAP5)的表达特征及其调节因素.方法应用荧光免疫细胞化学检测初代培养脊髓神经元中MAP5的表达.结果 MAP5在培养脊髓神经元中呈网状分布在胞浆及突起中.诺考达唑引起微管解聚及MAP5的结构破坏,荧光物质分布不均匀,突起呈串珠或断裂.PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)能诱发微管及MAP5聚合,胞浆中荧光物质呈疏松的网状结构.结论 MAP5在初代培养脊髓神经元胞浆及突起中明显表达,且表达受微管解聚剂诺考达唑及微管聚合剂PMA的调控.