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微波消解-原子荧光法快速联合检测尿中砷、汞含量
氢化物发生-原子荧光法是在酸性条件下,以硼氢化钠为还原剂,使砷生成砷化氢、使二价汞还原成元素汞,由载气带入石英原子化器,在高强度空心阴极灯的照射下产生原子荧光,荧光强度在一定范围内与砷、汞含量成正比,与标准系列比较定量.微波消解的方法是近年来产生的一种崭新的有前途的样品预处理技术,将样品放入含酸的密闭消解容器内,至于微波场中,密闭容器内的酸分子直接接受微波能被加热,导致样品迅速被消解.元素损失少,通常在5min内就可以将大部分的生物样品消解完全.
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UF-100全自动尿沉渣分析仪的质量保证
尿沉渣检查有较高的临床价值,但传统镜检法存在费时费力,重复性差,人为误差率较高,实验室间结果不具可比性等缺点.Sysmes公司生产的UF-100全自动尿沉渣分析仪应用流式细胞术和电阻抗相结合的原理,通过散射光强度、荧光强度及电阻抗信号对尿液中细胞、管型、细菌进行定量分析.
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新波时间分辨荧光仪原理及故障分析
时间分辨荧光仪是由苏州新波生物公司生产的,具有操作简单、性能稳定、快速准确等优点的仪器.现将仪器的测量原理及日常使用中的故障,分析如下.1测量原理通过应用三价稀土离子作为示踪物,标记蛋白质、多肽、激素等物质,待反应体系(如抗原抗体免疫反应、生物素亲和素反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤性反应等)发生后,用荧光分析仪测定后产物中的荧光强度,以此来判断反应体系中被测物质的浓度.
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两种测定分支杆菌药敏试验的方法比较
目的:分支杆菌药敏试验通常采用以罗氏培养基为基础绝对法中的间接法,也就是在固体罗氏培养基中按要求加入各种药物,根据细菌在培养基上的生长情况来判断药敏试验的结果;采用BACTECMGIT 960测定仪检测分支杆菌药敏试验是目前比较先进的方法,其主要是采用连续检测接种标本的培养管所显示的荧光强度来判断分支杆菌生长的情况.
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基于荧光强度原理的一种微生物监测仪对室内空气中微生物监测的相关性研究
目的:研究某以荧光强度原理的微生物监测仪在医疗机构室内空气微生物监测中的使用价值,为寻求室内空气微生物实时监测方法提供参考。方法采用某微生物监测仪与传统撞击式空气微生物采样器的采样检测结果比较方法,对该微生物监测仪实时监测室内空气微生物污染应用价值进行评估。结果用该微生物监测仪与撞击式空气微生物采样器同时对普通病房和门诊大厅内空气进行监测,前者仪器记录的荧光强度与后者采集的浮游菌数具有显著统计学意义,两者呈高度正线性相关。而对手术室空气监测结果显示荧光强度与浮游菌数无统计学意义,无明确相关性。结论本研究微生物监测仪可用于医疗环境静态空气和动态空气的微生物污染状况实时监测,但其与传统撞击式空气微生物采样器检测结果相关性受空气微生物污染量的影响。
关键词: 空气微生物 微生物检测仪 撞击式空气微生物采样器 荧光强度 浮游菌 -
用原子荧光法测定水中汞、砷
汞、砷及含砷化合物毒性较大,水中汞、砷主要来源于地质和环境污染,汞、砷是水质卫生化学主要监测毒物,多年监测结果表明,水中汞、砷含量较低,火焰原子吸收光谱法、石墨炉原子吸收光谱法、电感耦合高频等离子体的检出能力无法满足测定需要,而原子荧光法具有谱线简单、检出限低、线性范围宽、可多元素同时测定等优点.原子荧光光谱法,采用氢化物发生进样,利用某些能产生初生态的还原剂或化学反应,将样品溶液中的分析元素还原为挥发性共价氢化物,然后借助载气流将其导人原子化系统,在特制脉冲空心阴极灯的发射光激化下,利用荧光强度与原子的浓度(即溶液中被测元素的浓度)成正比原理,对水中元素进行定量测定.本文对用原子荧光仪测定水中汞、砷两元素方法进行讨论.
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毛细管电泳法测定牛奶中残留的抗生素
牛奶中抗生素主要有β-内酰胺类抗生素如青霉素、头孢菌素等和非β-内酰胺类抗生素如四环素、链霉素等.目前,分析牛奶中抗生素主要用高效液相色谱(HPLC)法、薄层扫描定量法和微生物法.HPLC法为目前常用理化监测抗生素方法,一般仅监测少数几种残留抗生素,如吡啶硫乙酰头孢菌素(cephapirin),且检测灵敏度相对较低,易受干扰.薄层扫描定量法操作复杂、费时,且抗生素在薄层板上的荧光强度随放置时间延长而减弱,人为因素造成的测定误差较大.微生物法具有成本低,灵敏度高的特点,可检测2~150 μg/L残留量的抗生素水平,但一般仅能提供定性、半定量数据,且仅可监测β-内酰胺类抗生素残留,适宜大量样品的筛选之用.
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应用内镜荧光强度分析法研究溃疡性结肠炎中医证型特征
目的 研究溃疡性结肠炎( ulcerative colitis,UC)不同中医证型自发荧光成像(auto fluorescence imaging,AFI)内镜下荧光强度[绿/红(the ratio of green to red,G/R比值)]的特征,为UC中医辨证提供客观依据.方法 收集UC患者49例,根据白光内镜(white light endoscopy,WLE)黏膜形态和G/R比值对大肠湿热组(19例)、脾胃气虚组(30例)和健康对照组(21名)进行统计分析.结果 脾胃气虚组和大肠湿热组G/R比值分别为(1.147±0.137)和(0.915±0.114),较健康对照组(1.227 ±0.137)降低,差异均有统计学意义(P <0.05,P<0.01),其中大肠湿热组G/R比值较脾胃气虚组更低(P<0.01).大肠湿热组活动期内镜活动指数(endoscopic index,EI)以中度(11例)和重度(5例)为主;脾胃气虚组以缓解期(17例)和活动期EI轻度(7例)为主.活动期G/R比值小于缓解期(0.963 vs 1.220,P<0.01),且活动期EI轻、中、重度的G/R比值依次降低,分别为1.044、0.967和0.830(P<0.01).结论 UC大肠湿热证的炎症程度高于脾胃气虚证.AFI能较好地反映UC的炎症程度.
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新型核酸酶传感器测定血铅
研究建立基于核酸酶传感器(铅离子特异性DNA酶)的血铅检测体系.将全血标本依次经Triton X-100、蛋白酶K、稀硝酸及三氯乙酸处理,校正酸碱度后与核酸酶传感器混合进样,读取荧光增长速率进行定量检测.以标准铅溶液制作标准曲线,测定血铅标准物质以评价精密度及回收率.结果显示,线性范围良好(0~2000nmol/L,R2 = 0.9988),方法检出限(LOD)9.44nmol/L.血铅标准物质检测的准确度及精密度良好(RSD分别为4.99%和1.35%),方法回收率90.7 %~95.8%.本实验成功建立了新型核酸酶传感器测定血铅的样本前处理方法及检测体系,该方法可以快速、准确地对血铅进行定量分析,为临床诊断提供帮助.
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5-ALA在口腔鳞状细胞癌中诱导内生原卟啉Ⅸ荧光强度的研究
目的 应用酶标仪检测5-ALA在不同分化程度的人口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中产生原卟啉Ⅸ(PpⅨ)的荧光强度,以期指导临床鉴别和诊断OSCC.方法 将2×104个SAS细胞接种到96孔板中,应用酶标仪检测不同浓度的PpⅨ水溶液荧光强度,制作PpⅨ浓度的标准曲线,计算判定系数R2.在SAS、HSC-3和HSC-4细胞中分别加入浓度为0、0.5、1、1.5、2mmol/L的5-ALA,孵育0、2、4、6、8、10小时后应用酶标仪检测细胞荧光强度.结果 酶标仪检测的荧光强度与PpⅨ含量呈线性相关(判定系数R2=0.9982),5-ALA在OSCC细胞中佳的代谢浓度为1mmol/L,代谢时间为4小时.并且5-ALA在中分化的SAS细胞中产生的荧光强度显著高于高分化的HSC-3和HSC-4细胞(P<0.05).结论 5-ALA在不同分化程度的OSCC细胞中产生不同的荧光强度,可辅助用于临床鉴别诊断OSCC.
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酚苄明减弱失血性休克大鼠虹膜去甲肾上腺素荧光强度
各种休克都有大量儿茶酚胺释放,如去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)和肾上腺素都兴奋α-受体,引起血管收缩,组织低灌注.对α-受体阻断剂治疗休克持有不同观点,为揭示休克不同时期α-受体阻断剂对组织NE含量的影响,我们观察失血性休克大鼠虹膜交感神经膨体去甲肾上腺素荧光强度的变化.
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细胞内自由钙离子浓度变化的时-频分析
了解细胞内自由钙离子浓度([Ca~(2+)]_i)的变化规律是探知细胞乃至相关生物组织生存及健康状况的手段,而采用时-频分析方法则可获得其变化规律中较多的深层次信息.为了更好了解癌细胞与正常细胞内[Ca~(2+)]_i变化规律间的差异以及各自的特征,选取3种癌细胞和4种正常细胞作为实验对象.首先,用荧光试剂对各细胞样品进行负载,再用激光扫描共聚焦显微镜对细胞内的荧光强度进行测量,以获得细胞内[Ca~(2+)]_i的时域数据;接着,对时域数据进行时-频分析,并给出时-频分布函数的等值线图.结果表明,虽然癌细胞和正常细胞内[Ca~(2+)]_i的变化在时-频域内均有连续出现和离散出现的两类谱带,但癌细胞与正常细胞间的差异却是明显的.差异主要表现在:癌细胞中连续谱带的宽度大于正常细胞连续谱带的宽度,癌细胞中只有1条离散谱带,而正常细胞中却有2条离散谱带;不同癌细胞中离散谱带的中心频率相同,而不同正常细胞离散谱带的中心频率却各不同;癌细胞离散谱带中各频谱分量的相对振幅大于正常细胞各频谱分量的相对振幅.这些结果既为鉴别癌细胞提供一个新的指标,也为认识不同正常细胞的健康状况提供新的参考数据,同时可为电磁波的生物学窗效应机理研究奠定生物学自身的内禀依据.
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石蜡切片厚度对流式细胞仪检测细胞DNA的影响
在肿瘤研究中,应用流式细胞仪技术分析肿瘤细胞的DNA含量及周期细胞群体数目,已成为肿瘤临床诊断、疗效评价及预后推测的重要参考依据[1,2].DNA双螺旋结构碱基对与某些核酸荧光染料有良好的亲和力,在激发光的激发下,产生特定的荧光,运用流式细胞仪检测并分析这些荧光强度,从而了解细胞群体中各周期的分布状况,即G0/G1期、S期、G2/M细胞所占的百分比例.
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流式细胞仪每秒进样细胞数对细胞G0/G1期峰的荧光强度值及变异系数值的影响
在生物学研究中,利用细胞内DNA双螺旋结构碱基对与某些核酸荧光染料有良好的亲和力,荧光染料在光的激发下,产生特定的荧光,运用流式细胞仪检测、分析其荧光强度(Mean值),及其变异系数(CV值),了解细胞内DNA含量,已成为科学分析细胞DNA含量及其所处周期状态的一种手段[1,2].然而,流式细胞仪对操作者技术要求高,同一样本不同实验室检测的结果不尽相同;即使是同一实验室,不同操作人员检测结果亦不一样.其原因既有各实验室评价指标的差异[2-4],也有操作人员个人习惯以及机器本身性能的差异,选定技术参数不同等等.本研究旨在探讨流式细胞仪每秒进样细胞数对检定细胞G0/G1期峰Mean值及CV值的影响,以寻求合适的每秒进样细胞数.
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流式细胞术用于细菌抗生素敏感性试验的初步探索
大肠埃希菌ATCC25922、临床分离头孢噻肟(CTX)敏感大肠埃希菌7771、7880、CTX耐药大肠埃希菌7992与浓度范围为(0.015~128)μl/ml的CTX于35℃孵育2?h后,用碘化丙啶(PI)标记上流式细胞仪检测.在一系列药物浓度作用下,各菌株的碘化丙啶荧光强度(MFI)随着药物浓度的升高呈现递增的变化趋势,但是,当抗生素浓度过高,如大于其小抑菌浓度(MIC) 8倍时,菌细胞门所占比例将明显减少,MFI值也会显著下降,表明在高浓度抗生素持续作用下,较多细菌死亡后,菌细胞被裂解.
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纳米银和二氧化钛对金黄色葡萄球菌核酸的影响
目的 研究纳米银(Ag)和二氧化钛(TiO2)两种无机抗菌剂对金黄色葡萄球菌核酸含量的影响,分析抗菌剂的抗菌作用机制.方法 制备牛肉膏蛋白胨液体培养基,分别测定纳米Ag和TiO2的低抑菌浓度(MIC);以1/2MIC纳米Ag和TiO2浓度作用于金黄色葡萄球菌的培养液,用紫外分光光度计检测培养液中从菌体漏出的DNA和DNA等大分子物质含量,确定抗菌剂对细菌细胞膜的损伤程度;用荧光显微镜观察菌体荧光强度,确定菌体内核酸染色程度;并用荧光分光光度计测定荧光值,确定菌体内核酸DNA和RNA含量.结果 纳米Ag和TiO2对金黄色葡萄球菌的MIC值分别为5.781μg/mL和1.6 mg/mL,以1/2MIC为作用浓度,纳米Ag组和TiO2组分别与对照组相比培养液上清液中漏出的DNA和DNA等大分子物质含量,结果差异无统计学意义(P>0.05),菌体核酸染色荧光强度和DNA和RNA含量,结果显示纳米Ag组和TiO2组与对照组相比显著减少(P<0.01).结论 纳米Ag比TiO2对金黄色葡萄球菌具有明显抗菌作用,纳米Ag比TiO2有更强的抗菌性能;纳米Ag和TiO2的抗菌机制可能与抑制了金黄色葡萄球菌核酸DNA和RNA的合成有关,从而抑制细菌蛋白合成,抑制细菌的生长.
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HLA-B27/B7检测在强直性脊柱炎诊断中的价值分析
目的 探讨人类白细胞抗原(HLA)-B27+/B7-百分比及平均荧光强度(MnX)检测对强直性脊柱炎(AS)患者的诊断和临床分级价值.方法 选择2014年1月至2015年4月普洱市人民医院收治的确诊AS患者38例为AS组,其他原因引起的腰腿痛患者40例为非AS组,同期本院体检健康志愿者30例为健康对照组.用流式细胞仪检测3组HLA-B27+/B7-百分比及平均MnX,并结合影像学检查结果进行临床分级评估.结果 AS组HLA-B27+/B7-百分比[(92.21±3.30)%比(46.04±2.11)%、(29.57±1.25)%]和平均MnX(13.7±0.5比1.5±0.1、2.1±0.1)均明显高于非AS组及健康对照组(P均< 0.05),AS组HLA-B27阳性率显著高于非AS组及健康对照组[92.1% (35/38)比12.5%(5/40)、3.3% (1/30),P均<0.05];X线Ⅰ~Ⅳ级HLA-B27百分比差异无统计学意义[分别为(92.03±3.05)%、(91.44±2.85)%、(93.65±3.10)%、(90.65±2.77)%,P均>0.05],Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级之间平均MnX比较差异有统计学意义(分别为5.3±0.2、7.6±0.3、19.0±1.2、24.6±1.9,P均<0.05).结论 HLA-B27百分比及平均MnX对AS的诊断、临床分级和早期预测有一定的价值.
关键词: 强直性脊柱炎 人类白细胞抗原B27 荧光强度 -
低强度He-Ne激光照射对离体小鼠巨噬细胞Ca2+浓度的影响
为研究低强度He-Ne激光照射对离体小鼠巨噬细胞内Ca2+浓度的影响以及其与能量密度(剂量)的关系,用Fluo-3乙酰甲脂对巨噬细胞Ca2+作荧光标记,应用图象分析系统检测激光照射后细胞内Ca2+的荧光强度变化.结果:He-Ne激光照射引起细胞内Ca2+浓度改变.照射5 min,激光剂量为0.679 J/cm2,细胞荧光强度出现非常明显的增强;照射10 min,剂量为1.358 J/cm2,细胞荧光强度增强达到大值;照射15 min,剂量为2.037 J/cm2,细胞荧光强度减弱;照射20 min,剂量为2.716 J/cm2,细胞荧光强度降低至对照组之下.低强度He-Ne激光照射巨噬细胞可引起细胞内Ca2+浓度上升,产生细胞内信号传递,进而控制细胞功能.这可作为临床上应用低强度激光照射治疗的参考.
关键词: He-Ne激光 Ca2+ 巨噬细胞 荧光强度 Fluo-3乙酰甲脂 -
质粒构象对转染后蛋白表达时间曲线的影响
目的 探讨质粒的不同构象下磷酸钙转染后对蛋白表达量时间曲线的影响.方法 经过处理的pcDNA3 - MADCAM -1 - Fc,pcDNA3.1/Hygro(+)- Alpha4,pcDNA3.1/Hygro(+)- Beta7三种质粒磷酸钙转染293T细胞,第一种表达分泌到胞外的蛋白通过收集上清,ProteinA纯化,另外两种表达于细胞外膜,通过流式细胞仪检测荧光强度.结果 pcDNA3 - MADCAM -1 - Fc磷酸钙转染后处理组(缺口开环)比对照组表达蛋白量多(t =5.009,p=0.0376).pcDNA3.1/Hygro(+)- Alpha4,pcDNA3.1/Hygro(+)- Beta7两种质粒共转后处理组荧光强度36h后略高于对照组,48h后对照组明显升高.结论 质粒的不同构象下磷酸钙转染后蛋白表达量有时间依赖性.
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实时荧光PCR结合探针熔解曲线检测亚甲基四氢叶酸还原酶C677T基因多态性及其与肝硬化的相关性研究
聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)是当前常用的检测基因多态性的方法之一,该法不仅操作时间长,且在采用限制性内切酶对PCR产物进行酶切后,通常采用溴乙锭或银染的方法观察结果.溴乙锭严重危害人体健康,而银染试剂相当不稳定.因此有必要建立一种快速且对人体危害性较低的多态性检测方法.实时荧光聚合酶链反应(PCR)是一种将先进的光学技术、温控技术、荧光素标记技术以及计算机软件有机结合的新型PCR,能够对PCR每一个循环的荧光强度进行监测,故称为实时荧光PCR.双探针杂交技术是一种重要的实时荧光PCR技术,通常用于基因的定量检测,但是如果结合探针熔解曲线则可用于基因多态性和突变的检测[1-3].