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蟹类过敏原组分及其抗原表位的研究进展
近年来,在食品安全研究中,对食物过敏性疾病的研究呈逐年上升趋势,中国疾病控制中心营养与食品安全所调查数据显示,在15～24岁年龄段的健康人群中,约有6％的人曾患有食品过敏疾病[1].虾、蟹等甲壳类动物及其制品是联合国粮农组织提出的8大类过敏食物中的重要一类[2-4].因此,国内外针对蟹类过敏原的研究也在不断发展,国内对蟹类过敏的研究主要处在蛋白水平,赵绮华等[5]报道了梭子蟹主要过敏原为相对分子质量48.7× 103和74.4×103的蛋白质;Li等[6,7]先后研究了虾类产品在不同加工过程中过敏原免疫活性的变化;喻海琼等[8]从刀额新对虾中分离得到相对分子质量为36×103和68×103的过敏蛋白.而国外早在上世纪90年代,就确定了甲壳类动物的主要过敏原为36×103的原肌球蛋白(tropomyosin,TM)[9].并且对过敏位点进行研究,如发现了对褐对虾TM中的8个IgE结合位点,长度分别为5～14个氨基酸[10,11],这将对食物过敏的研究深入到抗原表位的分子水平.
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刀额新对虾变应原的分离、鉴定与纯化
目的 通过对我国常见的刀额新对虾变应原蛋白进行分离、鉴定与纯化,以提供虾特异性变应原用于食物变态反应疾病的诊断和治疗.方法 通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离刀额新对虾的蛋白质组分并测定其分子量,收集过敏病人血清,采用免疫印迹(Western-blotting)法鉴定其变应原成分,通过离子交换层析对刀额新对虾变应原进行初步纯化,通过疏水层析和凝胶过滤层析进一步对变应原纯化.结果 刀额新对虾有17条蛋白带,其中主要条带有10条,68和36 kD为可与虾过敏性病人血清IgE结合的特异性变应原;通过各种层析方法纯化出刀额新对虾68kD变应原,纯度为96%.结论 对刀额新对虾变应原进行分离、鉴定和纯化,得到高纯度的68 kD刀额新对虾变应原,为临床虾变态反应疾病的诊断和治疗奠定基础.
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刀额新对虾组织蛋白中变应原组分的分析与纯化
目的 分析和纯化刀额新对虾组织蛋白中的变应原组分,为进一步研制虾源性过敏反应疾病的诊断试剂和脱敏药物奠定基础.方法 刀额新对虾粗提蛋白经SDS-PAGE分离,用虾过敏患者血清,经Western blot分析其变应原组分.以DEAE-52离子交换层析纯化主要变应原组分,用虾过敏患者血清对纯化产物进行ELISA分析.结果 SDS-PAGE分析显示,刀额新对虾粗提蛋白约有20条可辨蛋白带,相对分子质量在12 100～105 600之间.Western blot分析显示,12份虾过敏患者血清与粗提蛋白均呈阳性反应.粗提蛋白有7条蛋白条带反应率高,其中相对分子质量为36 000、46 200、60 000和68 000的4条蛋白带与所有12份患者血清均呈阳性反应.经DEAE-52离子交换层析纯化后,ELISA结果 显示,变应原主要集中在70%盐析段0.1mol/L洗脱峰内.结论刀额新对虾组织蛋白中的相对分子质量为36 000、46 2 00、60 000和68 000的组分是其主要变应原.
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刀额新对虾主要变应原36 kD和68 kD蛋白检测虾过敏症的应用
目的 评价刀额新对虾主要变应原36 kD和68 kD蛋白在临床检测虾过敏症特异性IgE方面的应用.方法 以纯化的刀额新对虾主要变应原36 kD和68 kD蛋白为抗原包被酶标反应板.采用间接ELISA法检测1 301份人血清样品中的特异性IgE,对其中血清特异性IgE阳性者进行虾类食物过敏反应的回顾性调查.结果 1301份血清中,特异性IgE阻性的有127份.阳性率为9.76%(127/1 301).回顾性调查表明,特异性IgE阳性个体均有虾类食物过敏史,与血清学检测结果 相一致.结论 刀额新对虾主要变应原36 kD和68 kD蛋白针对血清特异性IgE的检测具有较高的特异性和敏感性,适用于研制临床检测虾过敏症的ELISA试剂.
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健康人与虾过敏患者血清虾过敏原特异性IgE检测
目的 以虾蛋白为抗原检测研究对象血清虾过敏原特异性IgE,为研制诊断试剂提供实验基础.方法 制备刀额新对虾提取物作为过敏原,包被酶联反应板,用间接EusA法检测1 301例健康人、135例疑似虾过敏症患者血清中的特异性IgE,统计分析不同人群对虾过敏原的特异性IgE反应.结果 1 436例血清中,虾过敏原特异性IgE阳性183例(12.74%),其中,学生阳性率为6.95%(61/878),教职工阳性率15.60%(66/423),疑似虾过敏者阳性率41.48%(56/135),不同人群阳性率有极显著差异(χ2=129.24,P<0.01).结论 以虾提取物为过敏原检测血清特异性IgE有诊断价值,可为虾类食物过敏症的诊断和防治提供实验室指标.
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虾原肌球蛋白及其IgE单克隆抗体建立I型过敏反应体内外模型
目的：利用虾原肌球蛋白及其IgE单克隆抗体建立I型过敏反应体内外模型。方法采用等电点沉淀法制备刀额新对虾原肌球蛋白，利用杂交瘤技术制备抗虾原肌球蛋白IgE单克隆抗体。建立虾原肌球蛋白攻击 IgE单抗致敏的RBL-2H3细胞模型，测定β-氨基己糖苷酶释放量。利用虾原肌球蛋白及其IgE单抗建立被动全身过敏反应小鼠模型，监测抗原攻击后30 min内肛温的变化。结果 IgE单抗致敏的RBL-2H3细胞在虾原肌球蛋白攻击后发生脱颗粒，β-氨基己糖苷酶释放量明显增加。虾原肌球蛋白及其IgE单抗诱导了小鼠被动全身过敏反应，抗原攻击后小鼠肛温平均下降约1．44℃。结论虾原肌球蛋白及其IgE单克隆抗体成功建立了I型过敏反应体内外模型。
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刀额新对虾主要变应原的纯化与初步应用
目的 分离纯化刀额新对虾的主要变应原蛋白并对其进行免疫学鉴定和应用.方法 刀额新对虾蛋白采用DEAE-52离子交换色谱和Sephadex G-100凝胶过滤纯化,各组分用斑点酶免疫法检测,活性组分用虾过敏症患者血清以ELISA方法 检测其免疫反应性,分子量用SDS-PAGE测定.结果 纯化得到2种刀额新对虾变应原,在ELISA检测中显示良好的免疫反应性,其分子量分别为36kDa和68kDa.结论 经离子交换层析和分子筛层析纯化的刀额新对虾主要变应原保持良好的免疫学活性,可作为特异性抗原应用于ELISA诊断试剂的制备.
