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马来酸桂哌齐特治疗慢性脑供血不足的疗效观察
慢性脑供血不足又称慢性脑循环不足(CCCI),是一种常见的慢性缺血性脑血管病,是指大脑整体水平的血液供应减少的一类疾病.长期的慢性脑供血不足会使大脑发生皮质萎缩、海马神经元变性、脑白质疏松、脑胶质细胞增生等病理改变,终易导致老年痴呆.
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绝经后妇女长期低剂量激素替代疗法的研究——Ⅳ.脑代谢产物的磁共振波谱分析
目的 应用质子磁共振波谱(MRS)观察长期低剂量激素替代疗法(HRT)对绝经后妇女脑组织代谢产物的影响,并与载脂蛋白E不同基因型(ApoEε3和ε4)携带者进行比较分析.方法 筛选北京协和医院151例绝经后健康女职工纳入了本研究,其中68例采用了小剂量HRT(4～33年,平均11.7年),为HRT组.对照组83例为未经HRT的本院志愿者.所有研究对象采用聚合酶链反应限制性内切酶多型性(PCR-RFLP)方法测定ApoE基因分型,并采用3.0T VH3扫描仪行脑部MRS分析,以谱线下积分面积计算脑代谢产物N-乙酰天门冬氨酸(NAA)、胆碱化合物(Cho)、肌醇(mI)和肌酸(Cr).结果 NAA主要存在于神经元及其轴索.在ApoE ε3基因者中,HRT组和对照组灰质、白质和海马的代谢产物无明显差异,但在ApoEε4基因携带者中,NAA/Cr比值HRT组为(1.54±0.08),对照组为(1.45+0.13),呈显著性差异(P<0.05).结论 HRT对与认知相关的脑海马神经元有保护作用,特别对携带阿尔兹海默病(AD)的易感基因携带者具有重要意义.
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神经血管单元的体外神经模型构建
目的 建立一种可以模拟血脑屏障的体外细胞模型.方法 体外分离培养3种细胞(神经胶质细胞,血管内皮细胞和海马神经元),对培养的细胞进行细胞形态及细胞学鉴定,终建立成包含此3种细胞的三维模型即神经血管单元(NVU).结果 本试验成功培养了了体外神经血管单元并进行相关的细胞学鉴定,同时对模型的完整性和通透性进行了验证.结论 此模型的成功建立不仅可以用于替代体内血脑屏障(BBB),同时对于药物研发及化学物神经毒性的筛选及研究具有重要的意义.
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伊潘立酮联合阿立哌唑对慢性铝暴露痴呆模型大鼠海马神经元及BDNF和NGF表达的影响
目的 旨在探讨伊潘立酮联合阿立哌唑对慢性铝暴露痴呆模型大鼠海马神经元及BDNF和NGF表达的影响.方法 选择6周龄清洁级SD雄性大鼠建立慢性铝暴露痴呆模型,分为模型组、伊潘立酮组、阿立哌唑组和联合组,每组各20只,并同时设健康大鼠20只为对照组.伊潘立酮组大鼠接受0.05 g/ml伊潘立酮0.25 g/kg灌胃,阿立哌唑组大鼠接受0.05 g/ml阿立哌唑0.25 g/kg灌胃,联合组大鼠接受0.05 g/ml伊潘立酮0.25 g/kg和0.05 g/ml阿立哌唑0.25 g/kg灌胃,对照组大鼠和模型组大鼠均接受同等剂量生理盐水灌胃.各组大鼠均进行学习记忆测试和旷场实验测试.Annexin V/FITC法测定大鼠海马组织神经元凋亡率、RT-PCR法检测大鼠海马组织BDNF及NGF mRNA表达、Western blot法检测大鼠海马组织BDNF及NGF蛋白表达.结果 对照组和联合组大鼠电击次数显著低于模型组大鼠(P＜0.05),而水平穿越格数和竖立次数显著高于模型组大鼠(P＜0.05).联合组大鼠电击次数低于伊潘立酮组和阿立哌唑组大鼠,水平穿越格数和竖立次数高于伊潘立酮组和阿立哌唑组大鼠,但组间差异无统计学意义(P＞0.05).对照组、联合组、伊潘立酮组和阿立哌唑组大鼠海马组织神经凋亡率均显著低于模型组大鼠(P＜0.05).对照组、联合组、伊潘立酮组和阿立哌唑组大鼠海马组织BDNF及NGF mRNA、蛋白表达均显著高于模型组大鼠(P＜0.01).结论 伊潘立酮联合阿立哌唑能显著抑制慢性铝暴露痴呆模型大鼠海马神经元凋亡,上调BDNF及NGF表达.
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甲基苯丙胺对海马神经元的损伤作用及炎性因子表达的影响
目的 观察甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)对大鼠海马神经元的损伤作用及炎性反应.方法 原代培养大鼠胎鼠海马神经元,利用MTT和TUNEL实验技术观察METH对神经元的损伤;采用Affymetrix芯片结合实时荧光定量聚合酶链反应法(reahime-PCR)法,观察METH作用后海马神经元细胞炎性相关因子的表达变化.结果 METH对海马神经元的损伤具有浓度依赖性.30 μmol/L的METH即可引起神经元的活力降低.基因组芯片结果显示,与对照组相比,METH处理组与炎症信号相关,增加的有IL-1R、IL-1 rap、IL-4、IL-1O、IL-15、IL-24、Peli2、Peli3、NOS1、NOS2、Sig1-R、TNFα和TLR4;减少的有IL-13、Peli1、Traf3、Traf6和NOS3.实时PCR结果显示,与对照组相比,METH使炎性因子IL-1R、IL-1 rap、IL-4、IL-24、Peli1、Peli2、Peli3、Traf3、Traf6、NOS1、NOS2、NOS3、Sig1-R、TNFα和TLR4的mRNA表达增加,其中IL-1R、IL-1 rap、IL-4、IL-24、Traf6和NOS3的表达增加有统计学意义(P ＜0.05);IL-1β、IL-6、IL-10、IL-15和Traf3的mRNA表达降低,其中IL-1β和Traf3的表达减少有统计学意义(P＜0.05).结论 METH可导致海马神经元损伤,影响炎性及相关因子的表达,可能会对学习记忆能力造成潜在影响.
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氯胺酮对大鼠学习记忆功能及海马神经元的影响
目的 了解多次氯胺酮给药对学习记忆功能的影响及机制.方法 SD大鼠30只随机分为高剂量组、低剂量组和1个对照组,高、低剂量组大鼠分别予以氯胺酮50和10 mg/kg腹腔注射给药,1次/d,连续7 d.对照组予以等量生理盐水.用水迷宫测试各组大鼠寻找隐匿台的逃避潜伏期和空间搜索能力,原位检测海马神经元凋亡情况,电子显微镜观察神经元超微结构变化.结果 高剂量组逃避潜伏期显著延长(P＜0.01),并且空间搜索能力明显降低(P＜0.01);高剂量组海马神经元凋亡指数显著高于对照组(P＜0.01);电子显微镜显示高剂量组海马神经元有明显变性.结论 多次使用氯胺酮对学习记忆有损害,这种损害作用可能与海马神经元病变有关.
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氯化锰对大鼠海马的损伤及性别差异
目的 探讨锰对大鼠海马损伤及性别差异.方法 64只SD大鼠随机分为对照组和3个MnCl2染毒组,雌雄各半,腹腔注射分别给予生理盐水(对照组)及7.5、15和30 mg/kg的MnCl21次/d,每周连续5d,染毒4周,末次染毒后取脑组织及海马,每周测定动物体重,电感耦合等离子体质谱仪测定海马中锰含量,脑组织切片分别用苏木素-伊红(HE)染色及TUNEL法检测海马神经元损伤及凋亡.结果 染毒1～4周后,雄性大鼠体重较对照组显著降低(P＜0.05);而雌性与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),染毒4周后,雌、雄大鼠海马中锰含量呈剂量依赖性增长,均显著高于各自对照组(P＜0.01),而性别间差异无统计学意义;HE染色及凋亡检测发现MnCl2剂量依赖性地引起海马神经元嗜酸性变及凋亡,且各剂量组,雄性神经元嗜酸性变及TUNEL阳性细胞数显著高于雌性(P＜0.05).结论 锰可蓄积于大鼠脑海马组织,且性别间差异无统计学意义;锰可引起海马神经元变性及凋亡,且雄性较雌性更敏感,这与锰在海马的蓄积能力无关,可能存在其他毒效学因素.
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铅对急性分离和培养的大鼠海马神经元延迟整流钾通道的影响
目的为进一步探讨铅对中枢神经系统离子通道的毒性机制.方法采用全细胞膜片钳技术研究铅对急性分离和培养的大鼠海马神经元延迟整流钾通道(IK)的影响.
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宫内接触氯化甲基汞对发育阶段小鼠学习记忆能力和海马神经元超微结构的影响
目的研究宫内接触氯化甲基汞对发育阶段小鼠学习记忆能力及海马神经元超微结构的影响.方法对妊娠7～10天的小鼠每天灌胃给予0和4mg/kgbw氯化甲基汞.以出生6周龄仔鼠进行学习记忆能力测试及透射电镜技术观察宫内接触氯化甲基汞对发育阶段小鼠学习记忆能力及海马神经元超微结构的影响.结果氯化甲基汞暴露组学习记忆能力显著低于对照组(P<0.05).超微结构显示海马神经元细胞膜结构不清,部分核膜消失,核膜皱缩,核孔不清,染色质淡染;线粒体肿胀变大、粗面内质网扩张、空泡变性,核糖体减少;轴突环出现分层;有髓神经纤维脱髓鞘、板状分离.结论甲基汞可致小鼠学习记忆障碍和海马神经元超微结构改变;宫内接触氯化甲基汞引起海马神经元超微结构的改变与小鼠学习记忆障碍密切相关.
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十溴联苯醚诱导小鼠海马神经元细胞氧化应激和凋亡的机制
目的 探索十溴联苯醚(PBDE-209)诱导小鼠海马神经元细胞凋亡的潜在机制.方法 原代海马神经元细胞和海马神经元细胞系HT-22用0、6.25、12.5、25、50和100 μg/mL PBDE-209处理24 h.检测原代海马神经元细胞SOD活性,MDA、NO和GSH的含量,用AnnexinV/PI双染法检测海马神经元细胞系HT-22细胞凋亡情况,用免疫蛋白印迹Western blot检测Bax、Bcl-2、CHOP、GRP78、PERK和Caspase-12蛋白表达水平.结果 染毒组原代海马神经元细胞和HT-22细胞系细胞存活率显著降低(P＜0.05).原代海马神经元细胞MDA、NO含量显著升高(P＜0.05),GSH含量、SOD活性显著降低(P＜0.05);原代海马神经元细胞的Bax/Bcl-2比值、CHOP、Caspase-12蛋白表达水平升高(P＜0.05).HT-22细胞系GRP78、PERK、C aspase-12表达水平和细胞凋亡率升高(P＜0.05).结论 氧化应激和内质网应激可能参与PBDE-209诱导的海马神经元细胞凋亡过程.
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铅致原代培养海马神经元凋亡及Bcl-2、Bax、p53和NOS1基因表达的影响
目的 观察铅对原代培养海马神经元的致凋亡作用并初步探讨其机制.方法 原代培养乳大鼠海马神经元,不同浓度的醋酸铅(50、100和200μg/ml)染毒后,Giemsa染色观察铅诱导海马细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪检测铅诱导海马神经元的凋亡率,免疫细胞化学染色观察各浓度组细胞Bcl-2、Bax和p53表达,激光扫描共聚焦显微镜定量分析各浓度组神经元胞浆中游离Ca2+ 的平均荧光强度.结果 Giesma染色观察发现一定浓度醋酸铅作用于海马神经元后出现凋亡的形态学改变,且与剂量相关;流式细胞术检测结果铅浓度分别为50、100、200μg/ml作用细胞24h后,可致海马神经元凋亡率增加,与对照组相比均有统计学意义(P<0.01);免疫细胞化学染色结果表明Bcl-2蛋白表达随染铅剂量增大而减少.染色强度逐渐降低,Bax、p53表达随染铅剂量增大而上调,与对照组相比,细胞积分光密度(IOD)值有统计学意义(P<0.01);激光共聚焦显微镜检测结果显示随着醋酸铅剂量的增大,细胞内液Ca2+浓度也随着增大,醋酸铅3个浓度组的平均荧光强度均显著高于正常对照(P<0.01),并有剂量反应关系.结论 铅可诱导海马神经元不同程度的凋亡,提示细胞内Ca2+ 浓度升高可能与铅致海马神经元损伤和诱导其凋亡有重要关系.推测铅在一定浓度范围内可能影响海马神经元在学习记忆等功能的正常发挥.
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Wnt信号传导通路在阿尔茨海默病中的研究进展
本文对Wnt信号传导通路结构特点、功能及与阿尔茨海默病关系进行阐述。Wnt信号传导通路是调节神经干细胞增殖、分化的重要因素。Wnt信号通路被激活可以保护海马神经元，相反，Wnt信号通路失活可以促进阿尔茨海默病的发展，为治疗阿尔茨海默病提供了新的思路。
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脑康Ⅱ号对甲基乙二醛诱导大鼠海马神经元损伤的实验研究
目的 探讨脑康Ⅱ号对甲基乙二醛(MG)诱导大鼠海马神经元损伤的影响.方法 分离及培养新生鼠海马神经元,选用恰当的MG浓度建立神经元损伤模型,并给予脑康Ⅱ号含药血清(分别含生药0.5g·mL-1、1.0g·mL-1、2.0g·mL-1)预保护24h.免疫荧光染色观察微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达,并以氧化敏感的2,7-二氢二氯荧光素(DCFH-DA)染色,酶标仪测定细胞内活性氧(ROS)强度.结果 与对照组相比,100μM MG组MAP-2阳性细胞表达数目明显减少(P<0.05);脑康Ⅱ号治疗组MAP-2的表达水平明显高于100μM MG组(P<0.01);100μM MG能使细胞内ROS水平明显增加(P<0.01),而脑康Ⅱ号预保护能够抑制MG导致的细胞内ROS增高(P<0.05,P<0.01).结论 MG可能通过诱导细胞内ROS产生,导致神经元氧化应激损伤,而脑康Ⅱ号可能通过降低ROS的水平对神经元起保护作用.
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远志皂苷元对甲基乙二醛神经毒性的抑制作用研究
目的 观察甲基乙二醛(MG)对海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响及远志皂苷元对其的干预作用.方法 将体外培养的海马神经元,分为对照组、模型组及远志皂苷元低、中、高剂量组.模型组用MG处理,远志皂苷元低、中、高剂量组分别应用不同剂量的远志皂苷元(1.0、2.0、4.0 g/mL)预孵育12 h,再与MG共培养24h.采用MTT法检测细胞存活率,Western blot法检测MG对海马神经元凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax和Bcl-2表达的影响,以及远志皂苷元的干预效果.结果 远志皂苷元能明显改善海马神经元存活率;与对照组相比,模型组Caspase-3和Bax表达明显升高,Bcl-2表达降低;与模型组相比,远志皂苷元各剂量组Caspase-3和Bax表达明显降低,Bcl-2表达升高.结论 远志皂苷元在一定程度上可抑制MG引起的细胞凋亡,保护海马神经元.
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“改良三甲散”含药脑脊液对Aβ25-35诱导海马神经神经元细胞损伤IL-1α、IL-1β和IL-6的影响
目的：探讨改良三甲散对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）所致海马神经元细胞损伤时细胞炎性因子IL-1α、IL-1β和IL-6的影响。方法：将原代培养的神经元细胞分为空白组、模型组、石杉碱甲组和改良三甲散低、中、高剂量组。选择性培养7~10天后吸去培养液，分别加入空白培养液、正常脑脊液（生理盐水组）、石杉碱甲脑脊液和中药脑脊液低、中和高剂量，加培养液补至等量，37℃孵育2 h。然后除空白组之外的各组加入经老化处理的Aβ25-35（终浓度为5μmol·L-1），建立AD细胞模型。空白组加入等量的培养液，继续孵育24 h后收集细胞上清液。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测IL-1α、IL-1β和IL-6的含量。结果：改良三甲散能降低细胞上清液中IL-1α、IL-1β和IL-6的含量。结论：改良三甲散脑脊液能有效抑制细胞炎性因子IL-1α、IL-1β和IL-6的释放，具有一定的抗炎效应，从而保护海马神经元细胞。
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柴胡提取物对大鼠海马原代培养神经元5-HT3受体介导离子通道的影响
目的:探讨柴胡提取物(Radix BupleuriExtract,RBE)含药血清对抑郁情绪模型大鼠原代培养的海马神经元5-羟色胺3受体(5-HT3R)通道电流的作用.方法:复制抑郁情绪大鼠模型,以柴胡提取物进行药物干预,采用旷场实验和糖水偏好实验评价模型,制备各组大鼠血清并灭活除菌,对原代培养的大鼠海马神经元干预24 h后,采用全细胞膜片钳技术检测各组神经元5-HT3R通道电流.结果:与正常组相比,模型组大鼠旷场实验总分显著性降低(P＜0.01),糖水偏好系数显著降低(P＜0.01),模型组大鼠血清孵育的海马神经元电流密度值明显增加(P＜0.01);与模型组相比,柴胡提取物组和氟西汀组旷场实验总得分明显提高(P＜0.05,P＜0.01),糖水偏好系数均明显增加(P＜0.05,P＜0.05),柴胡提取物和氟西汀含药血清孵育的海马神经元电流密度值均明显减少(P＜0.01,P＜0.01).结论:柴胡提取物能改善抑郁情绪模型大鼠异常的5-HT3R通道电流,这可能是其发挥抗抑郁情绪的中枢机制之一.
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肾脑复元汤对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及凋亡相关蛋白的影响
目的 观察肾脑复元汤对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的学习记忆能力及脑内海马神经元凋亡相关蛋白(Bcl-2和Caspase-3)表达的影响.方法 将50只SPF级大鼠随机分为假手术组,模型组,肾脑复元汤高、中、低剂量组,每组10只.除假手术组外,其余各组均采用立体定向仪将β淀粉样蛋白(Aβ)25-35注入双侧脑室制备AD大鼠模型.造模后24 h,假手术组、模型组予蒸馏水灌胃,肾脑复元汤高、中、低剂量组予23.2 g/kg、11.6 g/kg、5.8 g/kg剂量肾脑复元汤灌胃.采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆功能,Western Blot方法观察大鼠海马神经元Bcl-2和Caspase-3蛋白表达情况.结果 模型组大鼠在5 d逃避潜伏期,后3 d逃避潜伏期时间均明显延长,大鼠跨越原平台位置的次数明显减少,Caspase-3表达明显升高,Bcl-2表达明显降低,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01).经肾脑复元汤治疗后,肾脑复元汤各剂量组大鼠在5 d逃避潜伏期和后3 d逃避潜伏期的时间均明显缩短,而大鼠跨越原平台位置的次数明显增多,Caspase-3表达显著下降,Bcl-2表达显著升高,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 肾脑复元汤能通过增强受损海马神经元Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的表达,对海马神经元有抑制凋亡作用,可改善AD大鼠学习记忆能力.
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穴位埋线对衰老模型大鼠慢性应激下海马神经元结构的影响
目的:通过观察穴位埋线对衰老模型大鼠慢性应激下海马神经元结构的影响,探讨慢性应激对衰老机体的促衰老作用及穴位埋线的抗衰机制.方法:雄性SD大鼠随机分为空白组、衰老组、应激组、埋线组,每组12只.采用D-半乳糖溶液腹腔注射制作衰老模型,采用长期制动应激造成慢性应激,埋线组分别于“百会”“肾俞”“内关”“肝俞”交替埋线8次,1次/周.HE染色,于光镜下对大鼠海马锥体细胞进行计数,并于电镜下观察海马神经元细胞结构的变化.结果:光镜下空白组大鼠海马锥体细胞排列整体密集,形状规则;衰老组大鼠海马锥体细胞排列较稀疏;应激组海马锥体细胞排列稀疏,形态不规则;埋线组大鼠海马锥体细胞排列较密集.衰老组、应激组大鼠海马锥体细胞数量明显少于空白组(P＜0.05,P＜0.01),应激组与衰老组相比,其海马锥体细胞数量减少更为显著(P＜0.01),而埋线组海马锥体细胞数量明显升高(与应激组比较P＜0.01).电镜下观察,空白组神经元形态正常,衰老组神经元体积明显缩小,应激组神经元呈现极度不规则形态,埋线组的神经元异常形态得到明显改善.结论:衰老模型大鼠的海马神经元数量和结构呈现增龄性老化现象,慢性应激可加重对海马神经元的损害,加速脑衰老;穴位埋线可拮抗应激性衰老机体海马神经元的进一步损害,从而延缓脑衰老.
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地黄饮子对海马神经元AD模型细胞凋亡的调控作用
目的:探讨古方地黄饮子含药脑脊液对β-淀粉样蛋白(A β25～35)所致海马神经细胞AD(Alzheimer's Disease)模型凋亡基因bcl-2、bax和caspase-3表达的影响.方法:运用中药脑脊液药理学的方法把体外培养成熟的大鼠海马神经细胞分为空白组、模型组、VitE对照组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组.6组分别加入正常培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、中药脑脊液低、中、高剂量,继续孵育2h.然后除空白组加入等量培养液外,其它各组加入经老化处理的A β25～35(终浓度为10μmol/L)共同孵育24h,胰蛋白酶消化,离心收集细胞,提取总RNA.应用RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳方法测定bcl-2、bax和caspase-3基因的表达.结果:地黄饮子脑脊液能剂量依赖性地增强受损海马神经元bcl-2基因的表达,降低bax和caspase-3基因的表达.说明对A β25～35所致离体海马神经细胞凋亡有抑制作用,其作用机理可能与地黄饮子升高bcl-2/bax的比值,抑制线粒体释放细胞色素C,控制caspase-3的激活有关.
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糖脂清方通过保护海马神经元对提高2型糖尿病大鼠学习记忆能力的影响
目的:观察糖脂清方提高2型糖尿病大鼠学习记忆能力,保护海马神经元的作用.方法:SD雄性大鼠,采用高糖高脂饲料加链脲佐菌素(30 mg·kg-1)腹腔注射制作2型糖尿病模型.将造模大鼠随机分为模型组、糖脂清高、中、低(12,6,3 g·kg-1)剂量组,另设正常组.连续灌胃8周后进行水迷宫行为学测试,结束后处死取材.苏木-伊红(HE)染色观察海马组织病理形态学结构,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测海马神经元细胞凋亡情况.结果:与模型组比较,糖脂清方能明显降低2型糖尿病大鼠血糖(P＜0.05,P＜0.01),明显缩短逃避潜伏期,增加穿越平台次数、原平台游泳路程及游泳时间(P＜0.05,P＜0.01);显著改善海马组织病理情况,更加显著地降低海马神经元细胞凋亡指数(P＜0.D1).结论:糖脂清方可以显著降低高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠模型的血糖水平,改善胰岛素抵抗,提高大鼠学习记忆能力,减少海马神经元细胞凋亡,并具有保护作用.
