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吗啡依赖大鼠脊髓Ⅱ板层初级传入纤维突触性终末数量变化的电镜定量研究
目的应用电镜定量方法探讨在吗啡依赖条件下,大鼠背根节感觉神经元发出的初级传入纤维能否在脊髓Ⅱ板层侧支出芽和建立新的突触. 方法用光镜体视学方法测知吗啡依赖组和对照组大鼠L4脊髓Ⅱ板层横切面积没有差异的情况下,直接比较了两组动物脊髓Ⅱ板层神经毡单位面积内突触性终末的数量变化. 结果吗啡依赖组脊髓Ⅱ板层来自初级传入纤维的突触性终末数,明显多于对照组的初级传入纤维突触性终末数.其中来自无髓传入纤维的突触性终末数与对照组同类型的突触性终末数比较增加61%.来自有髓传入纤维的突触性终末数比对照组增多70%.尤其是来自含有致密核芯小泡的初级传入纤维突触性终末数比对照组多98%. 结论吗啡可能促进初级传入纤维在脊髓Ⅱ板层侧支出芽和建立新的突触.
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吗啡对坐骨神经钳夹伤大鼠脊髓Ⅱ板层初级传入纤维终末突触重建的影响
目的探讨吗啡能否促进大鼠受损伤的初级传入纤维终末在脊髓Ⅱ板层再生及其突触重建. 方法采用电镜定量方法计数吗啡组、生理盐水组和纳络酮吗啡组坐骨神经损伤后15d和30d,L4脊髓Ⅱ板层背根无髓传入纤维来源的Ⅰ型复合终末、背根有髓传入纤维来源的Ⅱ型复合终末和由中间神经元轴突和下行传导束轴突形成的简单终末. 结果吗啡组大鼠脊髓Ⅱ板层的Ⅰ型复合终末数比生理盐水组和纳络酮吗啡组明显增多,然而,Ⅱ型复合终末却比生理盐水组和纳络酮吗啡组少.3组大鼠脊髓Ⅱ板层的突触性终末总数,复合终末数和简单终末数没有差异. 结论吗啡能够促进大鼠脊髓Ⅱ板层受损伤的初级无髓传入纤维终末再生及其突触重建,这可能通过阿片受体介导.
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吗啡对大鼠脊髓Ⅱ板层中受损伤坐骨神经的传入纤维终末的影响--抗氟化物酸性磷酸酶组织化学研究
目的探讨吗啡对钳夹损伤坐骨神经后其传入纤维终末在脊髓Ⅱ板层分布的影响. 方法用显示抗氟化物酸性磷酸酶(FRAP)组织化学方法,借助图像分析仪测量损伤坐骨神经后15d和30d吗啡组和对照组大鼠脊髓Ⅱ板层FRAP阳性反应物面积. 结果损伤坐骨神经后吗啡组和对照组大鼠脊髓Ⅱ板层FRAP阳性反应区均有不同程度的缺失;对照组损伤坐骨神经后30d的FRAP阳性反应物面积比15d的FRAP阳性反应物面积增大40%.吗啡组损伤坐骨神经后30d的FRAP阳性反应物面积比15d的FRAP阳性反应物面积增大22%;同时也比对照组损伤坐骨神经后30d的FRAP阳性反应物面积增大19%. 结论随着损伤坐骨神经后大鼠存活时间延长,其脊髓Ⅱ板层FRAP阳性反应物面积呈恢复性增大;吗啡能使坐骨神经损伤大鼠脊髓Ⅱ板层的FRAP阳性反应物面积明显增大.
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脊髓Ⅱ板层NOS、BDNF、GDNF阳性神经膨体的组织化学双标研究
目的:我们前面的研究已发现,脊髓Ⅱ板层有大量NOS、BDNF及少量GDNF阳性神经膨体.为观察这些神经膨体是否同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF,以间接了解背根节(DRG)小细胞是否同时含有这些物质(因Ⅱ板层的膨体主要源于DRG小细胞).方法:用成年猫L3脊髓制作20 μm厚冰冻切片并分两组,一组先行NOS酶组化染色,NBT兰色反应显色,而后用BDNF抗血清(1∶500, Santa Cruz)以免疫组化ABC法行双标染色,DAB棕色反应显色.另一组则先用BDNF抗血清以免疫组化ABC法染片,DAB棕色反应呈色,再用GDNF抗血清(1∶1500, Santa Cruz)同前染片,TMB兰色反应显色.常规脱水透明封片后,观察脊髓Ⅱ板层NOS、BDNF与GDNF阳性神经膨体的单、双标情况.结果:在NOS与BDNF双标组切片脊髓Ⅱ板层,分别观察到大量兰色反应的NOS阳性神经膨体和棕色反应的BDNF阳性神经膨体,但大多为单标染色,双标者极少.BDNF和GDNF组切片阳性神经膨体的标记与NOS和BDNF组类似,均主要是大量单标的神经膨体,双标者极少.结论:Ⅱ板层内虽有BDNF、GDNF、NOS阳性神经膨体,但各自来源可能不同,即大多数DRG小细胞并非同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF.提示若从神经膨体内所含物质来讲,DRG小细胞的功能类型及源于这些小细胞的神经膨体可能是不完全一致的.
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部份背根切断对备用根尾侧段脊髓Ⅱ板层trkC表达的影响
目的:大量的研究已证实部分背根切断后猫脊髓背角具有可塑性.我们前面的研究已观察了部份背根切断对备用根节段L6头侧L3、L5脊髓Ⅱ板层和L3背核trkC表达的影响,本文进一步探讨部份背根切断后备用L6节段尾侧L7脊髓Ⅱ板层trkC的表达.方法:用成年雄猫15只分正常组、术后3 d及10 d组(切除L1-L5,L7-S2,DRG保留L6DRG为备用根),取正常组一侧,术后3 d及10 d组手术侧的L7脊髓制作20 μm厚冰冻切片,用trkC抗血清(1∶1000, Santa Cruz)行免疫组化ABC法染色.观察并测量trkC在成年猫脊髓的分布及部份背根切断后L7脊髓背角Ⅱ板层trkC的平均灰度(反应trkC的相对含量)变化.结果:trkC的免疫阳性反应物主要分布于灰质腹角及背角深部的神经元,胞浆染色Ⅱ板层阳性细胞少见,但有均质状trkC阳性反应.灰度分析结果显示:术后3 d组手术侧Ⅱ板层trkC的平均灰度值均较正常者明显升高(P＜0.05).而术后10 d时又较3 d者明显回落(P＜0.05),但仍未恢复至正常者水平.表明,术后3 d,L7平面Ⅱ板层trkC的含量明显减少,而术后10 d时,trkC的含量又明显恢复,但仍低于正常者水平.提trkC可能与L7脊髓Ⅱ板层可塑性有关.由于trkC为NT3提供了必要的结合位点,故Ⅱ板层trkC的含量变化还可能提示NT3与脊髓可塑性有关.基于我们在其它研究中已观察到部份背根切断后备用根L6节段头侧的L5平面术后10 d时Ⅱ板层trkC的含量已恢复至正常者水平.结论:结合本文L7平面虽有恢复但仍未达到正常水平的结果,提示备用根L6平面头尾平面trkC的含量恢复有差异,分析这可能是备用根中枢终末在备用根节段头侧侧枝出芽生长速度大于尾侧的原因之一.
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部分去背根猫脊髓Ⅱ板层GDNF的免疫组织化学研究
目的和方法:为探讨胶质源性神经营养因子与脊髓Ⅱ板层可塑性的关系,将成年雄猫5只行单侧部份背根切断术(切除一侧的L1-L5,L7-S2 DRG,保留L6DRG为备用根).手术后动物存活10 d.取L3脊髓制作20 μm厚冰冻切片.用GDNF抗体(1∶1500)按常规ABC法染片,DAB棕色反应显色.观察GDNF样免疫反应在脊髓的分布,计数Ⅱ板层GDNF阳性神经膨体密度.测定Ⅱ板层GDNF的平均灰度值以间接反映其相对含量(灰度值越大,含量越少).结果用t检验进行统计分析.结果:正常组,GDNF的免疫阳性反应物主要分布于脊髓灰质神经元,胞浆染色,Ⅱ板层亦见少量GDNF阳性神经膨体,白质胶质细胞亦有GDNF阳性反应.部分去背根后10 d,L3节段手术侧Ⅱ板层GDNF阳性神经膨体密度明显较非手术侧者减少(P＜0.01).平均灰度手术侧则较非手术侧明显增加(P＜0.05),表明部份背根切断后10 d, L3平面手术侧Ⅱ板层GDNF含量及神经膨体密度均明显较非手术侧减少.结论:部分背根切断后,备用DRG小神经元表达GDNF增加及GDNF代偿输入脊髓的结果分析,手术侧Ⅱ板层GDNF的减少可能是由于背根切断阻断了源于DRG的GDNF输入所致.提示GDNF不仅与脊髓的生理功能有关,且可能在脊髓Ⅱ板层可塑性中发挥作用.
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大鼠脊髓半横断损伤对脊髓Ⅱ板层SP表达的影响
目的探讨脊髓半横断对脊髓Ⅱ板层SP表达的影响.方法20只成年SD大鼠随机分为正常对照组,术后3 d、7 d、21 d组.建立成年SD大鼠脊髓半横断(T13～L1)模型.取各组尾侧L3节段脊髓作冰冻切片.通过免疫组化ABC法观察SP免疫阳性反应物的分布,计数各组脊髓两侧Ⅱ板层内SP免疫阳性神经膨体数.结果SP免疫阳性产物以神经膨体形式集中分布在脊髓背角Ⅱ板层内.脊髓半横断后3 d,手术侧脊髓Ⅱ板层内SP阳性膨体数较正常组明显增多,7 d组较3 d组开始下降,21 d恢复正常.非手术侧仅表现为术后3 d一过性增高,且反应强度较手术侧有增强.结论脊髓半横断损伤导致Ⅱ板层SP免疫阳性膨体数量改变,提示SP作为伤害感受的一种神经递质或调质可能在脊髓半横断损伤过程中发挥作用.
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切断L4背根对脊髓Ⅱ板层一氧化氮合酶表达的影响
为探讨背根切断对脊髓Ⅱ板层一氧化氮合酶(NOS)的影响,采用NADPH-d酶组织化学方法,观察了切断L4背根7天后脊髓Ⅱ板层NOS的分布及变化.结果:NOS主要分布于脊髓Ⅱ板层的神经膨体及少数神经元胞浆内.切断背根7天后,手术侧L4脊髓Ⅱ板层NOS的平均灰度较非手术侧明显增加(P<0.05),神经膨体密度则较非手术侧明显减少(P<0.01),表明切断背根可致相应节段脊髓Ⅱ板层NOS含量明显减少.提示由NOS产生的一氧化氮(NO)可能在背根切断后脊髓Ⅱ板层的病理过程中发挥作用.
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脊髓Ⅱ板层NOS,BDNF和GDNF阳性神经膨体的组织化学双标研究
目的:为探讨神经膨体是否同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF,以间接了解背根节(dorsal root ganglion,DRG)小细胞是否同时含有这些物质.方法:用成年猫L3脊髓节段制作20μm厚的冰冻切片并分两组.一组先行NOS酶组化染色,NBT兰色反应显色;继之用BDNF抗血清以免疫组化ABC法行双标染色,DAB棕色反应显色.另组先用BDNF抗血清以免疫组化ABC法染色,显色同前;随后用GDNF抗血清同前染片,TMB兰色反应显色.常规脱水透明封片.结果:在NOS与BDNF双标组,脊髓Ⅱ板层内有大量NOS阳性(呈兰色反应)和BDNF阳性(呈棕色反应)神经膨体,但大多为单标染色,双标染色者极少;BDNF和GDNF双标组阳性神经膨体的标记与NOS和BDNF组相类似,均主要是大量单标的神经膨体,双标者少.结论:脊髓Ⅱ板层虽有NOS,BDNF和GDNF阳性神经膨体,但各自来源有所不同,即大多数DRG小细胞并非同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF.提示以上3种阳性神经膨体可能分别来源于不同功能类型的DRG小细胞.
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针刺对脑源性神经营养因子在脊髓Ⅱ板层可塑性中表达的影响
采用免疫组化和原位杂交技术,探讨了针刺促进脊髓Ⅱ板层可塑性过程中脑源性神经营养因子及其mRNA表达的变化.结果显示:针刺侧备用背根节的脑源性神经营养因子及其mRNA 阳性中(42～57 μm)、小(＜42 μm)型神经元的百分数有所增加(P＜0.05);脊髓Ⅱ板层的脑源性神经营养因子的阳性神经膨体密度明显增多(P＜0.01)而阳性神经元百分数无变化(P＞0.05);针刺后脊髓Ⅱ板层未见脑源性神经营养因子mRNA的杂交信号.提示针刺促进脊髓Ⅱ板层可塑性可能与背根节中、小神经元表达脑源性神经营养因子的增多有关.
