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神经生长因子与睫状神经营养因子促进大鼠坐骨神经再生的协同作用研究
目的:利用新型神经再生小室探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)促进周围神经再生的协同性作用.方法:36只大鼠随机分为A、B、C 3组,每组12只,用自行研制的梭形双通道桥接管桥接坐骨神经10 mm缺损.A组,2支管内均注入几丁糖凝胶(100 μl);B组,一侧支管内注入几丁糖(100 μl)+NGF(5 μl)+生理盐水(5 μl),另一侧支管内注入几丁糖(100 μl)+NGF(5 μl)+CNTF(5μl);C组,一侧支管内注入几丁糖(100 μl)+CNTF(5 μl)+生理盐水(5 μl),另一侧支管内注入几丁糖(100 μl)+NGF(5 μl)+CNTF(5 μl).术后8、16周对再生神经的大体形态、常规病理及超微结构进行观察,并用核黄逆行示踪评估再生神经的轴浆运输功能.结果:NGF+CNTF侧再生神经呈淡黄色,质韧,弹性佳,优于对照侧,形态学观察见再生神经纤维数目多,粗细均匀,排列整齐,有髓纤维髓鞘厚,轴突直径大.其轴浆运输功能也明显优于对照侧.结论:NGF与CNTF对促进周围神经形态结构和功能的恢复均具有明显的协同作用.
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睫状神经营养因子对周围神经损伤后再生的影响
目的 研究睫状神经营养因子（CNTF）对周围神经损伤后再生的影响。方法 用硅胶管桥接大鼠双侧坐骨神经缺损，形成神经再生室。左侧室内注入基因重组人CNTF，右侧注入生理盐水（NS）。术后14、30、60和90天取材，行大体、光镜、电镜观察。术后90天行轴突图像分析、电生理检测及霍乱毒素—辣根过氧化物酶（CB-HRP）逆行追踪。结果 与对照侧相比，实验侧再生有髓神经纤维数目较多、轴突较粗且髓鞘较厚，复合肌肉动作电位（CMAP）的潜伏期较短、神经传导速度较快且波幅较高。实验侧CB-HRP标记的脊髓前角运动细胞数明显多于对照侧。结论 外源性hCNTF有明显促进周围神经再生作用。
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附子理中汤对脾阳虚大鼠骨骼肌能荷及CNTF mRNA的影响
目的:观察附子理中汤对脾阳虚大鼠骨骼肌能荷及睫状神经营养因子(CNTF) mRNA表达的影响.方法:大鼠分为对照组、模型组和附子理中汤组,模型组施行肩胛骨间棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)切除术,饲以高脂饲料,19℃环境喂养3周.附子理中汤组在模型组基础上以附子理中汤按5 mL·kg-1体重ig,每日1次,连续ig4周.测定大鼠骨骼肌能荷值,RT-PCR法检测CNTF mRNA表达.结果:与对照组大鼠骨骼肌能荷(0.042 ±0.018)比较,模型组(0.032 ±0.014)与附子理中汤组(0.024 ±0.012)的能荷值均降低(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,附子理中汤组的能荷值降低明显(P ＜0.05).对照组CNTF mRNA相对表达量为(0.862±0.072),模型组CNTF mRNA相对表达量(0.426 ±0.056)较对照组降低(P＜0.01).与模型组比较,附子理中汤组CNTF mRNA相对表达量(0.838±0.068)升高(P＜0.01).结论:附子理中汤对CNTF mRNA表达有调节作用,通过上调CNTF mRNA表达,增加CNTF含量,发挥CNTF对骨骼肌营养作用和能量代谢调节作用.
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睫状神经营养因子的cDNA克隆、表达、纯化及其生物活性鉴定
反转录PCR扩增人睫状神经营养因子(human ciliary neurotrophic factor,hCNTF)cDNA后,克隆进pBV220,在大肠杆菌中实现原核高效表达,SDS-PAGE观察到分子量约为24kD的预期表达产物,薄层扫描确定其表达量为26%,制备电泳和凝胶过滤纯化后纯度达到98%,生物活性分析表明,表达产物能刺激10日龄鸡胚背根神经节细胞的生长,促进CFU-GM的增殖.
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重组睫状神经营养因子对受损周围神经施万细胞相关基因表达的作用
目的研究重组睫状神经营养因子(CNTF)对受损周围神经施万细胞基因表达的作用.方法用硅管套接切断的大鼠坐骨神经,在受损神经局部给予重组CNTF,术后用免疫组织化学ABC法结合计算机图像分析观测S100蛋白(S100)、生长相关蛋白-43(GAP-43)、磷酸化酪氨酸(PTyr)、信号转导子和转录激活子(STAT)3的免疫反应阳性物质在修复侧远段神经的分布和相对含量. 结果 CNTF组修复侧远段神经相应区域S100、GAP-43、PTyr、STAT3阳性物质的含量显著或非常显著高于生理盐水组. 结论重组CNTF能上调受损神经施万细胞S100、GAP-43、PTvr和STAT3的表达,提示重组CNTF通过强化受损神经施万细胞JAK-STAT途径,上调其S100和GAP-43的基因表达.
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剂量与极低频电磁场对细胞因子诱导神经干细胞分化的影响
目的观察剂量及极低频电磁场对睫状神经营养因子(CNTF)、白细胞介素-1α(IL-1α)诱导新生大鼠中脑神经干细胞(NSC)分化的影响. 方法 NSC接受不同剂量CNTF\,IL-1α和极低频电磁场处理5 d,利用神经元特异性标记物微管相关蛋白-2ab(MAP2ab),通过免疫荧光化学染色检测神经干细胞神经元向的分化百分比.结果与对照组相比,小剂量CNTF和IL-1α组NSC神经元向分化百分比增加;大剂量CNTF组该比例明显降低(P<0.01).施加电磁场后,小剂量CNTF的促进效应增强,尤其是电磁场可使大剂量CNTF的神经元向分化抑制作用转变为促进作用.电磁场抑制了小剂量IL-1的促进作用,不影响大剂量IL-1的诱导结果. 结论细胞因子对NSC的诱导分化结果与剂量有关.极低频电磁场与细胞因子的共同效应不是简单协同或拮抗,说明生物磁场在神经系统发育中的作用不可忽视,电磁场可能成为调控NSCs分化的新手段.
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睫状神经营养因子调节受损视神经胶质细胞去分化相关基因的表达
目的 探讨睫状神经营养因子(CNTF)对受损视神经胶质细胞去分化的作用及机制.方法 将65只SD大鼠随机分为对照组、损伤组和CNTF组,制备视神经损伤及损伤后添加CNTF的动物模型.术后7、14 d取术侧视神经损伤远侧段,分别用基因芯片检测其基因表达谱,实时荧光定量PCR、免疫组织化学、HE染色等方法检测相关基因、蛋白表达和细胞数量的变化.结果 术后7 d,与损伤组相比,CNTF组筛选出608条表达上调和417条表达下调的差异基因,包括染色质构型、转录调节、神经干细胞、神经分化和发育、增殖凋亡、离子通道、受体、信号转导等相关基因.实时荧光定量PCR结果验证了基因芯片结果的可靠性.CNTF组视神经损伤远侧段细胞数量增多,远侧段Nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、细胞外信号调节激酶1/2(Erk1/2)和近侧段神经丝(NF)阳性物质增多.结论外源性CNTF通过调节受损视神经大胶质细胞的去分化相关基因及蛋白的表达,促进了胶质细胞的去分化和轴突再生.
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逆转录病毒介导的人CNTF在嗅神经鞘细胞中的表达及其对神经细胞存活和突起生长的影响
目的研究含有睫状神经营养因子(CNTF)表达调控系统修饰的嗅神经鞘细胞(OECs)对神经细胞存活和突起生长的影响. 方法通过基因克隆,用KpnⅠ+XbaⅠ将pcDNA\-3-S(NGF信号肽)-hCNTF质粒中含有NGF信号肽的CNTF切下,插入逆转录病毒表达载体pRev-TRE中.酶切鉴定后,将其与本系统的调控质粒pRev-Tet-On转入Ecopack-293细胞进行病毒包装,制备重组缺陷型hCNTF和Tet-On逆转录病毒感染原代培养的大鼠OECs,用不同浓度的强力霉素诱导,以Western-blot法对hCNTF的表达培养上清进行检测.将转染hCNTF的OECs与新生2d大鼠DRG联合培养,用其上清培养视网膜节细胞(RGCs).经β-tubulin免疫组织化学染色后,分别测量DRG神经突起的长度并统计阳性RGCs数目. 结果 1.经HindⅢ和BamHⅠ酶切鉴定,pRev-TRE-S-hCNTF重组体分别被切下630bp和400bp片段,插入子的方向和完整性经确认与预期相符.2.以不同浓度强力霉素诱导hCNTF修饰的OECs,其培养上清均有分子量约24 kD的hCNTF蛋白质的显著特异表达,此表达与强力霉素的浓度呈正相关.未诱导组和对照组未见明显蛋白带.3.同单纯OECs(23.15±4.7)、空载(24.55±5.8)、空白(16.8±6.5)等对照组相比,经hCNTF转染的OECs上清组的存活RGC数显著增高(41.34±5.4).4.与单纯OECs(418±45μm)和空载(400±65μm)对照组相比,与hCNTF修饰的OECs联合培养的DRG神经突起显著增长(660±67μm),且更为密集,而空白对照组未见向外延伸的突起. 结论 hCNTF可经逆转录病毒载体转染OECs,其表达依赖于强力霉素浓度,并对神经细胞存活和突起生长具有显著的促进作用.
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睫状神经营养因子对体外培养的星形胶质细胞细胞周期及Fos蛋白表达的影响
目的研究睫状神经营养因子(CNTF)对体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞(Ast)细胞周期及Fos蛋白表达的影响.方法通过体外纯化培养获取大鼠大脑皮质Ast,将CNTF加入培养液,作用相应的时刻点后,应用流式细胞仪测定细胞周期的变化,采用免疫细胞化学方法研究Fos蛋白的表达.结果CNTF作用Ast 6h后,可显著促进细胞周期进程,表现为G0/G1期细胞百分比降低;S期+G2/M期细胞百分比(增殖指数,poliferation index,PI值)升高.12h促增殖作用达高峰,24 h、48 h有所恢复,但PI仍明显高于对照组.CNTF作用于Ast 2 h后即可引起Fos蛋白的显著表达,并持续至24 h,而糖皮质激素预处理可明显抑制Fos蛋白表达.结论CNTF可促进Ast增殖及Fos蛋白表达.
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周围神经再生时重组CNTF对受损神经元 STAT3表达和酪氨酸磷酸化的作用
目的研究周围神经再生时,重组睫状神经营养因子(CNTF)对受损神经元JAK-STAT途径和酪氨酸磷酸化的作用.方法用硅管套接切断的成年大鼠坐骨神经,术时在受损神经局部给予重组CNTF,用免疫组织化学ABC法结合计算机图像分析研究STAT3、磷酸化酪氨酸(PTyr)免疫反应阳性物质在L3～5段脊髓前角外侧核和L5脊神经节神经元中的分布和相对含量.结果与生理盐水组相比,CNTF组脊髓前角外侧核神经元胞核STAT3和胞膜PTyr阳性物质的含量更高,脊神经节神经元胞浆和胞核PTyr阳性物质的含量更高.结论重组CNTF能激活和强化受损运动神经元的JAK-STAT途径,增强受损神经元的酪氨酸磷酸化.
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睫状神经营养因子对应激引起大鼠海马神经元损伤的保护作用及其机制的研究
本实验用Nissl染色法、Bielschowsky-Gros-Lawrentjew染色法、常规透射电镜、行为活动测定、双侧海马微量给药、海马神经元原代培养、活细胞连续照相、全细胞膜片钳记录、细胞内游离Ca2+浓度测定及P53蛋白免疫组化测定等方法,观察了睫状神经营养因子(CNTF)对应激引起动物行为变化和海马神经元形态学变化的影响,探讨了CNTF的部分作用机制.结果表明,急性应激不引起大鼠海马神经元损伤,CNTF不能改善急性应激时的焦虑样行为.但CNTF可显著减轻慢性应激引起的大鼠海马神经元损伤,并改善慢性应激时的抑郁样行为.CNTF可能通过早期快速抑制谷氨酸(Glu)膜电流、胞内游离钙([Ca2+]i)的升高,以及后期核内效应,发挥其保护神经元的作用,从而改善应激引起的抑郁样行为障碍.
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夹脊电针和神经松动术对兔坐骨神经损伤后轴突再生和血清神经营养因子的影响
目的：观察夹脊电针和神经松动术对兔坐骨神经损伤后轴突再生和血清脑源性神经营养因子(BDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)含量的影响。方法30只成年雄性兔分为模型组(n=6)、假手术组(n=6)、神经松动术组(n=6)、夹脊电针组(n=6)、夹脊电针结合神经松动术组(n=6)。钳夹法复制坐骨神经损伤模型。模型组、假手术组不做任何干预，神经松动术组行神经松动术治疗，夹脊电针组进行夹脊电针治疗，夹电针结合神经松动术组进行夹脊电针和神经松动术治疗。治疗4周后，HE染色观察轴突生长情况，ELISA法检测血清BDNF、CNTF含量。结果神经松动术组、夹脊电针组、夹脊电针结合神经松动术组轴突生长情况均优于模型组，夹脊电针结合神经松动术组优于神经松动术组和夹脊电针组；神经松动术组、夹脊电针组、夹脊电针结合神经松动术组血清BDNF、CNTF含量均高于模型组(P<0.05)，夹脊电针结合神经松动术组优于神经松动术组和夹脊电针组(P<0.05)。结论神经松动术、夹脊电针均可促进兔损伤坐骨神经的轴突再生，可能与提高血清中CNTF、BDNF水平有关；两者结合效果更佳。
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电刺激小脑顶核对缺氧缺血新生大鼠睫状神经营养因子蛋白的影响
目的 探讨电刺激小脑顶核对缺氧缺血脑损伤(HIBD)新生大鼠睫状神经营养因子(CNTF)蛋白及学习记忆功能的影响.方法 将大鼠随机分为假手术组、模型组和电刺激组,每组又分为7d和14d2个亚组,每个亚组6只.采用结扎左侧颈总动脉并吸入氮氧混合气体2h制作新生大鼠HIBD动物模型,电刺激组于造模后第2天开始电刺激治疗,强度25 mA,频率5 Hz,20min/次,每天2次.分别于干预后7d、14d用Y-型迷宫检测.HE染色法光镜下观察脑神经细胞和神经纤维的病理变化,免疫组化检测脑组织CNTF蛋白水平的表达.结果 电刺激组总反应时间明显短于模型组(P＜0.01),主动回避率及正确反应率均明显高于模型组(P＜0.01),皮质及海马周围CNTF蛋白面积与积分光密度值较模型组增多(P＜0.05).结论 电刺激小脑顶核可以提高脑组织CNTF蛋白水平表达,促进脑损伤大鼠学习记忆能力的恢复.
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联合应用NGF、CNTF和GDNF对大鼠坐骨神经结构和功能恢复的影响
目的:探讨联合应用NGF、CNTF和GDNF对大鼠坐骨神经结构和功能恢复的影响.方法:采用大鼠坐骨神经离断模型,实验动物按NGF、CNTF、GDNF单独使用,两两组合使用,三种因子同时应用以及对照组共分为8组.测量各组坐骨神经功能指数、神经电生理参数、腓肠肌湿重恢复率、再生神经纤维形态参数.结果:三种因子联合治疗组坐骨神经功能指数、神经传导速度、动作电位波幅、腓肠肌湿重恢复佳;除髓鞘厚度略小于NGF和CNTF联合治疗组外,神经纤维直径、再生轴突数量及神经组织面积均大于其他各组.结论:联合应用NGF、CNTF和GDNF对再生神经结构和功能恢复的作用优于其中一种因子单独使用或两种因子联合应用.
关键词： 神经生长因子 睫状神经营养因子 胶质细胞源性神经营养因子 坐骨神经 功能恢复 -
睫状神经营养因子对NMDA引起海马神经元损伤的作用
目的:以Glu离子型受体激动剂L-NMDA诱发海马神经元损伤为细胞损伤模型,用JAK/STATs阻断剂PTPi-2阻断睫状神经营养因子(CNTF)已知的经典信号转导途径,观察CNTF非经典信号转导途径的神经保护功能,并探讨其可能机制.方法:用无血清培养液(B27)法行新生24h内大鼠海马神经元原代培养,以培龄13d的细胞为实验标本,分对照组、L-NMDA组、CNTF+L-NMDA组、PTPi-2+CNTF+L-NMDA组,观察活细胞连续照相的形态变化和细胞存活率.结果:L-NMDA可引起海马神经元毒性反应,这一损伤反应在作用时间处于1-2h之间时呈时间依赖性,在L-NMDA作用浓度介于0-500μmol/L之间时呈剂量依赖性;CNTF可有效抑制L-NMDA对神经元的毒性作用;使用PTPi-2阻断已知的CNTF经典信号转导途径中JAK/STATs后,CNTF保护海马神经元抵抗L-NMDA的损伤作用仍然存在.结论:提示CNTF对海马神经元的保护作用可能通过未知的非基因组途径来完成.
关键词： 睫状神经营养因子 L-N-甲基-D-天冬氨酸 海马神经元 PTPi-2 -
乳酸-羟基乙酸共聚物导管内应用睫状神经营养因子修复猫动眼神经缺损
目的探讨乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)导管修复猫动眼神经缺损时,局部应用睫状神经营养因子(CNTF)能否促进神经再生.方法家猫22只随机分为生理盐水(NS)组、CNTF组,对照组.右侧动眼神经制成4mm缺损,NS组、CNTF组分别用PLGA导管+NS、PLGA导管+CNTF修复神经缺损;对照组不修复.比较三组猫动眼神经再生情况.结果术后14周时,NS组有7/9只猫、CNTF组有8/9只猫的动眼神经功能有一定程度的恢复,大体标本、光镜及电镜显示动眼神经再生成功;CNTF组平均轴突直径较大、轴突通过率较高,与NS组比较差异有显著性(P＜0.05).结论PLGA导管(明胶海绵、纤维蛋白胶)能有效修复猫颅内段动眼神经缺损;PLGA导管内局部应用CNTF能促进动眼神经再生.
关键词： 动眼神经 神经再生 乳酸-羟基乙酸共聚物 睫状神经营养因子 -
睫状神经营养因子与七叶皂苷钠联合应用对大鼠脊髓牵拉伤后细胞凋亡的影响
目的 探讨睫状神经营养因子(CNTF)与七叶皂苷钠(SE)联合应用对脊髓牵拉损伤的保护作用.方法 72只大鼠随机分为模型对照组、CNTF治疗组及CNTF+SE治疗组,牵拉致伤T10-12脊髓建立脊髓牵拉损伤模型.CNTF组经尾静脉注入CNTF20μl;CNTF+SE组除同法应用CNTF外,术后次日始腹腔内注射七叶皂苷钠1.5 mg·kg-1·d-1,连续应用7 d;模型对照组以相同方法给予等量生理盐水.伤后1 d、3 d、7 d、14 d进行BBB行为学评分,每组6只,然后处死动物取脊髓分别作HE染色、免疫组化及TUNEL,观察神经细胞结构的变化,并检测bcl-2、Bax阳性细胞及凋亡细胞.结果 (1)bcl-2:实验组7 d达高峰,CNTF组为(44.27±5.93)%,CNTF+SE组(46.26±6.01)%,模型对照组为(27.46±5.65)%,差异有统计学意义(P＜0.05);(2)bax:实验组3d达高峰,CNTF组为(39.15±5.91)%,CNTF+SE组(32.63±5.34)%,模型对照组为(46.69±7.52)%,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)各时间点治疗组细胞凋亡指数较模型对照组低.结论 睫状神经营养因子与七叶皂苷钠对大鼠脊髓牵拉造成的损伤有保护作用,二者联合应用具有协同作用.
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神经生长因子与睫状神经营养因子促进感觉和运动纤维再生的差异性研究
目的 探讨神经生长因子(NGF)与睫状神经营养因子(CNTF)对不同类型神经纤维再生的促进作用.方法 利用梭形双通道桥接管桥接32只SD大鼠坐骨神经10 mm缺损.将动物随机分为两组,A组:两支管内均加入医用几丁糖凝胶;B组:两支管内加入医用几丁糖凝胶后分别注入NGF和CNTF.术后12、16周行电生理检测和组织化学染色.结果 Holmes银染示B组CNTF侧再生纤维均较NGF侧再生神经外膜薄,纤维排列整齐,粗细均匀;硫代乙酰化胆碱染色示B组CNTF侧呈棕红色的阳性纤维较NGF侧数目较多,粗细均匀,排列整齐;而碳酸酐酶染色则显示B组NGF侧呈褐色的阳性神经纤维密度及排列稍较CNTF多.电生理检测见NGF侧再生神经复合肌肉动作电位(CMAP)和皮层体感诱发电位(CSEP)的潜伏期较CNTF侧长,而波幅较低(P＜0.05).结论 CNTF促进运动纤维再生的相对作用较强,而NGF具有相对较强的促进感觉纤维再生的作用.
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睫状神经营养因子对面神经损伤修复大鼠面神经核内STAT3磷酸化的影响
目的探讨重组人睫状神经营养因子(ciliary neurotrophica factor,CNTF)对面神经损伤修复大鼠面神经核运动神经元STAT3活性的影响.方法成年大鼠面神经切断后行端端吻合,局部给予CNTF,以生理盐水为对照.术后7 d,运用抗磷酸化STAT3抗体做免疫印迹(immuobloting,IB)以检测面神经核抽提物STAT3的磷酸化变化.结果局部给予CNTF组大鼠面神经核内p-STAT含量较对照组高(P＜0.05).结论局部给予重组CNTF可增强面神经损伤修复大鼠面神经核内STAT3的磷酸化.
关键词： 睫状神经营养因子 面神经损伤 端端吻合 信号转导与转录激活子-3 酪氨酸磷酸化 -
睫状神经营养因子对抑郁大鼠行为和海马神经元损伤的影响
目的观察中枢给予外源性睫状神经营养因子(CNTF)对抑郁大鼠行为和海马神经元损伤的影响.方法将60只SD雄性大鼠随机分为正常对照组(NC组)、生理盐水+抑郁组(S+D组)、CNTF 3 000 U+抑郁组(Ch+D组)和CNTF 300 U+抑郁组(Cl+D组),每组15只.采用长期不可预见性中等强度应激造成大鼠抑郁模型,于实验开始前1天和实验第7,14,22天用Openfield法测定大鼠行为,于应激第22天将其处死,固定脑组织,用组织化学、光镜和电镜等技术观察海马CA1、CA3及齿状回神经元的数目和形态. 结果 (1)应激第22天,S+D组体重增长的g数[(28.22±4.22)g]和蔗糖溶液消耗量[(7.33±2.43)g]均低于NC组[分别为(124.95±6.44)g和(20.50±4.80)g;P<0.01];而Ch+D组[分别为(64.72±15.69)g和(15.56±3.48)g]均高于S+D组(P<0.01).(2)Ch+D组的抑郁行为[水平运动为(9.80±1.23)次/3 min,垂直运动中位数为3次/3 min]较S+D组[水平运动为(1.16±0.41)次/3 min,垂直运动中位数为0次/3 min]有显著改善(P<0.01).(3)S+D组和Cl+D组各脑区神经元的丢失均多于NC组(P<0.05和P<0.01),而Ch+D组神经元的丢失则少于S+D组和Cl+D组(P<0.05).(4)Ch+D组各脑区神经元内的酸性磷酸酶活性显著降低.结论外源性给予CNTF可减轻抑郁大鼠海马神经元损伤,从而改善大鼠的抑郁样行为.
