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酚苄明减弱失血性休克大鼠虹膜去甲肾上腺素荧光强度
各种休克都有大量儿茶酚胺释放,如去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)和肾上腺素都兴奋α-受体,引起血管收缩,组织低灌注.对α-受体阻断剂治疗休克持有不同观点,为揭示休克不同时期α-受体阻断剂对组织NE含量的影响,我们观察失血性休克大鼠虹膜交感神经膨体去甲肾上腺素荧光强度的变化.
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脊髓Ⅱ板层NOS、BDNF、GDNF阳性神经膨体的组织化学双标研究
目的:我们前面的研究已发现,脊髓Ⅱ板层有大量NOS、BDNF及少量GDNF阳性神经膨体.为观察这些神经膨体是否同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF,以间接了解背根节(DRG)小细胞是否同时含有这些物质(因Ⅱ板层的膨体主要源于DRG小细胞).方法:用成年猫L3脊髓制作20 μm厚冰冻切片并分两组,一组先行NOS酶组化染色,NBT兰色反应显色,而后用BDNF抗血清(1∶500, Santa Cruz)以免疫组化ABC法行双标染色,DAB棕色反应显色.另一组则先用BDNF抗血清以免疫组化ABC法染片,DAB棕色反应呈色,再用GDNF抗血清(1∶1500, Santa Cruz)同前染片,TMB兰色反应显色.常规脱水透明封片后,观察脊髓Ⅱ板层NOS、BDNF与GDNF阳性神经膨体的单、双标情况.结果:在NOS与BDNF双标组切片脊髓Ⅱ板层,分别观察到大量兰色反应的NOS阳性神经膨体和棕色反应的BDNF阳性神经膨体,但大多为单标染色,双标者极少.BDNF和GDNF组切片阳性神经膨体的标记与NOS和BDNF组类似,均主要是大量单标的神经膨体,双标者极少.结论:Ⅱ板层内虽有BDNF、GDNF、NOS阳性神经膨体,但各自来源可能不同,即大多数DRG小细胞并非同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF.提示若从神经膨体内所含物质来讲,DRG小细胞的功能类型及源于这些小细胞的神经膨体可能是不完全一致的.
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神经生长因子受体家族trkA、 trkB、trkC在成年猫脊髓的表达
目的:trkA、 trkB、trkC是神经生长因子受体家族的三个成员,大量的研究已证实,神经生长因子家族成员作用的发挥是通过与其相应受体结合来实现的,了解这些受体在组织细胞的分布,有助于间接了解各神经生长因子家族成员的生理功能.尽管已有文献报道这些受体在成年大鼠脊髓分布,但我们未见在成年猫脊髓分布的资料.方法:用成年雄猫的L3脊髓制作20 μm厚的冰冻切片,分别用trkA(效价:1∶100,Santa Cruz)、 trkB(效价1∶500, Santa Cruz)和trkC(效价1∶1000, Santa Cruz)兔抗血清以免疫组化ABC法染片,观察3种生长因子受体样免疫反应物在成年猫脊髓的分布.结果:在成年猫脊髓均见3种生长因子受体的免疫阳性反应物,trkA者主要分布于脊髓背角Ⅱ板层的神经膨体,灰质一些神经元的胞浆和白质轴索内.TrkB者则主要是灰质各板层神经元染色,阳性反应物定位于细胞浆.TrkC在脊髓的分布与trkB者类似,亦主要是神经元胞浆染色,但有所不同之处是trkC阳性神经元主要分布于腹角及背角深部,而背角浅层特别是Ⅱ板层阳性神经元少见,但Ⅱ板层可见均质状阳性反应物.结论:在成年猫脊髓含有trkA、 trkB、trkC.但其分布并不完全一致.这些受体在脊髓分布为神经生长因子家族成员包括神经生长因子(NGF),脑源性神经营养因子(BDNF),神经营养因子3(NT3),神经营养因子4(NT4)等提供了必要的结合位点,提示NGF、BDNF、NT3、NT4等神经生长因子家族成员可能与成年猫脊髓的生理过程有关.
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部分去背根猫脊髓Ⅱ板层GDNF的免疫组织化学研究
目的和方法:为探讨胶质源性神经营养因子与脊髓Ⅱ板层可塑性的关系,将成年雄猫5只行单侧部份背根切断术(切除一侧的L1-L5,L7-S2 DRG,保留L6DRG为备用根).手术后动物存活10 d.取L3脊髓制作20 μm厚冰冻切片.用GDNF抗体(1∶1500)按常规ABC法染片,DAB棕色反应显色.观察GDNF样免疫反应在脊髓的分布,计数Ⅱ板层GDNF阳性神经膨体密度.测定Ⅱ板层GDNF的平均灰度值以间接反映其相对含量(灰度值越大,含量越少).结果用t检验进行统计分析.结果:正常组,GDNF的免疫阳性反应物主要分布于脊髓灰质神经元,胞浆染色,Ⅱ板层亦见少量GDNF阳性神经膨体,白质胶质细胞亦有GDNF阳性反应.部分去背根后10 d,L3节段手术侧Ⅱ板层GDNF阳性神经膨体密度明显较非手术侧者减少(P＜0.01).平均灰度手术侧则较非手术侧明显增加(P＜0.05),表明部份背根切断后10 d, L3平面手术侧Ⅱ板层GDNF含量及神经膨体密度均明显较非手术侧减少.结论:部分背根切断后,备用DRG小神经元表达GDNF增加及GDNF代偿输入脊髓的结果分析,手术侧Ⅱ板层GDNF的减少可能是由于背根切断阻断了源于DRG的GDNF输入所致.提示GDNF不仅与脊髓的生理功能有关,且可能在脊髓Ⅱ板层可塑性中发挥作用.
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大鼠脊髓半横断损伤对脊髓Ⅱ板层SP表达的影响
目的探讨脊髓半横断对脊髓Ⅱ板层SP表达的影响.方法20只成年SD大鼠随机分为正常对照组,术后3 d、7 d、21 d组.建立成年SD大鼠脊髓半横断(T13～L1)模型.取各组尾侧L3节段脊髓作冰冻切片.通过免疫组化ABC法观察SP免疫阳性反应物的分布,计数各组脊髓两侧Ⅱ板层内SP免疫阳性神经膨体数.结果SP免疫阳性产物以神经膨体形式集中分布在脊髓背角Ⅱ板层内.脊髓半横断后3 d,手术侧脊髓Ⅱ板层内SP阳性膨体数较正常组明显增多,7 d组较3 d组开始下降,21 d恢复正常.非手术侧仅表现为术后3 d一过性增高,且反应强度较手术侧有增强.结论脊髓半横断损伤导致Ⅱ板层SP免疫阳性膨体数量改变,提示SP作为伤害感受的一种神经递质或调质可能在脊髓半横断损伤过程中发挥作用.
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脊髓Ⅱ板层NOS,BDNF和GDNF阳性神经膨体的组织化学双标研究
目的:为探讨神经膨体是否同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF,以间接了解背根节(dorsal root ganglion,DRG)小细胞是否同时含有这些物质.方法:用成年猫L3脊髓节段制作20μm厚的冰冻切片并分两组.一组先行NOS酶组化染色,NBT兰色反应显色;继之用BDNF抗血清以免疫组化ABC法行双标染色,DAB棕色反应显色.另组先用BDNF抗血清以免疫组化ABC法染色,显色同前;随后用GDNF抗血清同前染片,TMB兰色反应显色.常规脱水透明封片.结果:在NOS与BDNF双标组,脊髓Ⅱ板层内有大量NOS阳性(呈兰色反应)和BDNF阳性(呈棕色反应)神经膨体,但大多为单标染色,双标染色者极少;BDNF和GDNF双标组阳性神经膨体的标记与NOS和BDNF组相类似,均主要是大量单标的神经膨体,双标者少.结论:脊髓Ⅱ板层虽有NOS,BDNF和GDNF阳性神经膨体,但各自来源有所不同,即大多数DRG小细胞并非同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF.提示以上3种阳性神经膨体可能分别来源于不同功能类型的DRG小细胞.
