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耳穴放血治疗针眼的体会
针眼,是因感受外邪,胞睑边缘生小硬结,红肿疼痛,形如麦粒的眼病,故又称麦粒肿.1970年以前,笔者用背部阳性反应物挑治疗法治疗麦粒肿,4天治愈率80%以上.70年代后,改用耳穴放血疗法,4天治愈率超过90%.现将1973～1999年1月用耳穴放血疗法治疗麦粒肿288例总结如下,供同道参考.
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大肠癌细胞功能性Fas配体的表达度与肿瘤免疫逃逸的关系
目的:表达Fas配体(fasligand,FasL)的肿瘤周围激活的Fas阳性淋巴细胞凋亡异常增加.肿瘤的发生在很大程度上是因为转化的细胞不能正常凋亡所致.观察Fas与FasL在结肠癌细胞株的表达,在体外验证结肠癌细胞SW620是否可以诱导淋巴细胞发生凋亡.方法:用免疫组织化学SABC法观察结肠癌细胞系和Jurkat T淋巴细胞系Fas与FasL的表达,为癌细胞的Fas和FasL的功能提供形态学依据.采用非放射性细胞毒分析,测定SW620结肠癌细胞与Jurkat靶细胞共培养后LDH释放值检测效应细胞的杀伤效应.结果:结肠癌SW620细胞FasL染色呈阳性反应,阳性反应物主要定位于癌细胞的胞膜及核周区,而Fas染色几乎呈阴性反应.Jurkat细胞系Fas,FasL免疫组化染色呈阳性反应,阳性反应物主要定位于癌细胞的胞膜.CytoTox96非放射性细胞毒分析显示大肠癌SW620细胞系与激活的T细胞(Jurkat T细胞)共培养,诱导对Fas介导的凋亡敏感的T淋巴细胞(Jurkat T细胞)明显凋亡,并随着SW620接种浓度增加和共培养时间的延长,Jurkat T细胞凋亡的比例显著增加.用含有乙酸肉豆佛波醇(phorbol 12-myristatel3-ac-etate,PMA)加离子霉素(ionomycin)的DMEM培养基孵育48 h的大肠癌SW620细胞系与激活的T细胞(Jurkat T细胞)共培养,Jurkat T细胞凋亡的比例也明显增加.结论:结肠癌细胞SW620表达功能性FasL,能杀伤Fas阳性Jurkat T淋巴细胞,形成免疫逃逸.
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也谈孙惠卿的检查法
孙惠卿教授在五十余年的临床实践中,形成了自己独特的检查法,并对检查法的理论有独特的见解.首先从敲诊、推诊、摸诊、捏诊、压诊几个方面介绍了检查法的主要内容;又从阳性反应物的辨别论述了检查法的重要性.
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神经生长因子受体家族trkA、 trkB、trkC在成年猫脊髓的表达
目的:trkA、 trkB、trkC是神经生长因子受体家族的三个成员,大量的研究已证实,神经生长因子家族成员作用的发挥是通过与其相应受体结合来实现的,了解这些受体在组织细胞的分布,有助于间接了解各神经生长因子家族成员的生理功能.尽管已有文献报道这些受体在成年大鼠脊髓分布,但我们未见在成年猫脊髓分布的资料.方法:用成年雄猫的L3脊髓制作20 μm厚的冰冻切片,分别用trkA(效价:1∶100,Santa Cruz)、 trkB(效价1∶500, Santa Cruz)和trkC(效价1∶1000, Santa Cruz)兔抗血清以免疫组化ABC法染片,观察3种生长因子受体样免疫反应物在成年猫脊髓的分布.结果:在成年猫脊髓均见3种生长因子受体的免疫阳性反应物,trkA者主要分布于脊髓背角Ⅱ板层的神经膨体,灰质一些神经元的胞浆和白质轴索内.TrkB者则主要是灰质各板层神经元染色,阳性反应物定位于细胞浆.TrkC在脊髓的分布与trkB者类似,亦主要是神经元胞浆染色,但有所不同之处是trkC阳性神经元主要分布于腹角及背角深部,而背角浅层特别是Ⅱ板层阳性神经元少见,但Ⅱ板层可见均质状阳性反应物.结论:在成年猫脊髓含有trkA、 trkB、trkC.但其分布并不完全一致.这些受体在脊髓分布为神经生长因子家族成员包括神经生长因子(NGF),脑源性神经营养因子(BDNF),神经营养因子3(NT3),神经营养因子4(NT4)等提供了必要的结合位点,提示NGF、BDNF、NT3、NT4等神经生长因子家族成员可能与成年猫脊髓的生理过程有关.
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部份背根切断对备用根尾侧段脊髓Ⅱ板层trkC表达的影响
目的:大量的研究已证实部分背根切断后猫脊髓背角具有可塑性.我们前面的研究已观察了部份背根切断对备用根节段L6头侧L3、L5脊髓Ⅱ板层和L3背核trkC表达的影响,本文进一步探讨部份背根切断后备用L6节段尾侧L7脊髓Ⅱ板层trkC的表达.方法:用成年雄猫15只分正常组、术后3 d及10 d组(切除L1-L5,L7-S2,DRG保留L6DRG为备用根),取正常组一侧,术后3 d及10 d组手术侧的L7脊髓制作20 μm厚冰冻切片,用trkC抗血清(1∶1000, Santa Cruz)行免疫组化ABC法染色.观察并测量trkC在成年猫脊髓的分布及部份背根切断后L7脊髓背角Ⅱ板层trkC的平均灰度(反应trkC的相对含量)变化.结果:trkC的免疫阳性反应物主要分布于灰质腹角及背角深部的神经元,胞浆染色Ⅱ板层阳性细胞少见,但有均质状trkC阳性反应.灰度分析结果显示:术后3 d组手术侧Ⅱ板层trkC的平均灰度值均较正常者明显升高(P＜0.05).而术后10 d时又较3 d者明显回落(P＜0.05),但仍未恢复至正常者水平.表明,术后3 d,L7平面Ⅱ板层trkC的含量明显减少,而术后10 d时,trkC的含量又明显恢复,但仍低于正常者水平.提trkC可能与L7脊髓Ⅱ板层可塑性有关.由于trkC为NT3提供了必要的结合位点,故Ⅱ板层trkC的含量变化还可能提示NT3与脊髓可塑性有关.基于我们在其它研究中已观察到部份背根切断后备用根L6节段头侧的L5平面术后10 d时Ⅱ板层trkC的含量已恢复至正常者水平.结论:结合本文L7平面虽有恢复但仍未达到正常水平的结果,提示备用根L6平面头尾平面trkC的含量恢复有差异,分析这可能是备用根中枢终末在备用根节段头侧侧枝出芽生长速度大于尾侧的原因之一.
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部分去背根猫脊髓Ⅱ板层GDNF的免疫组织化学研究
目的和方法:为探讨胶质源性神经营养因子与脊髓Ⅱ板层可塑性的关系,将成年雄猫5只行单侧部份背根切断术(切除一侧的L1-L5,L7-S2 DRG,保留L6DRG为备用根).手术后动物存活10 d.取L3脊髓制作20 μm厚冰冻切片.用GDNF抗体(1∶1500)按常规ABC法染片,DAB棕色反应显色.观察GDNF样免疫反应在脊髓的分布,计数Ⅱ板层GDNF阳性神经膨体密度.测定Ⅱ板层GDNF的平均灰度值以间接反映其相对含量(灰度值越大,含量越少).结果用t检验进行统计分析.结果:正常组,GDNF的免疫阳性反应物主要分布于脊髓灰质神经元,胞浆染色,Ⅱ板层亦见少量GDNF阳性神经膨体,白质胶质细胞亦有GDNF阳性反应.部分去背根后10 d,L3节段手术侧Ⅱ板层GDNF阳性神经膨体密度明显较非手术侧者减少(P＜0.01).平均灰度手术侧则较非手术侧明显增加(P＜0.05),表明部份背根切断后10 d, L3平面手术侧Ⅱ板层GDNF含量及神经膨体密度均明显较非手术侧减少.结论:部分背根切断后,备用DRG小神经元表达GDNF增加及GDNF代偿输入脊髓的结果分析,手术侧Ⅱ板层GDNF的减少可能是由于背根切断阻断了源于DRG的GDNF输入所致.提示GDNF不仅与脊髓的生理功能有关,且可能在脊髓Ⅱ板层可塑性中发挥作用.
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脊髓中间外侧神经元NOS与FAS和NT3共存
目的:研究表明,脊髓中间外侧神经元含有NOS.但是,这些神经元是否含有Fas和NT3并不清楚.方法:取成年猫脊髓L3节段制作20 μm厚冰冻切片并分两组,两组切片均先以NADPH-d酶组化法染片,NBT兰色反应显色显示脊髓中间外侧NOS阳性神经元,而后各组切片分别再用Fas和NT3(1∶1500, Santa Cruz)兔抗血清以免疫组化ABC法染片,DAB棕色反应呈色,观察NOS与Fas和NT3在脊髓中间外侧神经元是否共存.结果:在脊髓中间外侧神经元观察到双标反应物,Fas主要位于细胞核,胞浆弱阳性反应,NOS的阳性反应物则主要位于细胞核,胞浆弱阳性反应,NOS的阳性反应物则主要位于细胞浆.相对之,NOS和NT3的阳性反应物则均位于细胞浆.神经突起内均见双标染色.结论:脊髓中间外侧神经元内NOS、Fas和NT3共存.由于NOS、Fas和NT3分属酶、凋亡基因和神经营养因子家族成员,提示脊髓中间外侧神经元至少可能含有上述三个家族的某一成员,进而也提示这些成员可能与脊髓中间外侧神经元的某些生理功能有关.
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芬香化酶在神经干细胞及其早期分化中的表达
芳香化酶细胞色素P450(Aromatase cycochrome P-450,AROM) 作为雌激素生物合成的后一步限速酶,在脑的发育分化中扮演着重要作用.大量文献及我们的研究均表明脑内AROM主要来源于神经元,胶质细胞中是否AROM的表达尚存在争议.作为一种具神经元和胶质细胞分化潜能的神经干细胞,为了确定它是否具有雌激素合成能力,本研究用免疫细胞化学染色和RT-PCR技术研究AROM在神经干细胞及其诱导分化中的基因表达及其分子基础.实验取胚胎12.5天Wistar大鼠脑泡,用DME M/F12加B27的无血清培养基加bFGF(20ug/ml)获取神经干细胞克隆,用 10%的胎牛血清对干细胞进行诱导分化,以Nestin免疫荧光对所的克隆进行鉴定; 以NSE及GFAP免疫组化鉴定干细胞的分化能力.对所得干细胞及其分化后24h及4 8h后的细胞进行AROM免疫组化染色及RT-PCR检测AROM的表达及其启动子的利用情况.结果显示AROM免疫反应阳性反应物沉积于细胞克隆中绝大部分干细胞及一些单个的尚未分裂的干细胞胞浆中;干细胞经诱导分化后,一些有一个或两个长突起的神经元样细胞,AROM免疫反应强阳性,而大量具有多个粗长突起,胞体较为扁平的星形胶质样细胞为AROM免疫反应弱阳性或阴性,即干细胞分化后神经元中AROM强表达而神经胶质细胞中弱表达.RT-PCR结果可见AROM编码区及启动子1.4两个特异性扩增带,而未发现启动子1.3和PⅡ的特异性扩增带.说明神经干细胞及分化后AROM的表达主要受脑组织特异启动子1.4驱动.以上结果在一定程度上丰富了对脑雌激素来源的认识,可能为中枢神经系统内雌激素的来源提供新的线索.同时也为脑组织芳香化酶基因表达的调控的研究提供一个良好的细胞模型.
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半薄切片中免疫金银染色与石蜡切片中免疫组化染色的比较
免疫金-银染色(Imm unogold-silver,IGS)是1983年Holgate等用免疫金染色加银显影液增强的一种染色方法,可在光镜下观察到阳性反应结果.此法一经推出就受到了广大生物、医学研究人员的认可,给科学研究带来很大的方便.它特异性强,操作简便,而且经济,特别是近十几年来,经过不断改进,应用到半薄切片中,为免疫电镜的研究提供了基础.我们将其与石蜡切片中免疫组化的染色进行了比较研究.1、材料和方法 1.1材料 20例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为IgA肾病的肾活检组织环氧树脂包埋块.1.2方法 1)用NaOH无水乙醇脱树脂;2)10%过碘酸浸10m in,蒸馏水冲洗;3)切片入0.05M TBS pH7.4冲洗10min;4)正常山羊血清10min;5)TGFβ(1:10)和bFGF(1:10),室温孵育20h;6) 0.05M TBS洗10min×3次,0.02M TBS pH8.2 10min;7) 金标(1:20),室温孵育1～2hr;8)0.02M TBS洗10min,0.05 M TBS再洗10min×3,蒸馏水冲洗;9)柠檬酸缓冲液浸5min;10)银显影液染 20min,蒸馏水洗;11)减薄液数秒,充分洗涤;12)二甲基-天青Ⅱ、碱性复红衬染、冲洗、晾干、封固.2、结果 2.1IGS染色:大量的银染颗粒以近曲小管上皮细胞内表达为主(图1);2.2免疫组化染色(sABC法):TGFβ和bFGF大量的表达在皮质区近曲小管和部分远曲小管上皮细胞内(图2).3、讨论半薄切片不同于一般组织切片,由于细胞间关系及细胞组织结构保存良好,进行各种光学染色时更清晰,并可观察到石蜡切片中所不能观察到的微细结构,提高了光镜的分辨水平,为超薄结构水平的研究积累大量的资料.与石蜡切片比,即可节省药品,检测的成分定位更准确,又能在此基础上进行免疫电镜检查.在半薄切片上进行IGS染色时应注意 :1)低于0.05%戊二醛固定可以更好保存抗原性;2)脱环氧树脂812的时间不能少于 1小时;3)过碘酸中放置时间取决与半薄切片的厚度;4)一、二抗稀释液中要加BAS或P EG;5)配制银染液时在暗室加硝酸银,同时染色;6)半薄切片IGS染色对切片的洗涤比其它免疫染色法要求高,在缓冲液中要加表面活性剂,用TBS冲洗后还要用蒸馏水、双蒸水多次冲洗;7)组织在减薄液中的时间应光镜下控制.总之,半薄切片IGS染色法的阳性反应物清晰,对所检测成份存在位点更明确,为进行免疫电镜的进一步观察奠定了在三级切片(石蜡切片4-6μm、半薄0.5-1.0μm、超薄60-80nm)上准确定位的基础.
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整脊疗法治疗颈源性高血压15例
我们应用整脊疗法治疗颈源性高血压获得满意疗效,现报告如下.1 临床资料共15例,均本院门诊或住院患者.男9例、女6例,年龄36～68岁.均有不同程度的颈部不适,眩晕,部分患者伴头痛,失眠,记忆力减退,耳鸣,胸闷,胸痛.体征发现枕部上下项线,枕后肌三角,C2、C6,T5棘间、棘突旁有压痛、痛性结节、条索及异常阳性反应物.
