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环介导等温扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用评估
目的 进行环介导等温扩增法(LAMP法)快速检测结核分枝杆菌的临床验证与应用,评估该方法在结核病临床诊断中的效能.方法 选取广东6地市专业结核病防治机构(简称“结防机构”)的肺部不同疾病及健康人员的痰标本2129份,分别采用直接涂片法、罗氏固体培养法及LAMP法检测痰标本中结核分枝杆菌；另广州、汕头两市337例结核病患者的痰标本浓缩处理后进行实时荧光定量(qPCR)及LAMP两种方法检测.结果 2129例痰标本中,直接涂片法、罗氏固体培养法和LAMP法的阳性检出率分别为13.2％(282/2129)、21.7％(463/2129)和20.3％(432/2129)；同罗氏培养法相比,LAMP法灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值分别为89.1％(432/485)、95.5％(1570/1644)、85.4％(432/506)和96.7％(1570/1623);337例浓缩处理后的痰标本qPCR阳性率为35.0％(118/337),LAMP阳性率为35.9％ (121/337);LAMP法同直接涂片法检测、罗氏固体培养法和qPCR法比较,检测结果实际一致率分别为87.9％(Kappa值=0.612)、96.1％(Kappa值=0.89)和91.4％(Kappa值=0.812).结论 LAMP法用于痰标本中结核分枝杆菌检测,其效能同罗氏培养法及qPCR法相当,同直接涂片法相比,LAMP法能够大幅提高阳性检出率,具有很好的临床应用和推广前景.
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不同靶点环介导等温扩增技术对结核分枝杆菌检测的比较研究
目的 探讨针对hspX、gyrB、IS6110靶基因设计引物,采用环介导等温扩增技术(LAMP)检测对结核病的诊断价值.方法 肺结核组为我院收治的68例肺结核患者,对照组为我院收治的45例肺癌患者和20名健康体检者,收集痰标本后采用LAMP、定量PCR及涂片法进行分析,评价LAMP技术的临床应用价值.采用LAMP及定量PCR分别对结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA样品进行检测,评价LAMP技术的检测限;同时对鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、偶发分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、海分枝杆菌、龟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌等8种非结核分枝杆菌菌株及4株普通菌标准株包括大肠埃希菌(ATCC25922)、阴沟肠杆菌(ATCC700323)、铜绿假单胞菌(ATCC 27853)和金黄色葡萄球菌标准菌株(ATCC29213)进行鉴定,评价LAMP的敏感度和特异度.结果 本研究采用hspX、IS6110和gyrB靶基因进行LAMP检测,对H37Rv的DNA样品检测限分别为320 amol/L,320 amol/L和32 amol/L.LAMP对8种非结核分枝杆菌和4种普通菌检测结果为阴性.对照组中健康志愿者定量PCR,涂片法及LAMP方法的结果均为阴性,对照组中肺癌患者中hspX,gyrB,IS6110LAMP方法和定量PCR阳性结果2例,3种靶基因位点的LAMP和定量PCR检测的特异度均为96.9％(63/65).针对hspX、gyrB、IS6110靶基因进行LAMP检测,对68例肺结核患者痰标本检测的敏感度分别为75.0％(51/68),77.9％(53/68),73.5％(50/68);定量PCR检测的敏感度为79.4％(54/68).3种不同基因位点LAMP技术与定量PCR检测的敏感度比较差异无统计学意义(x2=0.82,P＞0.05),但均高于涂片法的38.2％(26/68),L AMP技术与涂片法之间差异均有统计学意义(x2=18.71,x2=22.02,x2=17.18,P值均＜0.01).结论 hspX、gyrB、IS6110 LAMP技术检测的敏感度和特异度均较高,尤其是针对gyrB靶基因位点进行LAMP检测的敏感度与定量PCR接近,并且高于涂片法;如果结合不同基因位点LAMP技术的检测结果进行评判可以提高该技术的敏感度.
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利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术的诊断效果对比研究
目的 评价利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert Mtb/RIF)检测临床标本诊断结核病和耐利福平结核病的效能.方法 2011年1-5月从解放军第三○九医院、广州市胸科医院和河南省疾病预防控制中心3家单位,连续收集门诊就诊的1971例疑似结核病患者的痰标本,进行涂片、金标准培养和金标准比例法传统药敏试验和GeneXpert Mtb/RIF检测.应用SPSS 11.5统计软件对GeneXpert Mtb/RIF与不同检测方法进行敏感度和特异度分析,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与涂片及培养比较,GeneXpert Mtb/RIF检测1968例(1971例中有3例污染排除)痰标本诊断结核病的敏感度和特异度分别为93.27％(748/802)、91.93％(797/867)和91.60％(1068/1166)、95.55％(1052/1101);与临床诊断比较,GeneXpert Mtb/RIF检测1945例(1971例中有26例无法定诊)痰标本诊断结核病的敏感度和特异度分别为78.66％(822/1045)、98.67％(888/900);与金标准传统药敏试验比较,GeneXpert Mtb/RIF检测797例标本诊断耐利福平结核病的敏感度和特异度分别为97.92％(188/192)、100.00％(595/595).结论 GeneXpert Mtb/RIF是一种检测痰标本诊断结核病及耐利福平结核病的快速简便、自动化、敏感度和特异度较高的分子生物学方法,适用于结核病和耐利福平结核病的临床诊断.
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交叉引物核酸恒温扩增技术在基层实验室诊断肺结核的应用价值
目的 评价交叉引物核酸恒温扩增技术(cross-priming amplification,CPA)在基层实验室诊断肺结核的应用价值.方法 选取河南省新密市县级结核病门诊于2012年3月1日至7月31日和2014年10月1日至2015年8月31日分别连续纳入就诊的673例(A组)和916例(B组)初诊肺结核可疑患者作为研究对象.收集其痰标本分别进行痰涂片镜检、痰培养、CPA检测和多色荧光巢式PCR(GeneXpert MTB/RIF,GeneXpert)检测(仅2014年10月1日至2015年8月31日纳入就诊患者进行此项检测),比较4种检测方法的检测效能.结果 A组673例患者中诊断为肺结核者273例(40.56％),诊断为非结核病者400例(59.44％);B组916例患者中诊断为肺结核者252例(27.51％),诊断为非结核病者664例(72.49％).A组患者中,培养阳性者86例(阳性率为12.78％),CPA检测阳性78例(11.59％),以培养结果为标准,CPA检测的敏感度、特异度、一致率分别为83.72％、98.98％、97.03％(Kappa =0.86);共采集患者痰标本2019份,其中有1346份痰标本进行培养和CPA检测,培养阳性154份(11.44％),CPA检测阳性145份(10.77％),以培养结果为标准,CPA检测的敏感度、特异度分别为85.71％、98.91％.B组患者培养阳性80例(阳性率为8.73％);涂片阴性培养阳性22例;CPA检测阳性96例(10.48％),以培养结果为标准,CPA检测敏感度、特异度、一致率分别为87.50％、96.89％、96.07％(Kappa=0.77).B组患者,GeneXpert检测阳性104例(11.04％),CPA与GeneXpert检测的一致率为98.25％(Kappa=0.91);针对涂片阴性培养阳性的22例标本,CPA与GeneXpert检测均有17例阳性,敏感度均为77.27％.结论 CPA作为简单、快速、稳定的分子方法,临床检测痰标本中的结核分枝杆菌有较高的敏感度和特异度,且与GeneXpert具有相同的检测能力,适于基层实验室对肺结核患者的诊断.
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GeneXpert MTB/RIF在HIV阴性泌尿系结核中的诊断价值
目的 评价Gene Xpert MTB/RIF(简称“Xpert”)在HIV阴性泌尿系结核中的诊断价值.方法 连续纳入2016年2月至2017年2月在沈阳市胸科医院、上海市公共卫生临床中心、武汉市肺科医院、深圳市第三人民医院等4家结核病专科医院就诊的119例HIV阴性疑似泌尿系结核的患者.收集所有患者的24 h尿沉渣标本,每份标本同时进行涂片查抗酸杆菌、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)分枝杆菌培养、Xpert检测.以临床确定诊断作为金标准,评价Xpert检测尿液标本的敏感度和特异度,对所有培养阳性菌株进行利福平药物敏感性检测,并对Xpert检测结果与MGIT 960药敏检测结果一致性进行比较.结果 119例患者中有59例(49.6％)患者临床确诊为泌尿系结核,60例(50.4％)患者临床诊断为非泌尿系结核.59例泌尿系结核患者中,25例(42.4％)MGIT 960分枝杆菌培养阳性;34例(57.6％)按临床表现、泌尿系影像、抗结核治疗效果等临床标准诊断为泌尿系结核患者.以临床确诊为金标准,Xpert检测的敏感度为64.4％(38/59),特异度为100.0％(60/60),抗酸杆菌涂片法敏感度为11.9％(7/59),两者敏感度比较差异有统计学意义(x2 =25.97,P＜0.001);MGIT 960分枝杆菌培养法敏感度为42.4％(25/59),与xpert检测比较差异有统计学意义(x2=11.27,P=0.001).在MGIT 960分枝杆菌培养阳性的患者中,Xpert检测的敏感度为96.0％(24/25).涂片和培养均阴性而临床诊断为泌尿系结核的患者Xpert检测的阳性率为43.8％(14/32).结论 Xpert检测尿液标本中结核分枝杆菌的敏感度和特异度高,并且可以同时检测利福平耐药.Xpert优于抗酸杆菌涂片及BACTEC MGIT 960分枝杆菌液体培养等传统泌尿系结核诊断方法,可用于早期诊断HIV阴性的泌尿系结核.
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实时荧光核酸恒温扩增检测技术在结核病诊断中的临床应用
目的 评估实时荧光核酸恒温扩增检测技术(simultaneous amplification and testing,SAT)在结核病患者的痰液、体液及病灶组织等标本中检测结核分枝杆菌的价值.方法 收集在广州市胸科医院就诊的疑似结核病患者的痰液734份、体液标本94份(包括68份胸腔积液、21份脑脊液、5份关节积液,以下统称“体液”)及病灶组织标本76份,共计904份标本.同时采用SAT法、改良罗氏培养法进行检测,培养阳性者进行基因芯片菌种鉴定.SAT法与改良罗氏培养法结果不相符的标本,用结核分枝杆菌聚合酶链(polymerase chain reaction technology for Mycobacterium tuberculosis,PCR-TB)荧光诊断试剂盒进行检测.采用x2检验比较SAT法与改良罗氏培养法对结核病患者的阳性检出率.结果 以改良罗氏培养结果为金标准,则SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的敏感度、特异度、符合率分别为90.20％(230/255)、92.48％(443/479)、91.69％(673/734);94.74％(18/19)、81.33％(61/75)、84.04％(79/94);100.00％(14/14)、77.42％(48/62)、81.58％(62/76).以扩大金标准(培养+PCR法)比对,则SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的敏感度、特异度、符合率分别为96.30％(260/270)、99.35％(461/464)、98.23％(721/734);96.97％(32/33)、100.00％(61/61)、98.94％(93/94);100.00％(27/27)、97.96％(48/49)、98.68％(75/76).改良罗氏培养法和SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的阳性检出率分别为34.74％(255/734)和36.24％(266/734)、20.21％(19/94)和34.04％(32/94)、18.42％(14/76)和36.84％(28/76);痰标本两者的阳性率比较,差异没有统计学意义(x2=0.36,P＞0.05).体液与病灶组织标本中,SAT法较改良罗氏培养法的阳性率高出13.83％和18.42％,差异有统计学意义(x2值分别为4.55、6.44,P值均＜0.05).结论 SAT法检测痰液、体液及病灶组织标本中的结核分枝杆菌,具有快速、敏感度和特异度较高的优点,可提高结核分枝杆菌的检出率.
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三种检测技术诊断老年肺结核效能的比较研究
目的 探讨结核分枝杆菌及利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(GeneXpert MTB/RIF)技术,发光二极管(light emitting diode,LED)荧光染色法和BACTEC MGIT 960系统液体培养(简称“MGIT液体培养”)诊断老年肺结核的价值.方法 搜集2013-2015年绍兴市立医院肺科和呼吸感染科收住入院的老年肺结核患者250例,均通过实验室病原学检测、影像学和临床症状综合分析而得到临床确诊.其中,男159例,女91例;年龄65～89岁,平均(70.3±6.2)岁.分别采用LED荧光染色法、MGIT液体培养、GeneXpert MTB/RIF技术对上述患者的250份痰标本进行检测.各组计数资料的比较采用x2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 LED荧光染色法、MGIT液体培养、GeneXpert MTB/RIF检测的阳性检出率分别为36.00％(90/250),48.40％(121/250)和50.40％(126/250).GeneXpert MTB/RIF检测阳性率(50.40％)高于LED荧光染色法(36.00％),二者差异有统计学意义(x2=10.56,P＜0.01);高于MGIT液体培养(48.40％),但二者差异无统计学意义(x2=0.20,P＞0.05);MGIT液体培养阳性率(48.40％)高于LED荧光染色法(36.00％),二者差异有统计学意义(x2=7.88,P＜0.01).以MGIT液体培养检测结果为标准,GeneXpert MTB/RIF技术的检测敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为95.93％(118/123)、93.70％(119/127)、93.65％(118/126)、95.97％(119/124);两者检测结果具有极好的一致性(Kappa值为0.90).结论 本研究3种检测技术中GeneXpert MTB/RIF技术的检测效能较高,并且与MGIT液体培养检测结果具有高度一致性,具有很好的临床应用和推广价值.
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Xpert MTB/RIF检测技术在结核病诊断中的价值
目的 评价Xpert MTB/RIF检测技术在综合性医院结核病诊断中的价值.方法 收集2016年6月至2017年8月入住株洲市中心医院疑似结核病患者的各类标本376份,其中痰标本227份(60.37％),肺泡灌洗液109份(28.99％),脑脊液21份(5.59％),胸腔积液15份(3.99％),其他标本4份(1.06％,包括引流液、脓液、分泌物、尿液各1份),分别进行GeneXpert MTB/RIF检测(简称“Xpert法”)、夹层杯液基集菌抗酸染色涂片镜检法(简称“夹层杯法”)和传统固体罗氏培养法(简称“固体培养法”)检测结果的比较和临床分析.采用SPSS 19.0软件进行数据资料处理,计数资料采用x2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 376例疑似结核病患者的各类标本中,终临床诊断为结核病349例,非结核病27例.Xpert法检测阳性率(37.50％,141/376)明显高于夹层杯法(22.87％,86/376)和固体培养法(17.82％,67/376)(x2值分别为19.09、36.39,P值均＜0.05);以临床诊断结果为标准,Xpert法检测敏感度(40.11％,140/349)明显高于夹层杯法(23.50％,82/349)和固体培养法敏感度(19.20％,67/349)(x2值分别为19.86、35.98,P值均＜0.05),且Xpert法检测结果与临床确诊结果的一致性(K=0.080)高于夹层杯法(K=0.016)与固体培养法(K=0.033).140份Xpert法检测阳性的标本中利福平耐药率(15.71％,22/140)与63份固体培养法检测阳性的标本中利福平耐药率(14.29％,9/63)差异无统计学意义(x2=0.07,P＞0.05),且耐利福平患者一致.结论 Xpert法检测技术操作简单、快捷、敏感度高,对综合性医院早期诊断、治疗结核病具有很高的临床应用价值.
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GeneXpert MTB/RIF检测在肺结核诊断中的价值评估
目的 评估GeneXpert MTB/RIF检测方法对结核分枝杆菌(MTB)及其利福平耐药性检测的准确性和可行性.方法 于2012年11月至2015年11月,收集来自河南省南阳市第六人民医院和辖区11个县(区)结核病防治机构的1154例疑似肺结核患者的痰标本.患者痰标本均于河南省南阳市第六人民医院分别进行涂片镜检、固体培养、比例法药敏试验和GeneXpert MTB/RIF检测,分析比较GeneXpert MTB/RIF方法与传统方法检测MTB及利福平耐药性的检测效能.结果 以固体培养结果为金标准,GeneXpert MTB/RIF方法检测MTB的敏感度和特异度分别为90.0% (522/580)和89.5% (418/467);以传统比例法药敏试验结果为金标准,GeneXpert MTB/RIF方法检测MTB利福平耐药的敏感度和特异度分别为87.7% (64/73)和96.6% (460/476).结论 GeneXpert MTB/RIF检测MTB有较高的敏感度和特异度,在肺结核快速早期诊断及利福平耐药性检测方面有较好的应用前景.
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利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究
目的 评估利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/ RIF)对结核病及利福平耐药性的检测效能.方法 选取588例初诊患者痰标本,分别进行涂片镜检、固体培养、传统比例法药敏试验和Xpert Mtb/RIF检测,分析Xpert Mtb/RIF方法检测痰标本中 Mtb及其耐药性的敏感度和特异度.结果 以固体培养试验结果作为金标准,Xpert Mtb/RIF方法检测痰标本Mtb的敏感度和特异度为95.0％(345/363)和89.6％(147/164),以传统比例法药敏试验结果为金标准,Xpert Mtb/RIF方法检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为89.1％(41/46)和96.3％ (289/300).结论 Xpert Mtb/RIF检测敏感度和特异度较高,在Mtb及其利福平耐药快速检测方面具有比较好的应用前景.
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Xpert Mtb/RIF对儿童结核病诊断价值的Meta分析
目的 评估利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)对儿童结核病的诊断价值.方法 在数据库中检索建库至2015年3月正式发表的文献,在英文数据库(PubMed、Cochrane、web of science)中检索词为“Xpert”、“tuberculosis”、“child”或“children”或“pediatric”;在中文数据库(中国期刊全文数据库、中国科技期刊全文数据库、万方数据库)中检索词为“Xpert”、“结核”、“儿童”.纳入标准:公开发表的针对Xpert Mtb/RIF的诊断试验研究;研究对象包含疑似结核病患儿;金标准为固体或液体细菌培养;能获得完整的四格表数据.排除标准:非诊断试验研究;研究对象不包含疑似结核病患儿;金标准非细菌培养;无法提取儿童的数据.2名研究者独立进行资料提取.分别采用Revman 5.3和Meta-Disc 1.4统计软件进行文献质量评价和Meta分析.结果 初次检索得到209篇文献.根据纳入排除标准后共纳入来自7个国家的13篇文献,文献中共有4661例临床样本.数据分析表明,Xpert Mtb/RIF用于诊断儿童结核病的汇总敏感度为75％(95％CI:72％～79％);汇总特异度为97％(95％CI:96％～97％),SROC曲线下面积为88％.对于采用痰、胃液和鼻咽抽提物三种样本的研究进行Meta分析,结果表明Xpert Mtb/RIF试验检测痰的敏感度优(76％),鼻咽抽取物差(50％);痰和鼻咽抽取物的特异度(99％)优于胃液(93％).对采用了二次取样方法的三项研究进行了Meta分析,结果表明二次取样可显著提高试验的敏感度(由54％提高至71％),且不明显影响试验的特异度(均为99％).结论 Xpert Mtb/RIF 对儿童结核病具有较高的诊断应用价值.
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实时荧光核酸恒温扩增检测技术辅助诊断肺外结核的临床价值
目的 探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术(simultaneous amplification and testing,SAT)辅助诊断肺外结核的价值.方法 收集2016年1月至2017年12月期间重庆市公共卫生医疗救治中心结核科、普通外科与骨科收治的482例患者肺外样本(主要为病变部位的脓液或手术取出物),根据患者病历记录的临床诊断分为肺外结核(试验组,433例)和排除结核病的其他疾病(对照组,49例).所有标本同步采用培养法(联合罗氏培养法和BACTEC MGIT 960液体培养法两种方法,只要其中一种培养阳性就视为“培养法”结果为阳性)和SAT检测结核分枝杆菌,并对培养法阳性、SAT检测结果阴性的标本进行菌种鉴定.分别与培养法、患者临床诊断比较,并分析SAT检测的敏感度、特异度和临床辅助诊断肺外结核的价值.采用SPSS 13.0软件进行分析,计数资料采用x2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 试验组127例培养法阳性的标本中TB-SAT检测阳性107例,阴性20例;306例培养法阴性的患者中TB-SAT检测阳性73例,阴性233例.对照组1例标本培养法阳性、TB-SAT检测阴性,其余48例标本培养法与TBSAT检测均为阴性.以培养法为标准,SAT检测MTB的敏感度、特异度分别是83.6％(107/128)、79.4％(281/354).与患者临床诊断相比,则培养法的敏感度、特异度分别为29.3％(127/433)、98.0％(48/49);SAT检测MTB的敏感度、特异度分别为41.6％(180/433)、100.0％(49/49).培养法检测阳性率为29.3％(127/433),SAT法检测阳性率为41.6％(180/433),两者检测阳性率比较,差异有统计学意义(x2=14.17,P＜0.05).结论 SAT检测技术辅助诊断肺外结核具有方便快速、检出率高、敏感度和特异度高等优势,具有较高的临床价值.
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恒温扩增实时荧光检测技术检测痰液对肺结核患者诊断价值的Meta分析
目的 评估结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时荧光检测技术(simultaneous amplification and testing for Mycobacterium tuberculosis,SAT-TB)检测痰液标本对肺结核的快速诊断价值.方法 检索中国学术期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库、维普数据库、PubMed、ScienceDirect和Cochrane图书馆等数据库,收集有关探讨SAT-TB检测痰液对肺结核诊断价值的所有文献,检索起止时间为建库至2016年12月.拟定入选标准、排除标准,2名研究者分别独立进行文献资料提取及文献质量评估,采用软件Meta-DiSc 1.4进行Meta分析.结果 共检索出168篇文献,依据入选标准和排除标准,纳入了9篇文献进行分析,包含了5137例临床患者痰标本,所有标本均进行了SAT-TB检测和痰结核分枝杆菌培养.9篇文献质量采用QUADAS-2评价表评价,文献偏倚风险主要为患者选择方面.Meta分析结果显示,SAT-TB法检测痰液诊断肺结核的汇总敏感度为87.0％ (95％CI:86.0％～89.0％),特异度为90.0％(95％CI:88.0％～91.0％),阳性似然比(positive likelihood ratio,PLR)为6.91(95％CI:4.04～11.84),阴性似然比(negative likelihood ratio,NLR)为0.09(95％CI:0.06～0.15).结论 SAT-TB检测痰液对肺结核快速诊断具有较高的敏感度和特异度,值得临床进一步推广应用.
关键词： 结核 肺 诊断技术和方法 核酸扩增技术 Meta分析(主题) -
痰标本RNA恒温扩增技术对活动性肺结核的临床诊断价值
目的 评价结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时检测法(SAT-TB)对活动性肺结核的临床诊断价值.方法 收集2014年1月至2014年12月上海市肺科医院收治的活动性肺结核患者321例[结核组,包括确诊肺结核(275例)及临床诊断肺结核(46例)]及肺部其他疾病患者49例(对照组)的痰标本,分别采用SAT-TB法、涂片镜检法及结核分枝杆菌快速培养法(采用“BACTECTM MGITTM 960全自动分枝杆菌检测系统”,简称“BACTEC960”)进行检测,根据检测结果分别计算敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值.应用SPSS 19.0软件进行统计学分析,样本“率”的比较采用x2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 321例结核组患者及49例对照组患者的痰标本,分别用SAT-TB法、涂片镜检法及BACTEC 960培养法检测,敏感度分别为74.77％(240/321)、28.04％(90/321)、85.05％(273/321).SAT-TB法敏感度显著高于涂片镜检法,差异有统计学意义(x2=140.297,P＜0.01);SAT-TB法敏感度低于BACTEC960培养法,差异有统计学意义(x2=10.565,P＜0.01).涂片镜检法与SAT-TB法的特异度均为100.00％(49/49),而BACTEC960培养法的特异度为95.92％ (47/49);3种检测方法特异度比较,差异无统计学意义(Z=4.055,P＞0.05).273例BACTEC 960培养法检测阳性的肺结核患者中,SAT-TB法检测阳性230例,敏感度为84.25％(230/273);涂片镜检法阳性88例,敏感度为32.23％ (88/273),两者敏感度比较差异有统计学意义(x2=151.847,P＜0.01).SAT-TB法检测275例确诊肺结核患者的敏感度为84.36％ (232/275),阳性预测值为100.00％ (232/232),阴性预测值为53.26％ (49/92).结论 SAT-TB法敏感度高于涂片镜检法,特异度与BACTEC 960培养法相近,对于涂阴活动性肺结核有一定临床诊断价值.
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环介导等温扩增技术检测痰样结核分枝杆菌临床价值评价
目的 评价环介导等温扩增技术(LAMP)检测痰标本中结核分枝杆菌的效果和临床价值.方法 收集深圳市慢性病防治中心2013年4 9月350例结核病专科门诊就诊者的痰标本,其中肺结核患者216例(初诊患者93例,其中涂阳患者41例,涂阴患者52例;随访治疗患者123例),非结核病患者134例(含非结核分枝杆菌感染11例).用涂片法、罗氏培养法、实时PCR法和LAMP法检测样本中的结核分枝杆菌,以临床诊断为标准,用SPSS 17.0软件进行统计学分析,计算LAMP对初诊患者的检出率和检测敏感度和特异度.不同方法之间检测效率的比较采用x2检验,P＜0.05为差异有统计学意义.LAMP与实时PCR法检测的一致性评价采用Kappa检验.结果 上述4种方法检测初诊肺结核患者痰样的敏感度分别为44.1％(41/93)、52.7％(49/93)、48.4％(45/93)、48.4％(45/93),L AMP检测敏感度与实时PCR一致;高于涂片法,低于罗氏培养法,但差异均无统计学意义(x2=0.75,P＞0.05;x2=0.75,P＞0.05).LAMP对初诊涂阳患者的总检出率为90.2％(37/41),对初诊涂阴患者的检出率为15.4％(8/52),诊断肺结核的特异度为100.0％(134/134).对123例治疗随访的患者,涂片、培养、实时PCR和LAMP 4种方法单次检测的阳性率分别为26.0％(32/123)、14.6％(18/123)、31.7％(39/123)和30.9％(38/123).LAMP和实时PCR检测总体一致率为96.9％(339/350),Kappa值为0.91.结论 LAMP检测痰样本结核分枝杆菌用于结核病诊断具有良好的特异度,总体检测效能和实时PCR具有很高一致性,具有临床应用价值.
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快速核酸提取环介导等温扩增检测技术在肺结核诊断中的应用评价
目的 评估快速核酸提取环介导等温扩增检测(PURE-LAMP)技术在肺结核临床诊断中的应用价值.方法 选取2012年4月至2013年1月在河南省新乡市结核病防治所和获嘉县疾病预防控制中心就诊的初诊肺结核可疑症状者作为研究对象,共1378例.每例患者留取3份痰标本,分别进行痰涂片镜检、固体培养和PURE-LAMP检测.以临床诊断结果为标准,比较痰涂片镜检、固体培养和PURE-LAMP法检测MTB的效能;以固体培养试验结果为标准,评估PURE-LAMP检测MTB的效能.结果 以临床诊断结果为标准,痰涂片镜检、固体培养和PURE-LAMP检测MTB的敏感度分别为23.40％ (168/718)、58.91％(423/718)和49.44％ (355/718).PURE-LAMP检测敏感度高于痰涂片镜检(x2=185.02,P=0.000),但低于固体培养试验(x2=46.24,P=0.000).以固体培养试验结果为标准,PURE-LAMP检测MTB的敏感度和特异度分别为90.24％ (333/369)和96.86％(924/954),涂阴患者中检测敏感度和特异度分别为82.52％(170/206)和97.06％(924/952).结论 PURE-LAMP检测操作简单,敏感度和特异度较高,在我国县(区)级结核病防治机构具有一定的应用前景.
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Xpert Mtb/RIF检测技术诊断肺结核和肺外结核的价值
目的 探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)在结核病诊断中的临床应用价值.方法 对200例初治结核病患者标本,包括痰液、肺泡灌洗液、胸腹腔积液和脑脊液各50例,分别进行抗酸染色法、固体培养法、药物敏感性试验(简称“药敏试验”)及Xpert Mtb/RIF检测,分别以固体培养结果和药敏试验结果为金标准,分析Xpert Mtb/RIF检测标本中结核分枝杆菌及其利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值.Xpert Mtb/RIF检测和金标准检测进行一致性检验(Kappa检验),K＞0.8认为两者一致性极好.结果 以固体培养法检测结果为准,Xpert Mtb/RIF检测技术,以及抗酸染色法总体敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值分别为94.52％ (69/73)、90.55％(115/127)、85.19％(69/81)、96.64％(115/119)和0.83,以及65.75％(48/73)、96.06％(122/127)、90.57％(48/53)、82.99％(122/147)和0.66;以比例法药敏试验结果为准,Xpert Mtb/RIF检测技术检测利福平耐药性的总体敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值分别为93.75％(15/16)、100.00％(53/53)、100.00％(15/15)、98.15％(53/54)和o.96.结论 XpertMtb/RIF法可快速检测肺内、外结核分枝杆菌及其耐药性,具有良好的应用前景.
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RNA恒温扩增实时荧光检测技术对结核性胸腔积液的诊断价值
目的 探讨RNA恒温扩增实时荧光检测技术(simultaneous amplification and testing,SAT-TB)对结核性胸腔积液的诊断价值.方法 选取2014年6月至2016年6月聊城市传染病医院收治的有胸腔积液的患者210例作为研究对象,其中143例临床诊断为结核性胸膜炎,作为结核性胸膜炎组;其余67例患者作为对照组.应用涂片法、改良罗氏培养法、SAT-TB法检测研究对象胸腔积液标本,比较各检测方法的检测效能.结果 SAT TB检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为36.36％(52/143)、98.51％(66/67)、98.11(52/53)、42.04％(66/157).SAT-TB检测的敏感度明显高于涂片法[3.50％(5/143)]及罗氏培养法[20.28％(29/143)],差异均有统计学意义(x2=19.08,P=0.021;x2=9.12,P＜0.01).SAT-TB法检测完成时间为1～2 h,罗氏培养法完成时间为6～8周.结论 SAT-TB法能快速检测胸腔积液中的结核分枝杆菌,敏感度高于涂片法和罗氏培养法.
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GeneXpert MTB/RIF技术对菌阴肺结核患者辅助诊断的价值
目的 探讨GeneXpert MTB/RIF技术对菌阴肺结核患者的辅助诊断价值及其在利福平耐药检测中的应用价值.方法 收集山东省滨州市结核病防治院在2014年6月至2016年2月期间住院并临床确诊的菌阴肺结核患者126例(初治79例、复治47例)和非结核病患者51例(肺癌患者25例、肺炎患者17例、支气管扩张患者9例)的晨痰标本,采用GeneXpert MTB/RIF法检测结核分枝杆菌的阳性率;再采用纤维支气管镜刷检涂片法、肺泡灌洗液结核分枝杆菌培养法和GeneXpert MTB/RIF法检测126例菌阴肺结核患者的结核分枝杆菌阳性率,对三者阳性率进行比较;采用比例法对肺泡灌洗液培养阳性菌株作利福平耐药性检测,将检测结果与GeneXpertMTB/RIF法检测结果作对比.结果 126例住院菌阴肺结核患者的晨痰采用GeneXpert MTB/RIF法进行检测,其中检出阳性49例,占38.9％(49/126).79例初治菌阴肺结核患者通过刷检涂片法检测抗酸杆菌阳性14例,阳性率为17.7％(14/79),肺泡灌洗液培养阳性18例,阳性率为22.8％(18/79),GeneXpert MTB/RIF法检测阳性40例,阳性率为50.6％(40/79).GeneXpert MTB/RIF法检测阳性率均明显高于刷检涂片法和培养法,差异均有统计学意义(x2=19.02,P=0.005;x2=13.18,P=0.005);刷检涂片法与培养法比较,差异无统计学意义(x2=0.63,P=0.500).47例复治菌阴肺结核患者采用刷检涂片法检测抗酸杆菌阳性11例,阳性率为23.4％(11/47);肺泡灌洗液培养阳性14例,阳性率为29.8％ (14/47);GeneXpert MTB/RIF法检测阳性27例,阳性率为57.4％(27/47).GeneXpert MTB/RIF法检测阳性率均明显高于刷检涂片法和培养法,差异均有统计学意义(x2=11.31,P=0.005;x2=7.31,P=0.005);涂片法与培养法比较,差异无统计学意义(x2=0.49,P=0.500).对肺泡灌洗液培养阳性的32例患者进行利福平耐药性检测,检测结果与GeneXpert MTB/RIF法检测结果一致,耐利福平的患者均为4例,占12.5％(4/32),且两种方法检测的4例患者相同.结论 GeneXpert MTB/RIF技术检测阳性率较高,对菌阴肺结核的早期诊断及判定对利福平是否耐药具有较高的临床应用价值.
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实时荧光核酸恒温放大检测(SAT)法对肺结核诊断价值的研究
目的 检测实时荧光核酸恒温放大检测(SAT)法对结核病诊断的作用.方法 收集172例疑似肺结核患者的痰液标本2份/例,1份进行涂涂片金-胺染色,另一份进行罗氏培养基培养与菌种鉴定及SAT法检测结核分枝杆菌,如SAT法和培养结果不符合则使用痰荧光定量PCR法(FQ-PCR)进行复核.结果 172例人组患者中有156例根据临床及实验室结果确诊为肺结核病.如果以Mtb培养鉴定结果和荧光PCR结果作为判定金标准,SAT检测的敏感度和特异度分别为97.8％(89/91)和97.5％(79/81).如以临床诊断为标准.SAT诊断结核的敏感度为58.3％ (91/156),特异度为100.0％ (16/16).对于痰菌阳性肺结核患者,SAT阳性率为84.9％(79/93)；对于痰菌阴性患者,SAT 的阳性率为19.0％ (12/63).结论 SAT法可以作为临床对结核病的辅助诊断方法.
