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天津地区梭子蟹中过敏原组分分析
目的 分析天津地区梭子蟹蛋白提取液中主要过敏原组分特征.方法 常规方法制备蟹蛋白粗提液,经SDS-PAGE技术分析蛋白组分；分别以蟹过敏患者混合血清(sIgE)和单例血清(sIgE)为探针,应用Western-blot技术鉴别提取液中主要过敏原组分,同时观察不同患者过敏原组分的异质性.结果 蟹提取蛋白液SDS-PAGE结果显示,共有9条蛋白带,其中以70和74kD组分含量较高；Western-blot结果显示,除21、38kD外,其余多种蛋白组分均能与混合阳性血清反应,同时证实不同蟹过敏患者之间过敏原组分具有明显异质性.结论 天津地区蟹主要的过敏原是36、48、94kD三种蛋白,但不同的个体间主要过敏蛋白存在差异性.
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蟹类过敏原组分及其抗原表位的研究进展
近年来,在食品安全研究中,对食物过敏性疾病的研究呈逐年上升趋势,中国疾病控制中心营养与食品安全所调查数据显示,在15～24岁年龄段的健康人群中,约有6％的人曾患有食品过敏疾病[1].虾、蟹等甲壳类动物及其制品是联合国粮农组织提出的8大类过敏食物中的重要一类[2-4].因此,国内外针对蟹类过敏原的研究也在不断发展,国内对蟹类过敏的研究主要处在蛋白水平,赵绮华等[5]报道了梭子蟹主要过敏原为相对分子质量48.7× 103和74.4×103的蛋白质;Li等[6,7]先后研究了虾类产品在不同加工过程中过敏原免疫活性的变化;喻海琼等[8]从刀额新对虾中分离得到相对分子质量为36×103和68×103的过敏蛋白.而国外早在上世纪90年代,就确定了甲壳类动物的主要过敏原为36×103的原肌球蛋白(tropomyosin,TM)[9].并且对过敏位点进行研究,如发现了对褐对虾TM中的8个IgE结合位点,长度分别为5～14个氨基酸[10,11],这将对食物过敏的研究深入到抗原表位的分子水平.
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过敏蛋白TBb的免疫活性鉴定及其表位预测
目的 对重组的苦荞过敏蛋白TBb进行免疫学活性鉴定,并预测其B细胞表位.方法 根据已获得的苦荞过敏蛋白N端结构域TBb的基因序列,构建原核表达载体pET-32m-TBb,然后转入E.coli BL21(DE3)中表达,表达产物用Ni2+-NTA琼脂糖柱亲和纯化,并用ELISA分析其免疫学活性,综合分析TBb的二级结构、亲水性、可及性、可塑性、抗原性指数,并预测其B细胞表位的分布.结果 获得了纯度95%以上的重组过敏蛋白TBb,获得的重组蛋白能与养麦过敏病人血清中的IgE抗体特异性结合,具有较高的免疫学活性,在TBb蛋白的320个氨基酸残基中,预测到的B细胞表位位于6-17,31-45,50-57,88-94,103-134,138-146,156-163,178-185,192-220,240-260,267-299区段.结论 TBb蛋白的活性分析及B细胞表位的预测为进一步研究该蛋白的分子特征及应用奠定了基础.
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特异性过敏原TBt多克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备特异性苦荞主要过敏原TBt的多克隆抗体,为深入研究TBt分子中各结构域的功能奠定基础.方法:通过盐析,离子交换层析,分子筛层析等方法从苦荞种子中纯化出过敏蛋白TBt,免疫新西兰兔子,制备多克隆抗体.用间接ELISA、Western blot检测该抗体的效价和特异性；竞争ELISA研究IgG抗体对TBt过敏患者血清IgE的抑制作用.结果:间接ELISA法检测所制备抗体的效价达1∶256000左右；Western blot显示该抗体能与TBt蛋白特异结合；竞争ELISA表明制备的IgG抗体能够特异性抑制养麦过敏患者血清1gE与过敏蛋白的结合.结论:制备的TBt多抗血清具有较高的效价和良好的特异性,该多克隆抗体可用于TBt的免疫活性鉴定,为下一步研究该蛋白的分子特征及免疫治疗奠定了基础.
