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神经血管单元的体外神经模型构建
目的 建立一种可以模拟血脑屏障的体外细胞模型.方法 体外分离培养3种细胞(神经胶质细胞,血管内皮细胞和海马神经元),对培养的细胞进行细胞形态及细胞学鉴定,终建立成包含此3种细胞的三维模型即神经血管单元(NVU).结果 本试验成功培养了了体外神经血管单元并进行相关的细胞学鉴定,同时对模型的完整性和通透性进行了验证.结论 此模型的成功建立不仅可以用于替代体内血脑屏障(BBB),同时对于药物研发及化学物神经毒性的筛选及研究具有重要的意义.
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丙烯腈对大鼠脑组织和神经胶质细胞中核因子-kB信号传导通路活性及相关基因表达的影响
目的 丙烯腈(ACN)对大鼠脑组织和大鼠神经胶质细胞中核因子KB(NF-kB)信号传导通路活性及相关基因表达的影响.方法 利用micorarray和EMSA实验测定了SD大鼠经0和200mg/kg ACN分别作用14、28和90天后,大鼠脑组织NF-kB信号传导通路活性的变化及相关基因表达的变化;大鼠神经胶质细胞经0、25、50和75μg/ml ACN作用4和24h后细胞NF-kB信号传导通路活性的变化及相关基因表达的变化.结果 ACN促进大鼠脑组织(体内)和神经胶质细胞(体外)NF-kB信号传导通路相关基因(NIK、IKK、NF-kB1、NF-KB2、IkBa和c-myc)的表达.EMSA实验也进一步证实了ACN可激活大鼠脑组织和大鼠神经胶质细胞中NF-kB信号传导通路.结论 ACN诱导的氧化应激和ACN激活NF-kB信号传导通路具有一定的关系.
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甲基汞对脑神经胶质细胞凋亡及c-fos表达的影响
为探讨氯化甲基汞(MMC)所致脑发育损伤及其与c-fos表达的关系,采用光镜、电镜等形态学方法,观察了MMC对体外培养的大鼠脑神经胶质细胞的损害作用,并应用免疫细胞化学方法(SP法)观察MMC对培养神经胶质细胞c-fos 表达的影响.结果表明,体外培养的胶质细胞接触MMC后,出现胞浆浓缩、轴突回缩、染色质边聚、固缩等现象,呈凋亡的典型形态.MMC 0.02 mmol/L作用于神经胶质细胞10 min后,c-Fos蛋白阳性细胞百分率随其后的培养时间而变化:c-Fos蛋白阳性细胞率0.5 h开始增高,2 h达高峰,4～6 h又逐渐减少.MMC 0.00125、0.005、0.02、0.08和0.32mmol/L作用10 min后,0.32 mmol/L组的阳性率显著高于除0.08 mmol/L组外的其他各组(P<0.01).提示MMC可诱导体外培养大鼠脑神经胶质细胞c-fos表达,并诱发其凋亡.MMC诱发神经细胞凋亡可能与c-fos介导有关.
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bax基因siRNA序列的筛选及其对铝致神经胶质瘤细胞凋亡的影响
目的 应用RNA干扰技术降低促凋亡基因bax的表达,以阻抑铝诱导的神经胶质瘤细胞凋亡.方法 设计了3对阻抑bax基因表达的siRNA序列,对神经胶质瘤细胞进行了转染,根据不同siRNA序列在不同转染剂量、不同转染时间的细胞活力,找到bax siRNA转染的佳转染剂量和适转染时间.依据RNA干扰前后bax基因的表达变化筛检出有效的siRNA序列.用荧光染色法、荧光定量PCR法和免疫组织化学染色法分别检测其转染效率、对基因表达的干扰效率及对蛋白表达的阻抑效应.结果 有效的针对bax基因的siRNA序列为siRNA1,该序列的转染效率90%,时bax基因表达的干扰效率为62.3%.佳转染后检测点为转染后72h,适转染剂量为20nmo/L.结论 阻抑bax基因表达的siRNA序列能有效干扰bax基因和蛋白的表达,降低凋亡率.
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牛磺酸对缺氧所致神经胶质细胞凋亡的抑制作用
目的 探讨牛磺酸对缺氧引起的神经胶质细胞凋亡的抑制作用 方法 原代培养神经胶质细胞并制作细胞缺氧模型,实验分为空白对照组、缺氧模型组、缺氧+牛磺酸组.细胞缺氧6h后加入牛磺酸3 mmol/L继续培养24 h和48 h.采用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测凋亡相关基因表达水平.结果 缺氧组48 h早期凋亡率为(2.48±0.92)％,中晚期凋亡率为(2.97±0.75)％,均显著高于对照组的(1.02±0.44)％(P＜0.05);牛磺酸48 h组早期凋亡率为(1.39±1.03)％,中晚期凋亡率为(1.62±0.1)％,均显著低于缺氧组(P＜0.05).缺氧组Bax mRNA相对表达量均显著高于对照组和牛磺酸组(P＜0.01);牛磺酸48 h组Bcl-2 mRNA相对表达量比缺氧组升高2倍(P＜0.01);牛磺酸组HIF-1α mRNA表达量均比缺氧组升高显著(P＜0.01).结论 牛磺酸有助于抑制缺氧所致的神经胶质细胞早期和中晚期凋亡率.
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丙烯腈对大鼠神经胶质细胞凋亡、增殖及基因表达的影响
目的 研究丙烯腈(acrylonitrile,ACN)对大鼠神经胶质正常细胞(DI TNC1)和大鼠神经胶质肿瘤细胞(C6细胞)的生长、凋亡、增殖及相关基因表达的影响.方法 ACN作用于DI TNC1和C6细胞的浓度是25、50和75μg/ml,对于细胞生长、凋亡和增殖实验,作用时间是24 h;对于微点阵(microarray)试验,作用时间分别是4、24 h.结果 25、50和75μg/ml ACN作用DI TNC1后,DNA合成指数降低,分别为对照的93.1%、81.3%和74.9%,细胞凋亡指数增加,分别为对照的118%、122%和143%;C6细胞的DNA合成指数和凋亡指数在ACN作用后基本没有变化;cyclin和p53等细胞增殖和凋亡相关基因的表达也有一定的变化.结论 ACN抑制了DI TNC1细胞的增殖和促进了其凋亡,对C6细胞的凋亡和增殖没有变化.
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中药对神经胶质细胞作用的研究进展
从中药提取物、单味中药、中药复方制剂三个方面,综述了中药对神经胶质细胞活性的影响.中药调节神经胶质细胞活性的机制可能包括:(1)抑制iNOS表达,从而抑制NO及其产生的氧自由基的毒性;(2)抑制脑缺血和脑出血急性期星形胶质细胞的过度活化和GFAP的过度表达;(3)上调缺血损伤导致的神经胶质细胞分泌NGF;(4)抑制神经系统的免疫炎症反应等各种途径.
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神经胶质细胞在电针治疗神经病理性疼痛中的作用研究进展
神经病理性疼痛是临床中较为常见的慢性疼痛综合征之一，大量文献研究显示神经病理性疼痛与神经胶质细胞生理活动密切相关，神经胶质细胞通过释放各种神经活性物质，发挥信号转导通路功能，在疼痛的产生和维持中起作用，电针刺激可通过抑制神经胶质细胞活化参与镇痛效应。本文就电针治疗神经病理性疼痛的国内外新文献研究，对神经胶质细胞与神经病理性疼痛的关系及其参与电针镇痛机制的研究进展进行综述。
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脊髓星形胶质细胞机械性损伤的体外培养模型
目的:建立机械性损伤引起星形胶质细胞反应性增生的体外培养模型.方法:体外分离培养新生Wistar大鼠脊髓的星形胶质细胞,培养至16d进行划伤实验,分为划伤组和对照组(未划伤);每组有7个时间点,分别为划伤后0、2h、6h、12h、24h、48h、72h.用免疫组织化学的方法进行染色,观察划伤组和对照组星形胶质细胞内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达, 并且进行半定量图像分析.结果:从划伤后2h～72h,同对照组相比,划伤组星型胶质细胞明显增生,细胞内GFAP的表达明显增高.结论:星形胶质细胞反应性增生的体外培养划伤模型能模拟脊髓组织受到机械损伤后,胶质细胞反应性增生及细胞内GFAP表达升高的过程.
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参芪益智颗粒对5XFAD转基因小鼠学习记忆能力和脑内β淀粉样蛋白1-42含量的影响
目的：观察参芪益智颗粒对阿尔茨海默病5XFAD 转基因小鼠行为学和脑组织β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）含量的影响，探讨其改善5XFAD小鼠学习记忆能力的作用机制。方法将4月龄C57BL?6野生型小鼠随机分为生理盐水对照组和中药对照组，同时将同月龄5XFAD小鼠随机分为模型组、参芪益智颗粒组和石杉碱甲组，每组15只，各给药组给予相应药物灌胃，连续60 d。给药结束后，采用筑巢实验、避暗实验和Morris水迷宫实验评价各组小鼠学习和记忆能力；免疫组化和免疫荧光方法观察各组小鼠皮层和海马组织老年斑块、Aβ1-42、小胶质细胞激活的标记物小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白1及星形胶质细胞激活标记物胶质纤维酸性蛋白含量的变化。结果与生理盐水对照组比较，模型组小鼠筑巢实验得分明显降低，避暗实验步入潜入期明显缩短，水迷宫实验逃避潜伏期明显延长，脑内老年斑块明显增多，Aβ1-42含量明显升高，胶质细胞激活明显增强。参芪益智颗粒组小鼠上述指标均恢复或接近至野生型小鼠水平，与模型组小鼠比较差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。结论参芪益智颗粒改善5XFAD小鼠学习和记忆能力的机制与减少脑内老年斑数量、抑制胶质细胞过度激活、减少脑内Aβ1-42的含量有关。
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脉络宁对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究
目的:探讨脉络宁注射液对大鼠脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的保护作用及其机制.方法:健康成年雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉对照组(3 mg·kg-1)、脉络宁高、中、低剂量组(4,2,1 mL·kg-1),每组10只,尾静脉注射给药.采用线栓法阻断大脑中动脉(middle cerebral artery occlusion,MCAO)建立大鼠I/R模型.缺血2h,再灌注24 h时后,HE染色观察大鼠缺血侧脑组织神经血管单元(neurovascular unit,NVU)的病理变化,免疫组织化学法检测胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)及离子钙接头蛋白(ionized calcium binding adaptor molecule 1,Iba1)的表达,蛋白免疫印记法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达.结果:脉络宁注射液明显改善缺血再灌注大鼠脑组织NVU的病理变化;减少GFAP和Iba1阳性细胞的数量;显著降低缺血再灌注大鼠脑组织TNF-α,IL-1β,ICAM-1,VCAM-1的表达.结论:脉络宁注射液对脑缺血再灌注大鼠神经血管单元具有明显的保护作用,其机制可能涉及抑制星形胶质细胞和小胶质细胞的激活,以及多种炎性因子的分泌和表达.
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枸杞多糖对糖尿病大鼠视网膜超微结构的影响
目的 研究早期糖尿病大鼠视网膜超微结构的改变及枸杞多糖的干预效果.方法 链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病SD大鼠模型,治疗组给予枸杞多糖灌胃,观察血糖、体重变化和24周时的视网膜超微结构改变.结果 糖尿病早期视网膜改变主要是神经元细胞和神经胶质细胞等神经组织的线粒体病变和细胞的变性、凋亡.枸杞多糖组与糖尿病模型组比较,体重和血糖差异均无统计学意义(P>0.05);而视网膜超微结构病变明显减轻,且局限于内核层.结论 枸杞多糖可以明显减轻线粒体的病理改变,阻止神经细胞凋亡,其机制并非通过降低血糖,控制糖尿病发挥作用,有望用于早期糖尿病视网膜神经病变的防治.
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槲皮素防治神经退行性疾病的机制研究进展
神经退行性疾病(degenerative diseases of the central nervous system,ND)是一组以原发性神经元变性为基础的慢性进行性神经系统疾病.该类疾病主要包括阿尔茨海默氏病( Alzheimer' s disease,AD)、帕金森病( Parkinson's disease,PD)、Huntington舞蹈病(huntington disease,HD)、脑缺血缺氧所致神经元变性等.研究发现,ND由多种不同原因导致,包括神经元或神经胶质细胞不能提供充分的营养、轴突传递功能受损、谷氨酸受体活性过高、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平过高、线粒体能量产生减少、折叠错误的蛋白质形成增加或降解不充分、炎症过程、特殊蛋白质的产生等因素[1].
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大鼠视神经损伤后大胶质细胞去分化及预变性腓总神经的诱导
目的 研究视神经损伤后神经胶质细胞的去分化及其诱导.方法 成年雄性SD大鼠,分为正常对照组、损伤组、移植组和压榨移植组,在视神经伤后3d、7d、14d和28d 4个不同时相点取视神经,用HE方法计数细胞数量,用免疫组织化学、免疫印迹、原位杂交组织化学结合计算机图像分析检测巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经丝(NF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、Nogo-A及Nogo-A mRNA的表达,用免疫荧光双标组织化学法检测Nestin-GFAp和Nestin-MBP的共表达.结果 损伤组细胞数量仅在伤后7d明显增多,Nestin、MBP、Nogo-A及其mRNA表达上调,GFAP、NF、BDNF下调,出现一些Nestin.GFAP双标细胞和少量Nestin-MBP双标细胞;与损伤组相比,移植组和压榨移植组一些时相点的细胞数量不同程度地增多,Nestin、GFAP、BDNF和NF表达上调,MBP、Nogo-A及其mRNA表达下调,Nestin-GFAP双标细胞有所增加,且28d组高于14d组.结论 视神经损伤后,主要是星形胶质细胞发生去分化,大胶质细胞呈现一些不利于神经再生的基因表达变化;移植预变性周围神经能进一步诱导星形胶质细胞去分化,大胶质细胞的一些基因表达变化有利于神经再生.
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灯盏花素注射液对骨髓间充质干细胞的诱导分化
目的 探索灯盏花素注射液体外诱导大鼠骨髓间充质细胞(BMSCs)分化为神经元和胶质细胞的可行性.方法 贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质细胞.第4代细胞行表型鉴定后,用灯盏花素注射液诱导,每6h倒置相差显微镜观察形态变化,免疫细胞化学染色鉴定诱导后细胞的神经元特异性稀醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测不同浓度灯盏花素注射液诱导后细胞的活力,流式细胞术及RT-PCR检测诱导前后细胞中NSE、GFAP mRNA的表达变化.结果 BMSCs表型鉴定为CD44~+、CD54~+、CD34~-,诱导18h后BMSCs胞体开始收缩,有突起伸出,24h后突起增多形成网络结构.免疫细胞化学染色,NSE阳性表达率为(48.7±3.4)%,GFAP阳性表达为(56.8±4.2)%,流式细胞仪检测诱导24h后的细胞NSE及GFAP蛋白表达量均较未诱导组升高,RT-PCR检测诱导后细胞表达NSE、GFAP mRNA,未诱导的细胞则不表达.结论 灯盏花素注射液可诱导大鼠骨髓间充质细胞在体外分化为神经元和神经胶质细胞.
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睫状神经营养因子调节受损视神经胶质细胞去分化相关基因的表达
目的 探讨睫状神经营养因子(CNTF)对受损视神经胶质细胞去分化的作用及机制.方法 将65只SD大鼠随机分为对照组、损伤组和CNTF组,制备视神经损伤及损伤后添加CNTF的动物模型.术后7、14 d取术侧视神经损伤远侧段,分别用基因芯片检测其基因表达谱,实时荧光定量PCR、免疫组织化学、HE染色等方法检测相关基因、蛋白表达和细胞数量的变化.结果 术后7 d,与损伤组相比,CNTF组筛选出608条表达上调和417条表达下调的差异基因,包括染色质构型、转录调节、神经干细胞、神经分化和发育、增殖凋亡、离子通道、受体、信号转导等相关基因.实时荧光定量PCR结果验证了基因芯片结果的可靠性.CNTF组视神经损伤远侧段细胞数量增多,远侧段Nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、细胞外信号调节激酶1/2(Erk1/2)和近侧段神经丝(NF)阳性物质增多.结论外源性CNTF通过调节受损视神经大胶质细胞的去分化相关基因及蛋白的表达,促进了胶质细胞的去分化和轴突再生.
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app/ps1双转基因阿尔茨海默病模型小鼠脑内胶质细胞的激活及iNOS的表达
目的研究10～12月龄雌性app/ps1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠(app/ps1,dtg)脑内小胶质细胞和星形胶质细胞的激活,以及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide,iNOS)的表达.方法免疫组织化学结合刚果红组织学染色,普通光学显微镜观察.结果在app/Ps1 dtg小鼠皮质和海马内有广泛的神经炎斑形成,围绕在神经炎斑周围的小胶质细胞和星形胶质细胞处于活化状态,且活化的星形胶质细胞表达iNOS.结论app/ps1 dtg小鼠能够模拟AD病人脑内的主要病理过程.神经胶质细胞的激活及iNOS的表达在app/ps1 dtg小鼠和AD脑内病理过程中具有重要的作用.
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碱性成纤维细胞生长因子诱导大鼠受损视神经胶质细胞去分化
目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进大鼠受损视神经修复及诱导胶质细胞去分化的机制.方法 成年SD大鼠55只随机分为正常对照组、损伤组、bFGF组.术后7d取眶内段视神经行Agilent基因芯片、实时荧光定量PCR检测;术后7d、14d取眶内段视神经行HE、免疫组织化学等检测.结果 术后7d,bFGF组与损伤组相比有645条基因上调,458条下调,其中包括与神经干细胞或前体细胞及神经发育、增殖凋亡、染色质构型、转录调节、信号转导、神经生长相关基因等.与损伤组相比,bFGF组受损视神经远侧段细胞核增大,细胞数量增加, 巢蛋白、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)阳性物质增加,近侧段神经丝(NF)阳性物质增加.结论 外加bFGF能促进受损视神经细胞增殖,增强神经胶质细胞去分化变化,同时改善神经再生的抑制性微环境,促进视神经再生.
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小鼠大脑皮质发育过程中神经细胞、胶质细胞及血管之间的相互关系
目的 探讨小鼠大脑皮质发育过程中神经细胞、胶质细胞及血管发生之间的关系.方法 应用免疫荧光、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)和墨汁血管灌注等技术,对胚胎受孕15d(E15)至生后90d(P90)小鼠大脑内神经干细胞、神经前体细胞、神经胶质细胞和血管进行形态学观察.结果 E15左右大脑皮质内开始出现血管网,随着年龄的增长血管分支逐渐增多,血管体密度呈现增长趋势;成年后(P60)血管密度基本稳定.大脑皮质部位小血管走行方向与放射状胶质细胞长突起延伸方向一致,呈平行分布;大量放射状胶质细胞伸出膨大的足板参与血脑屏障的构筑;增殖的神经干细胞主要沿着血管走行方向及放射状胶质细胞长突起延伸方向进行迁移.结论 在大脑皮质发育过程中,神经干细胞不断增殖,并沿着血管走行方向及放射状胶质细胞长突起延伸方向进行迁移.神经细胞、神经胶质细胞参与血管壁的构成,三者之间相互诱导,共同维持血脑屏障的完整与功能调节.
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新生大鼠心telocytes的形态学和蛋白标记
目的 探讨新生大鼠心telocytes(TCs)的形态学特征并验证其是否表达神经细胞、神经胶质细胞的特异性标记.方法 酶消化法培养新生大鼠原代细胞,免疫细胞化学、扫描电子显微镜鉴定TCs,免疫荧光技术检测TCs的神经细胞和神经胶质细胞的蛋白表达.新生大鼠大脑组织免疫组织化学染色作为阳性对照.结果 免疫组织化学检测显示波形蛋白(vimentin)表达阳性,免疫荧光检测vimentin和CD34共表达,但TCs内神经元特异性烯醇化酶(NSE)、GFAP、OX42、2'3'-环腺苷酸-3'-磷酸二酯酶(CNpase)表达阴性.扫描电子显微镜下TCs形态清晰典型,特征形态明显.结论 大鼠心TCs虽然具有与神经细胞类似的形态,但其并不具有神经细胞的特性.
