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丙型肝炎病毒E2包膜糖蛋白的研究进展
HCV E2包膜糖蛋白是HCV的结构蛋白之一,具有重要的受体结合位点和抗原表位,在病毒感染和宿主免疫过程中起着十分重要的作用,也是目前疫苗研究的热点.其分子和功能特性的研究对HCV作用机制及预防和治疗的研究有重要意义.近年来,该领域的研究取得一定进展.本文综述了E2蛋白在病毒的入胞作用,在机体的免疫应答及其在疫苗研制方面的作用.
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苯巴比妥及氯贝丁酯对小鼠体内梭曼解毒的作用
梭曼主要经呼吸道中毒,也可以通过皮肤中毒,但都必须经过体循环和肺循环才能运送到脑,膈肌等重要靶器官,而在此过程中大部分梭曼已被降解成为无毒性的代谢产物,真正能够到达靶器官并与功能性乙酰胆碱酯酶(acetyl-cholinesterase,AChE)结合的梭曼量仅有一小部分.血液和肺脏,作为梭曼的两个首过屏障器官,在此过程中发挥了重要的解毒作用,然而,这两个器官中羧酸酯酶(carboxylesterase,CaE)结合位点较少,不足于在短时间内中和进入机体的所有梭曼.
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嗜酸细胞激活趋化因子启动子单核苷酸多态性与其mRNA表达及哮喘的关系
背景和目的:嗜酸细胞激活趋化因子(eotaxin,EOT)1在嗜酸细胞相关炎症中起重要作用.本研究探讨了健康人群与哮喘患者中EOT单核苷酸多态性(SNP)与血浆EOT1水平,外周血嗜酸细胞数,PC20值(使第一秒用力呼气量下降20%所需的乙酰甲胆碱的浓度)的关联,以及SNP对EOT1产生过程的影响.方法:测定了22名健康人和21名哮喘患者EOT单核苷酸多态性、血浆EOT1水平、外周血嗜酸细胞数和PC20值.结果:在哮喘患者中,EOT-576C>T 和 EOT-384A>G多态性及单体型(ht1和ht4)与血浆EOT1水平显著相关(P<0.001~0.040).血浆EOT1对数值与血浆总IgE对数值在健康人和哮喘患者中相关(P =0.012 和P =0.004),与PC20对数值在哮喘患者中相关(P=0.014).DNA-蛋白复合物仅形成于EOT-384A>G,而在其他启动子SNP不形成.其相互作用在低频等位基因型中强于常见等位基因型,并受TNF-α下调.以TNF-α刺激哮喘患者外周血单个核细胞,具有纯合低频等位基因型者表达EOT1 mRNA水平较携带常见等位基因型者为低.结论:EOT-384A>G SNP通过形成抑制因子结合位点参与EOT表达调节,通过EOT-384A>G 可能预测哮喘发病.
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酵母转录因子结合位点保守性的生物信息学分析
目的:本研究拟发掘出酵母基因组中转录因子结合位点的保守性位点和规律.方法:本研究采用生物信息学中保守性模体参数Mi分析基因上游不同区域与真核生物转录因子结合位点保守性之间的关系.结果:转录因子Sok2、Swi4结合位点的保守性在基因转录起始位点上游各个区间的差异主要由其本身的序列特性决定.此外,本研究分别发掘出转录因子Sok2、Swi4结合位点的保守性位点.结论:本研究结果有助于提供新的参数用以改进现有预测转录因子结合位点的方法,在此基础上为深入研究真核生物的转录水平调控模式奠定理论基础.
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噬菌体随机肽库技术及其在寄生虫学领域的应用
1985年Smith率先将EcoRI内切酶的部分基因片段插入丝状噬菌体fl的外壳蛋白基因Ⅲ区,使目的基因编码的多肽呈现在噬菌体表面,并建立了噬菌体表面呈现技术(Phage display techniques).在此基础上,1990年Scott首次将编码随机序列肽的DNA与丝状噬菌体外壳蛋白基因Ⅲ整合,使随机肽与噬菌体蛋白以融合形式表达,并呈现在噬菌体表面,从而建立了噬菌体随机肽库技术(Phage display random peptide libraries).近年来,噬菌体随机肽库已成为探索受体与配体之间相互作用结合位点、寻求高亲和力生物活性的配体分子、探测未知蛋白空间结构表位的有利工具,在抗原表位(抗原决定簇)定位和模拟蛋白相互作用位点定位、功能配体或药物的筛选、新型疫苗的研制以及肿瘤治疗上拓宽了研究者的思维,提供了新的途径.目前,该技术在寄生虫学领域同样受到研究者的青睐.本文就噬菌体随机肽库技术及其在寄生虫学领域中的应用作一综述.
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静注人免疫球蛋白抗补体活性测定影响因素的探讨
静注人免疫球蛋白(pH 4)(IVIG)是我公司生产的具有多种抗体活性的血液制品,因具有广泛的应用价值而受到临床重视.其低pH值能更好地保证Fc段生物学活性,一般认为少量的IgG多聚体能暴露出Fc段补体结合位点,从而促使抗补体活性(ACA)产生[1-3].ACA是ICIG中一项重要的指标,它指IVIG中IgG多聚体在没有结合抗原的情况下,激活补体的能力.IgG多聚体通过激活补体使补体消耗,从而使机体的免疫防御能力下降.头痛、潮红、颤抖、背痛、恶心是较常见的不良反应症状[4].因此,ACA的高低对IVIG的质量起着至关重要的作用.据文献报道[5],影响AcA的因素可能与IgG多聚体含量、Na+浓度、pH值、葡萄糖的浓度有关.据此,我们进行了研究.另外,还研究发现枸橼酸含量对ACIA也有一定影响.本文就以上因素对其进行实验分析.
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酶母表达的重组HEV ORF2蛋白在戊型肝炎诊断中的初步应用
戊型肝炎是经消化道途径传播的传染病,对人民健康影响很大,疫苗和诊断抗原的研制和开发是预防和控制其流行和传播的重要手段。戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)结构区蛋白ORF2存在多个抗原性决定簇并可能具有中和抗体的结合位点,因此戊型肝炎病毒基因工程重组蛋白的研制主要集中于ORF2。我们应用巴氏毕赤酵母(pichia pastoris)成功表达了戊型肝炎病毒结构区蛋白ORF2,制备了新型重组HEV ORF2,将其作为抗原建立酶联免疫吸附试验(简称P-ELISA),检测正常人群及戊型肝炎患者血清中抗HEV-IgG和HEV-IgM抗体,同时以原核细胞表达的重组HEV ORF2建立的ELISA(简称E-ELISA)作为对照,旨在进一步研究酵母表达的重组HEV ORF2蛋白的抗原性,探讨其作为诊断抗原在戊型肝炎实验室诊断中的应用价值。
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蟹类过敏原组分及其抗原表位的研究进展
近年来,在食品安全研究中,对食物过敏性疾病的研究呈逐年上升趋势,中国疾病控制中心营养与食品安全所调查数据显示,在15~24岁年龄段的健康人群中,约有6%的人曾患有食品过敏疾病[1].虾、蟹等甲壳类动物及其制品是联合国粮农组织提出的8大类过敏食物中的重要一类[2-4].因此,国内外针对蟹类过敏原的研究也在不断发展,国内对蟹类过敏的研究主要处在蛋白水平,赵绮华等[5]报道了梭子蟹主要过敏原为相对分子质量48.7× 103和74.4×103的蛋白质;Li等[6,7]先后研究了虾类产品在不同加工过程中过敏原免疫活性的变化;喻海琼等[8]从刀额新对虾中分离得到相对分子质量为36×103和68×103的过敏蛋白.而国外早在上世纪90年代,就确定了甲壳类动物的主要过敏原为36×103的原肌球蛋白(tropomyosin,TM)[9].并且对过敏位点进行研究,如发现了对褐对虾TM中的8个IgE结合位点,长度分别为5~14个氨基酸[10,11],这将对食物过敏的研究深入到抗原表位的分子水平.
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生长分化因子-15基因多态性的研究进展
生长分化因子-15(GDF-15)的基因定位于染色体19p12·13.1,由两个外显子组成,被一个长约1800个碱基对的内含子分隔开来….外显子I由309个碱基对组成,其5'一端非翻译区有71个碱基对.外显子Ⅱ由647个碱基对组成,其3'-端的非翻译区有244个碱基对.GDF-15基因的启动子区域包含两个p53和Egrl的结合位点,这是两种在GDF·15诱导表达过程中起关键作用的转录蛋白ⅢJ,也是与心血管疾病密切相关的转录调节蛋白"".GDF.15基凶的5'端有转录因子AP.1的潜在结合位点….因此推测p53、Egrl和AP.1可能是诱导GDF-15表达的上游分子,各种细胞损伤因素通过激活p53、EKrl或AP-l来诱导细胞高表达GDF·15.GDF.15基因很可能是一个在应激条件下被诱导表达的可调控基冈,在体内发挥抗炎症、促进肿瘤细胞凋亡和抑制生长的作用,执行广泛的保护功能.
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膜联蛋白A2异常表达与消化道肿瘤发生、发展的关系
联蛋白(annexin,ANX)是一类受Ca2+调节、能够结合带负电荷膜磷脂的蛋白超家族,家族有12个成员(A1-A11,A13),它们的基因定位及相互作用蛋白见表1[1],蛋白分子包含数个长重复序列的同源性区域,每个长重复序列由70个氨基酸组成,含有凸面和凹面.凸面面向胞膜,包含钙离子和磷脂结合位点,凹面包含氨基末端和羧基末端,广泛存在于细胞质膜下、储Ca2+细胞器附近、核内及细胞基质中并参与一系列细胞活动,如胞吐、胞吞、细胞增殖、分化和凋亡、细胞骨架活动、信号转导等.其中ANX A2具有RNA结合的特性,与DNA合成、复制有关,其表达异常与消化道肿瘤发生发展关系密切,如介导凋亡、诱导分化等.
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晚期非小细胞肺癌靶向治疗进展(VCD)
吉非替尼(Gefitinib)及厄洛替尼(Erlotinib)系小分子表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epithelial growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs),通过阻断细胞内受体中的ATP结合位点,阻止下游信号传递而产生抑制肿瘤作用.
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聚乙二醇干扰素α-2a对乙型肝炎病毒感染的治疗
1聚乙二醇干扰素的化学特性与药效学聚乙二醇化是将一个蛋白质如干扰素(IFN)连接到无生物学活性的聚乙二醇聚合体上[1,2].聚乙二醇干扰素α-2a(分子量40 kDa,派罗欣Pegasys-罗氏制药公司生产)为具有高分子量、支链结构的聚乙二醇,附着在IFN分子上,不会干扰细胞膜上IFN受体的干扰纯洁结合位点.
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溃疡性结肠炎组织中NF-κB,OX-2和iNOS表达的意义
目的:转录因子NF-кB的诱导,调控着免疫和炎症反应中众多基因的表达.溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,C)存在上皮细胞、淋巴细胞、巨噬细胞的异常激活及细胞因子的表达失调.我们检测了UC组织中NF-кBp65,及两种启动子含NF-кB结合位点的蛋白COX-2和iNOS的表达和分布,探讨他们在UC发病机制中的作用,及三者之间的关系.方法:用免疫组化SP法检测39例活动期溃疡性结肠炎内镜活检标本及30例正常对照石蜡包埋组织中NF-κBp65,OX-2和iNOS的表达情况.结果:UC组p65,OX-2和iNOS均为阳性表达,主要分布于上皮细胞.固有层炎性细胞及血管内皮细胞也有程度不同的表达对照组均为阴性或弱阳性表达.三者在UC组的表达与对照组相比,差异均有非常显著性(P<0.01).p65的表达与内镜及病理分级有关.内镜Ⅱ级与Ⅰ级比较(5.8±2.6 vs 3.6±1.9),差异显著(P<0.05).病理Ⅱ,Ⅲ级与Ⅰ级比较(6.1±2.4,.3±2.5 vs 4.0±2 3),差异显著(P<0.05,<0.01).iNOS的表达与病理分级有关,Ⅲ级与Ⅰ,Ⅱ级比较(7.8±2.5 vs 4.6±2.3,5.0±1.6),差异显著(P<0.01,<0.05).COX-2的表达在病情轻重,内镜及病理分级间差异无显著性(P>0.05).p65与COX-2,NOS表达显著相关(rs1分别为0.713,.706;P<0.01),COX-2与iNOS表达显著相关(rs1=0.854,<0.01).结论:NF-кB的诱导参与UC的发生、发展.COX-2,NOS也参与UC的炎症及损伤过程,可能iNOS发挥的作用更显著.COX-2,NOS表达的调控机制可能相似,且与NF-κBp65的诱导有直接关系.
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肽转运载体的分子特征
动物体内的肽转运载体主要有两种,PepT1和PepT2.PepT1主要是肠肽转运载体,PepT2主要是肾脏肽转运载体.肽载体的分子结构特征主要有:(1)有12个假想的穿膜区,在9区和10区之间有一大的胞外环,且所有穿膜区内的序列都高度保留,胞外环上的序列保留的很少;(2)被编码的蛋白上有多个N-糖基化和蛋白激酶的识别位点,他们可能参与肽转运的调控;(3)PepT1上的His-57和PepT2上的His-87是关键的组氨酸残基,他们可能是转运蛋白发挥吸收功能时关键的结合位点;(4)不同动物肽转运蛋白的氨基酸范围在707到729之间,且不同动物相同器官肽转运载体的同源性高(大约80%),同种动物不同器官肽转运载体的同源性低(大约50%).了解肽载体的分子特征和组织分布,可以更好地理解肽吸收的分子机制并有利于今后肽类药物的研发.
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益气健脾药物血清对离体脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合作用的影响及机制
目的:观察益气健脾药物血清对离体脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合作用的影响并探讨其相关机制.方法:采用血清药理学方法和放射配基受体结合测定技术分别对正常、脾虚、药物血清作用后的大鼠壁细胞结合位点数进行检测,并对补中益气汤含药血清抑制大鼠胃泌素与其受体结合的抑制率进行了测定.结果:脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合容量明显少于正常大鼠(876.0±88.2 vs 1 071.1±102.1,P<0.01);补中益气汤药物血清作用后结合位点数明显上升(980.4±89.2 vs876.0±88.2,P<0.05);党参及白术药物血清组作用后结合位点数也有上升趋势,但与脾虚组相比差异不显著;补中益气汤含药血清部分抑制大鼠胃泌素与其受体的结合(抑制率=42.9%>30%).结论:益气健脾药物血清对脾虚大鼠的结合位点数下降具有上调作用;其机制可能与其同胃泌素受体的竞争结合相关.
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幽门螺杆菌外膜和甲硝唑的结合与耐药性的关系
目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pyroli)外膜和甲硝唑的结合作用与耐药性的关系.方法:运用亲和黏附酶反应法,观察H.pylori外膜和甲硝唑结合作用,并对比敏感菌和耐药菌与甲硝唑结合作用的差异:运用甲硝唑亲和层析柱和SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳对比敏感菌和耐药菌的甲硝唑结合蛋白.结果:H.pylori外膜存在甲硝唑的特异性结合位点,其结合作用能被高浓度甲硝唑竞争性抑制(P<0.001),耐药菌外膜与甲硝唑的结合作用明显低于敏感菌(P=0.0012).结论:H.pylori外膜对甲硝唑结合作用降低与甲硝唑耐药性的产生有关.
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酵母单杂交技术的原理及应用
0引言酵母单杂交(yeast one hybrid)技术是体外分析DNA与细胞内蛋白质相互作用的一种方法,通过对酵母细胞内报告基因表达状况的分析,来鉴别DNA结合位点并发现潜在的结合蛋白基因,或对DNA结合位点进行分析.运用此技术,能筛选到与DNA结合的蛋白质,并可直接从基因文库中得到编码该蛋白质的核苷酸序列,而无需复杂的蛋白质分离纯化操作,故在蛋白研究中,具有一定的优势;而且,酵母属真核细胞,通过酵母系统得到的结果比其他体外技术获得的结果更能体现真核细胞内基因表达调控的真实情况.
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降钙素基因相关肽拮抗内皮素生物学效应与内皮素结合位点下调
降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)是降钙素基因差异性表达的一种神经肽,具有很强的舒血管作用.内皮素(endothelin,ET)则是一种很强的缩血管多肽,由21个氨基酸组成.ET参与了许多心血管疾病如高血压、动脉粥样硬化及心肌梗塞等的发病过程.Gardiner等报道CGRP能有效拮抗ET1的缩血管作用.CGRP很可能是一种极有效的ET的内源性拮抗物质.本工作我们进一步观察了Hα-CGRP对ET1所致的血压上升、心肌损伤的影响,并分析了内皮素结合位点在Hα-CGRP拮抗ET时的作用.
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一种利用支持向量机预测蛋白-蛋白结合位点的改进算法
结构基因组计划已开始产生功能未知的蛋白质结构,因此,要在有限的时间内正确的注解这些蛋白质结构,需要精确、自动预测的方法.确定两个相互作用蛋白的界面,能够提供蛋白质功能的重要线索,也能够缩小用于确定预测复合体结构算法的搜索范围.
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氯吡格雷抵抗的研究现状
氯吡格雷是一种新型的噻吩啶类衍生物,能够抑制血小板的活化和聚集,其与血小板表面二磷酸腺苷(ADP)受体P2Y12不可逆结合,可减少ADP的结合位点,阻断ADP对腺苷环化酶的抑制作用,促进环单磷酸腺苷(cAMP)依赖和前列腺素E1(PGE1)刺激的舒血管物质磷酸蛋白(VASP)的磷酸化,抑制纤维蛋白原受体(GPⅡb/Ⅲa)活化,从而抑制血小板的聚集[1].目前,氯吡格雷已经广泛应用于急性冠脉综合征(ACS)及行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)患者的抗血小板药物.