首页 > 文献资料
-
胃癌晚期患者原肌球蛋白与中医证型的相关性
目的 探讨原肌球蛋白(TM)表达与胃癌晚期不同证型的相关性. 方法 经胃部组织活检确诊的胃癌晚期患者41例(脾胃虚寒型23例,胃热伤阴型18例)和浅表性胃炎患者(对照组)15例,均应用免疫组织化学和酶链免疫反应测量脾胃虚寒型、胃热伤阴型胃癌患者及对照组患者活检组织的TM 4个基因(TM1、TM2、TM3、TM4)的表达及其含量. 结果 脾胃虚寒型胃癌患者TM1的表达明显高于胃热伤阴型,TM2的表达明显低于胃热伤阴型(P<0.01),两型患者TM3、TM4的表达无明显差异(P>0.05). 结论 不同证型胃癌患者TM的表达存在差异,TM1、TM2与胃癌证型有一定的相关性.
-
缢蛏泛变应原原肌球蛋白的克隆表达、纯化及其免疫学特性研究
原肌球蛋白(tropomyosin)作为泛变应原广泛存在于无脊椎动物体内,本研究从缢蛏中克隆出一个原肌球蛋白基因.缢蛏(Sinonvacula constricta)购于深圳市水产品市场.
-
蟹类过敏原组分及其抗原表位的研究进展
近年来,在食品安全研究中,对食物过敏性疾病的研究呈逐年上升趋势,中国疾病控制中心营养与食品安全所调查数据显示,在15~24岁年龄段的健康人群中,约有6%的人曾患有食品过敏疾病[1].虾、蟹等甲壳类动物及其制品是联合国粮农组织提出的8大类过敏食物中的重要一类[2-4].因此,国内外针对蟹类过敏原的研究也在不断发展,国内对蟹类过敏的研究主要处在蛋白水平,赵绮华等[5]报道了梭子蟹主要过敏原为相对分子质量48.7× 103和74.4×103的蛋白质;Li等[6,7]先后研究了虾类产品在不同加工过程中过敏原免疫活性的变化;喻海琼等[8]从刀额新对虾中分离得到相对分子质量为36×103和68×103的过敏蛋白.而国外早在上世纪90年代,就确定了甲壳类动物的主要过敏原为36×103的原肌球蛋白(tropomyosin,TM)[9].并且对过敏位点进行研究,如发现了对褐对虾TM中的8个IgE结合位点,长度分别为5~14个氨基酸[10,11],这将对食物过敏的研究深入到抗原表位的分子水平.
-
屋尘螨致敏蛋白组分 Der p1、Der p2和 Der p10检测的临床意义
尘螨是常见的室内变应原来源之一,诱导人 IgE 反应主要的尘螨是屋尘螨和粉尘螨。为了解变应原 IgE 组分检测的临床诊断意义和作用,该文就 Der p1、Der p2和 Der p10的研究进展进行综述。
-
β-神经生长因子在脑缺血神经保护中作用机制的研究
目的 观察脑缺血后原肌球蛋白受体激酶(Trk)和蛋白激酶B(Akt)信号蛋白的动态变化规律,同时观察β-神经生长因子(β-NGF)对其影响,探讨β-NGF脑缺血保护的作用机制. 方法制作大鼠局灶性脑缺血模型,腹腔注射β-NGF,应用免疫组化和Western印迹法检测Trk及Akt磷酸化的变化. 结果缺血8 h后Trk受体在半暗带表达增加.缺血2 h后Trk磷酸化即丌始不断增加,Akt的磷酸化则先减少,后逐渐恢复,其中缺血8 h较正常对照组减少了76.5%(P<0.01).注射β-NGF后在缺血12 h,Trk磷酸化水平增加了 74.4%(P<0.01);Akt磷酸化水平在缺血8 h时明显恢复,在24 h 与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05). 结论脑缺血促使Trk受体表达增加与激活.β-NGF可能通过增强Trk磷酸化及调节Akt磷酸化发挥脑缺血保护作用.
关键词: 脑缺血 原肌球蛋白 受体蛋白质酪氨酸激酶类 蛋白激酶类 神经生长因子 -
脑源性神经营养因子对施万细胞行为的影响
神经营养因子在神经系统的发育与维持中起着重要作用,脑源性神经营养因子(BDNF)就是其中重要的一员.BDNF与相应受体p75神经营养蛋白受体(p75NTR)/原肌球蛋白受体激酶(trkB)结合,通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/胞外信号调节激酶(ERK)、磷脂酶Cγ1(PLCγ1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)3条通路调节神经元行为[1].施万细胞是周围神经中主要的大神经胶质细胞,在周围神经损伤后,失神经的施万细胞开始分化,选择性地进行基因表达,并在损伤后4d达到增殖高峰并形成bungner带,为再生的神经元提供支持[2].近些年来,有学者已经开始进行施万细胞移植治疗神经系统损伤的研究,而利用因子辅助施万细胞发挥功能更是目前研究热点.我们回顾了近期相关研究,对BDNF如何影响施万细胞的生物学行为进行综述.
-
联合测定血清中的肌钙蛋白I/CK-MB/肌红蛋白的临床意义
肌钙蛋白由肌钙蛋白I、T、C三亚基构成,和原肌球蛋白一起通过调节钙离子对横纹肌动蛋白ATP酶的活性来调节肌动蛋白和肌球蛋白相互作用.当心肌损伤后,心肌肌钙蛋白复合物释放到血液中,4~6 h后,开始在血液中升高,升高的肌钙蛋白I能在血液中保持很长时间6~10 d.
-
日本血吸虫原肌球蛋白cDNA的克隆及其在大肠杆菌中表达
目的克隆日本血吸虫原肌球蛋白编码基因,并在大肠杆菌中表达.方法抽提日本血吸虫(大陆株)成虫总RNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得编码日本血吸虫原肌球蛋白的cDNA片段,该片段与全序列比较,缺氨基端14个氨基酸.该PCR产物克隆入T 载体并对插入片段进行序列测定后,亚克隆入表达载体pbV220,经琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切反应和PCR鉴定后,选择克隆用于温控表达.结果 RT-PCR产物克隆入T载体,序列测定表明,在核苷酸水平和推断和氨基酸水平,与曼氏血吸虫分别有96.5%和98.1的同源性.目的DNA片段亚克隆入原核表达载体pBV220,在大肠杆菌 DH5α中诱导表达.经SDS-PAGE和Western blot分析表明,该非融合表达产物相对分子质量约为32000(32 kDa),日本血吸虫(大陆株)成虫天然原肌球蛋白免疫兔血清能特异识别该重组蛋白.结论编码日本血吸虫原肌球蛋白cDNA克隆及起其在细菌中的表达获得成功.
-
肌小节蛋白基因突变是扩张性心肌病病因之一
据
2000年343卷第23期报道突发性扩张性心肌病是一种引起收缩机能下降的原发性心肌病,对其分子机理在很大程度上仍不清楚.有些家族性扩张性心肌病是由于心脏的细胞骨骼蛋白发生突变而引起的,这说明收缩力传递不足可作为这种疾病的一种机制,为了阐明心力衰竭的这一重要原因,美国波士顿杨伯翰大学医院暨妇女医院M.Kamisago医生等,对扩张性心肌病其他的基因原因进行研究,临床评价了21个家族性扩张性心肌病病例.在一项泛染色体连接试验中,对编码β-肌球蛋白重链、肌钙蛋白T、肌钙蛋白I和α-原肌球蛋白的基因引起疾病突变进行了研究. -
机械感觉相关的TRP通道研究进展
脑源性神经营养因子(BDNF)属于神经营养因子家族成员,与原肌球蛋白相关激酶B(trkB)受体相结合调节神经细胞的生存,生长以及突触传递.BDNF基因具有多个启动子及调节元件,其表达受神经活动和多种激素水平的调控.当大脑因外伤、缺血、压力等原因受损时,BDNF在中枢神经系统中表达增加,通过延缓凋亡、促进新生及增强突触传递等方法使受损神经细胞得以修复.本文对BDNF基因、BDNF表达的涮控、BDNF的分子结构及其受体、BDNF的信号传导等做了介绍,阐述了BDNF在中枢神经损伤修复中的作用.
-
脑源性神经营养因子及其在中枢神经损伤修复中的作用
脑源性神经营养因子(BDNF)属于神经营养因子家族成员,与原肌球蛋白相关激酶B(trkB)受体相结合调节神经细胞的生存,生长以及突触传递.BDNF基因具有多个启动子及调节元件,其表达受神经活动和多种激素水平的调控.当大脑因外伤、缺血、压力等原因受损时,BDNF在中枢神经系统中表达增加,通过延缓凋亡、促进新生及增强突触传递等方法使受损神经细胞得以修复.本文对BDNF基因、BDNF表达的涮控、BDNF的分子结构及其受体、BDNF的信号传导等做了介绍,阐述了BDNF在中枢神经损伤修复中的作用.
-
转化生长因子β1与骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化
背景:转化生长因子β1是一种具有调控细胞增殖、分化、黏附和凋亡,在生物发育及组织修复过程中具有重要作用的细胞因子。
目的:观察转化生长因子β1对诱导大鼠骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞的影响。
方法:取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养骨髓间充质干细胞,应用转化生长因子β1对第2代骨髓间充质干细胞定向诱导,以未诱导的骨髓间充质干细胞做对照。
结果与结论:①加入转化生长因子β1诱导后的骨髓间充质干细胞培养7d时,相差显微镜观察多紧密平行排列生长,呈类长柱形,少数呈不规则形;14 d后开始出现细胞间连接,形成数个相互连接的长柱形,28 d时骨髓间充质干细胞体积则变小,排列紧密呈条梭状。②转化生长因子β1诱导4周后,免疫细胞化学技术检测骨髓间充质干细胞均可见结蛋白、原肌球蛋白及间隙连接蛋白43的阳性细胞,诱导组各指标的积分吸光度值均显著高于对照组(P均<0.01)。③诱导组心肌肌钙蛋白I呈阳性表达。根据心肌肌钙蛋白I阳性率计算出的心肌样细胞转化率在诱导组显著高于对照组(P=0.000)。④荧光免疫双标技术检测结果显示,经转化生长因子β1诱导4周的骨髓间充质干细胞结蛋白及心肌肌钙蛋白I蛋白均定位于细胞质且呈共表达。⑤透射电镜结果显示,分化细胞的细胞质内可见到平行排列的肌丝,并富含线粒体、糖原和核糖体。提示骨髓间充质干细胞在转化生长因子β1诱导下可定向分化为心肌样细胞。 -
原肌球蛋白的分子生物学研究进展
原肌球蛋白(TM)是肌肉收缩过程中重要的调节蛋白质,它以大量异构体形式广泛分布于各种真核细胞中.哺乳动物中的4个TM基因已被确认,分别命名为TPM1、TPM2、TPM3、TPM4,至少可表达出20种TM异构体.TPM1基因突变与家族性肥大性心肌病有关;TPM3基因突变与线状肌病和骨骼肌无力有关.
-
原肌球蛋白3与雄激素受体配体结合域之间的相互作用
目的 为明确雄激素对动脉粥样硬化的影响及机制,在单核细胞内筛选与雄激素受体结合的蛋白.方法 将雄激素受体配体结合域(AR-LBD)做为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统从男性单核细胞cDNA文库中筛选与AR-LBD相互作用的蛋白,进一步应用Pull-down、免疫荧光技术验证二者在体外的相互作用.结果 从男性单核细胞cDNA文库中筛选出原肌球蛋白3(TPM3)与AR-LBD存在相互作用.在体外通过Pull-down实验证实了TPM3与AR-LBD的相互作用,进一步通过共聚焦显微镜检测免疫荧光确认TPM3与AR-LBD在293HEK细胞中重叠共表达.结论 在男性外周血单核细胞内,TPM3与AR-LBD存在相互作用.
-
淡水小龙虾主要过敏原原肌球蛋白基因的克隆、表达及其免疫活性鉴定
目的:克隆、表达淡水小龙虾肌肉中主要过敏原原肌球蛋白(tropomyosin),并对其免疫活性进行鉴定.方法:根据甲壳类的泛过敏原tropomyosin基因的高度保守性设计简并引物,通过RT-PCR克隆出淡水小龙虾虾肉中过敏原tropomyosin的全长基因.将该基因与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经诱导异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni2+亲和层析柱纯化后,用Western blot检测该重组蛋白的免疫活性.结果:序列分析显示该基因包括一个编码284个氨基酸的开放阅读框,与已知虾、蟹、龙虾等的过敏原tropomyosin基因有较高同源性(>80%).根据过敏原的命名规则,将其命名为Pro c 1,并提交GenBank数据库,登录号为FJ769183.重组小龙虾tropomyosin在大肠杆菌中能高效的表达,Western blot检测结果显示该重组蛋白具有良好的免疫活性.结论:研究成功表达了具有免疫活性的淡水小龙虾原肌球蛋白,为虾过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础.
-
凡纳滨对虾过敏原蛋白Lit v 1.2的原核表达与纯化
目的:诱导表达凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)过敏原蛋白Lit v 1.2,并利用6-His标签获得纯化蛋白.方法:用NdeⅠ和PstⅠ双酶切实验室前期构建保存的pGEM-T-Lit v 1.2质粒,将目的基因与表达载体pET44a连接,转入表达菌株Rosetta,通过氨苄青霉素( Amp)抗性基因筛选,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG)诱导表达,获得Lit v 1.2蛋白. 通过亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化效果. 结果:成功构建了重组质粒pET44a-Lit v 1.2,SDS-PAGE结果显示Lit v 1.2基因在大肠杆菌Rosetta中获得高效的可溶性表达,蛋白质分子量与理论值相符,且获得的目标蛋白纯度高. 结论:本研究通过原核表达及亲和层析获得高产量、高纯度的凡纳滨对虾过敏原蛋白Lit v 1.2 ,为进一步研究Lit v 1.2的免疫学特性奠定基础.
-
原肌球蛋白3在大肠癌中的表达和意义
结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是我国肿瘤发病率上升快的肿瘤之一。全球每年结直肠癌新发病病例数可达94万,近50万人因结直肠癌死亡。结直肠癌患者无淋巴结转移的,术后五年生存率可达90%[1],而发生淋巴结转移的,术后五年生存率仅为65%[2,3]。蛋白质组学技术在对实体肿瘤的分子标志物检测中显示出了特有的高灵敏度、特异度[4]。本研究以结肠腺癌组织、癌旁组织为研究对象,进行双向电泳和质谱分析,筛选结肠腺癌相关特异蛋白。
-
日本血吸虫原肌球蛋白编码基因克隆和表达
目的克隆和表达日本血吸虫大陆株原肌球蛋白(tropomyosin,TM)编码基因.方法应用RT-PCR方法体外扩增日本血吸虫原肌球蛋白编码基因,并采用T载体对该PCR产物直接进行克隆并用于核苷酸序列的测定.将目的基因亚克隆入原核表达载体pQE30,以IPTG诱导重组原肌球蛋白的表达.结果 PCR扩增产物约823bp,符合预计大小,并成功地克隆入T载体,对其中一克隆pGSjcTM12的插入片段的核苷酸序列分析表明,该序列和推测的氨基酸序列与曼氏血吸虫原肌球蛋白基因分别有91.1%和98.1%的同源性.该编码基因亚克隆入原核表达载体pQE30获得高效表达,分子量约32 kDa,并能被日本血吸虫天然原肌球蛋白免疫血清特异识别.结论日本血吸虫原肌球蛋白编码基因克隆和原核表达成功.
-
周期型马来丝虫副肌球蛋白基因克隆、序列分析及编码产物B细胞表位预测
目的 克隆周期型马来丝虫副肌球蛋白(BmPmy)基因,进行序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测.方法 从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,RT-PCR法体外扩增BmPmy基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM T载体,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-T-BmPmy,经测序验证,并进行同源性比较.应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测.结果 RT-PCR扩增出一条约2 640 bp的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与基因库已知的基因序列同源性为99%.经表位预测分析,BmPmy的B细胞表位可能在54~66位、144~152位、770~780位和834~845位氨基酸区域.结论 成功构建了BmPmy重组质粒pGEM-T克隆载体,为进一步研究该基因的功能提供了条件.
-
内皮抑素的研究进展
一种能特异性抑制血管内皮细胞生长的抑制因子-内皮抑素(endostatin),可以抑制内皮细胞的增殖和迁移,在体内具有良好的抗肿瘤效果.内皮抑素的抗肿瘤效果可能与诱导凋亡,以及与原肌球蛋白、黏附受体整合蛋白以及基质金属蛋白酶等重要因子有关.