水源水中有机提取物对睾丸损伤的病理研究

大量文献指出环境污染是引起人类男性生殖能力下降的主要原因,其中有机污染物是可能的因素,例如增塑剂污染和农药的使用等[1].其中邻苯二甲酸酯类物质是典型的睾丸毒剂,可引起睾丸萎缩,精子数目与活力下降,造成动物的不育[2].

醋酸铅对雄性小鼠睾丸Y染色体基因Ddx3y蛋白表达的影响

目的 通过观察亚慢性铅暴露对小鼠睾丸组织Y染色体基因Ddx3y蛋白表达的影响,为探讨铅的雄性生殖毒作用机制提供新的靶标依据.方法:昆明种小鼠48只,按体重将小鼠随机分为对照组,0.5、1.0和1.5 g/L醋酸铅染毒组.通过自然饮用含不同浓度醋酸铅的方式使小鼠染铅,连续染毒60 d.取小鼠睾丸组织,用苏木素-伊红(HE)染色法进行组织病理学观察,用Western blotting和免疫组化方法检测睾丸组织Ddx3y蛋白的表达及组织分布.结果 与对照组比较,染铅组睾丸曲细精管内细胞排列松散、紊乱、层次不清,精原细胞层和初级精母细胞层之间间隙变宽,且随着染铅浓度的增加精子细胞明显减少.Western blotting检测结果显示,染铅组的小鼠睾丸组织中Ddx3y蛋白表达显著低于对照组,且有剂量-反应关系.免疫组化结果显示,随着染铅剂量的增加,睾丸组织中抗Ddx3y蛋白免疫反应明显降低.结论 亚慢性铅暴露可抑制小鼠精子的发生、发育和下调睾丸组织Y染色体基因Ddx3y蛋白的表达.

茶多酚拮抗镉致雄性大鼠生殖毒性的初步研究

目的探讨茶多酚对镉致雄性大鼠生殖系统损害的拮抗作用.方法选用体重200 g左右的清洁级SD系雄性大鼠30只,按体重随机区组分为3组:(Ⅰ)阴性对照组、(Ⅱ)单染镉组、(Ⅲ)镉+茶多酚组.(Ⅱ)、(Ⅲ)组隔日皮下注射氯化镉(以Cd2+计1 mg/kg体重),(Ⅰ)组皮下注射等量生理盐水,连续2周.(Ⅲ)组染镉的同时连续灌服茶多酚(0.1g/kg)4周,(Ⅰ)、(Ⅱ)组灌于等量双蒸水,实验结束后留尿、取睾丸组织作病理形态学检查并测定相关指标.

新型环氧合酶-2抑制剂Ia-10和Ib-10的生殖毒性的早期评价/雄性生殖毒性评价体系及完善

膳食脂肪含量对乐果致雄性大鼠生殖毒性的影响

为观察膳食脂肪含量对乐果致雄性大鼠生殖毒性的影响,将32只断乳SD大鼠随机分成三个染毒组和一个对照组,染毒组灌喂乐果12.50mg/(kg*d),并分别饲以高脂、中脂和低脂饲料;对照组每天灌喂生理盐水,同时饲以中脂饲料.各组均连续灌喂60天.结果发现:(1)高脂或低脂饲料可明显减轻乐果对血清睾酮(To)和间质细胞刺激素(LH)水平的影响,而对血清卵泡刺激素(FSH)水平的变化没有明显作用;(2)低脂饲料可明显减轻乐果对大鼠睾丸酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)活性的抑制,而对睾丸碱性磷酸酶(ALP)活性降低没有明显影响;(3)高脂或低脂饲料可减轻乐果对睾丸组织的损伤.以上结果提示在饲料中添加或减少脂肪含量可能会在相同或不同环节上不同程度地减轻乐果对雄性大鼠生殖系统的损害.

宫内和哺乳期接触多氯联苯118和126对雄性仔鼠生殖功能影响

目的 探讨宫内和哺乳期接触多氯联苯(PCB)118和PCB126混合物对雄性子代大鼠生殖功能的影响.方法 根据浙江某地母乳混合样中PCB118和PCB126含量及比例,按10、100和500倍配制成剂量为0.096、0.96和4.8 μgTEQ/kg的混合物,在孕15d对SD大鼠进行一次经口染毒,对母鼠的体重、雄性子代各发育阶段的肛门生殖口距离(AGD)和体重、脏器重量、精子计数及血清中睾酮水平等指标进行评估.结果 各剂量组对母鼠没有明显毒性,0.96和4.8μg TEQ/kg组雄性仔鼠出现体重增加迟缓、AGD及精子数减少现象；雄性生殖器官如附睾、前列腺和精囊的重量改变只发生在出生后70日龄(PND70) 4.8 μg TEQ/kg组和0.96 μgTEQ/kg组(附睾)；血清睾酮水平没有发生明显变化.结论 宫内和哺乳期接触PCB118和PCB126混合物在未观察到母体毒性剂量下能延迟子代雄性大鼠生长发育进程,并对其生殖系统产生损害.

环境内分泌干扰物的雄性生殖毒性及抗雄激素作用机制

随着工、农业的发展,多种用于工、农业生产的人工合成化学物质对环境造成了普遍污染,其中,农药、增塑剂、抗菌药物、阻燃剂、重金属等对人类健康造成的危害备受关注.上述物质可扰乱生物体内的激素平衡,导致生殖和发育异常,被称为"环境内分泌干扰物(environmental endocrinedisruptors,EEDs)"[1].EEDs使多种野生动物的繁殖能力下降,濒于灭绝,同样也威胁到人类的生殖健康,笔者对环境内分泌干扰物的雄性生殖毒性及抗雄激素作用机制综述如下.一、EEDs的雄性生殖毒性1.EEDs对性别分化的影响:Hertz-Picciotto等[2]发现,多氯联苯( polychlorinated biphenyls,PCBs)血清浓度在第九十百分位数的女性与血清浓度在第十百分位数的女性相比,其男婴出生比率下降了33％,即PCBs血清浓度每升高1 μg/L,男婴出生率下降7％.另有文献报道,在母亲孕前职业暴露于PCBs的1506名初产婴儿中,男婴占49.8％(750/1506),而对照组(无PCBs暴露)1506名初产婴儿中,男婴占了49.9％ (751/1506)[3].因此,笔者认为尚无确切证据表明母亲孕前暴露于PCBs与初产婴儿性别比例存在相关性.

药物雄性生殖毒性评价考虑要点及FDA相关指导原则介绍

雄性生殖毒性研究是药物非临床安全性评价的重要内容.本文首先介绍了美国食品药品监督管理局(FDA)2015年发布的药物雄性生殖毒性相关的2个指导原则.随后根据药品审评及安全性研究实践,并结合国内外指导原则中雄性生殖毒性相关内容,讨论目前对药物雄性生殖毒性评价的一些考虑要点.

邻苯二甲酸单丁酯对雄性小鼠睾丸的氧化损伤

目的 探讨邻苯二甲酸单丁酯(mono-n-butyl phthalate,MBP)对小鼠睾丸氧化损伤的影响.方法 36只性成熟的雄性Balb/c小鼠随机分为4个MBP染毒组(25、50、100、200 mg/kg)和1个空白对照组、1个溶剂对照组(食用油),每组6只,灌胃14d后观察睾丸的组织形态学损伤；检测睾丸组织的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量.结果 100和200 mg/kg组小鼠睾丸组织不同发育时期生殖细胞的数量减少；随着MBP染毒剂量的升高,睾丸组织ROS含量与MDA含量逐渐上升,GSH含量逐渐降低；100和200 mg/kg组上述指标与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 较高剂量的MBP会引起小鼠睾丸细胞的氧化损伤.

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯宫内暴露所致子代雄性大鼠睾丸氧化应激及维生素C的干预作用

目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)宫内暴露对子代雄性大鼠睾丸脂质过氧化水平的影响及维生素C(vitamin C,Vit C)的抗氧化应激作用.方法将20只健康成年清洁级Wistar妊娠大鼠按体重随机分为6组,分别为对照(玉米油)组和低(10 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(500 mg/kg)剂量DEHP染毒组以及中(100mg/kg)、高(500 mg/kg)剂量DEHP+Vit C染毒组,中、高剂量DEHP染毒组每组孕鼠4只,其余各组每组孕鼠3只.自妊娠第0～19天,灌胃染毒DEHP,染毒容量为10 ml/kg,每天1次;采取自由饮水方式染毒Vit C(125 g/L),每天约40 ml.子代雄性大鼠出生后第6周,测定睾丸组织中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力.结果与对照组相比,高剂量DEHP染毒组仔鼠睾丸组织中MDA含量明显升高,高剂量DEHP染毒组和高剂量DEHP+Vit C染毒组GSH-Px活力以及高剂量DEHP染毒组和中、高剂量DEHP+Vit C染毒组SOD活力明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05).各染毒组仔鼠睾丸组织中GSH含量和CAT活力与对照组比较,差异均无统计学意义.与中剂量DEHP单独染毒组相比,中剂量DEHP+Vit C染毒组仔鼠睾丸组织中GSH含量和SOD、CAT活力均升高,但仅SOD活力明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05).与高剂量DEHP单独染毒组相比,高剂量DEHP+Vit C染毒组仔鼠睾丸组织中MDA含量降低,GSH含量、GSH-Px活力及CAT活力升高,但差异均无统计学意义.结论 DEHP宫内暴露可导致子代雄性大鼠睾丸组织的脂质过氧化水平增加,Vit C对于DEHP所致生殖系统的氧化损伤具有一定的保护作用.

辛硫磷与氰戊菊酯对大鼠睾丸的联合毒性作用

目的研究辛硫磷(Pho)与氰戊菊酯(Fen)对大鼠睾丸的联合毒性作用.方法Pho与Fen分别选择两个剂量水平(1/180 LD50和1/20 LD50)并作混配;SD雄性大鼠分成7个剂量组,1次/d灌胃,5d/周,连续60d,组成2个2×2析因设计实验,即Pho组(8.2、73.5 mg/kg体重),Fen组(3.3、30.0 mg/kg体重),两个Pho+Fen组分别为(Pho 8.2+Fen 3.3)、(Pho 73.5+Fen 30.0)mg/kg体重,1个对照组.结果析因分析显示,Pho+Fen联合染毒,在低剂量水平,对大鼠精子运动参数、精子生成量、睾丸酶活力和睾酮(T)含量等无交互影响,联合作用为相加作用;在高剂量水平,对精子的运动参数如直线运动速度(VSL)、曲线运动速度(VCL)、鞭打频率(BCF)、直线性(LIN)、前向性(STR)等和精子生成量、睾丸γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)及乳酸脱氢酶(LDH)活力、T水平等存在交互影响,表现为拮抗作用,对酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)及葡萄糖6-磷酸脱氢酶(G-6PDH)活力无交互影响,表现为相加作用.结论 Pho和Fen低剂量水平对大鼠睾丸的联合作用特征呈相加作用,高剂量水平呈拮抗作用或相加作用;Pho和Fen两个剂量水平的联合作用与单剂农药相比,未见有明显的增毒效应,但均能对大鼠睾丸产生毒性.

某蓄电池厂铅作业男工血铅、尿铅及血清中性激素水平的调查

目的 评价铅作业男性工人的血铅、尿铅水平及其影响因素,研究铅作业男性工人的血清中性激素水平的改变并探讨其机制.方法 2011年1月,选取深圳市某蓄电池厂铅作业男工120名作为接触组,按工作场所空气中铅含量的水平分成高、中、低3个接触浓度组;并选取来自同一家工厂未接触铅作业的40名男工作为对照组,测定4个组人群的血铅、尿铅、血清睾酮、FSH(促卵泡刺激素)及LH(促黄体生成素)的水平并进行统计分析.结果 工作场所空气中铅浓度平均为0.29mg/m3,样品超标率为90%;3个接触组血铅、尿铅含量、尿铅异常率均明显高于对照组,差异均有统计学意义,且各接触组间血铅水平及异常率比较,差异也均有统计学意义(均P<0.01);随着工龄的增长,工人血铅、尿铅水平和异常率均有升高的趋势;中、高浓度接触组工人的血清睾酮水平均低于对照组和低浓度接触组,而血清FSH水平均高于对照组和低浓度接触组,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 在该次研究的条件下,工龄增加、工作场所中铅浓度超标是导致血铅、尿铅水平升高的主要危险因素;铅暴露可能对下丘脑-垂体-睾丸轴的性激素分泌功能造成影响,从而对男性工人的生殖系统产生内分泌干扰作用.

复方虫草菌丝粉对镉致大鼠睾丸酶活性影响

镉是环境中广泛存在的有毒重金属元素之一,在环境中不能生物降解,所以因工业污染导致环境中镉的含量逐年上升,尤其是城市居民从环境中接触的食物、茶、吸烟等摄入体内的镉也呈上升趋势.睾丸是镉的敏感器官之一,小剂量镉即可导致大鼠睾丸精子数减少,附睾内少精或无精,进而影响雄性生育功能.本文通过观察复方虫草菌丝粉(简称虫草粉)对镉致大鼠雄性生殖毒性的拮抗作用及其相关机制,为镉中毒的预防和治疗提供科学依据.

糖原染色与核苷酸标记法评价雄性生殖毒性

近年来,雄(男)性生殖毒性危害评价问题日益受到重视.由于精子细胞的顶体中有大量糖原,因此通过糖原染色(PAS)可以区分生精上皮不同时期[1],从而显示其更精确地评价睾丸生殖毒性病理学损伤的特点.随着对生殖毒性机制研究的不断深入,发现一些物理或化学因素可以通过诱发生精细胞凋亡而造成雄性生殖毒性[2～4].研究细胞凋亡常需要应用脱氧尿嘧啶核苷酸末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUDP-nick end hbeling,TUNEL)检测DNA片段断裂.为了探索睾丸生精上皮细胞具体在哪一个时段(周期)对外源化合物诱导的细胞凋亡更为敏感,本文应用糖原染色与TUNEL联合方法探讨建立雄性生殖毒性病理学评价技术.

妊娠期正己烷暴露对雄性仔代大鼠生殖发育影响

目的 探讨妊娠期正己烷暴露对雄性仔代大鼠生殖发育的影响.方法 24只Wistar孕鼠随机分为4组,于孕期第1 ～20 d静式吸入0(对照组)、360、1 800、9 000 mg/m3正己烷;雄性仔鼠从出生后第9 d(PND9)开始称重,PND69处死,计算睾丸及附睾脏器系数;组织切片观察睾丸病理学改变;计算精子活率、活力、密度及畸形率;测定血清睾酮水平和睾丸丙二醛含量.结果 正己烷9 000 mg/m3组雄性仔鼠体重增长明显低于对照组,睾丸脏器系数[(1.05 ±0.07) mg/g]低于对照组[(1.12 ±0.05)mg/g](P＜0.05),精子活率和活力低于对照组;雄性仔鼠血清睾酮含量[(1.22 ±0.45) ng/mL]低于对照组[(2.53 ±0.99) ng/mL] (P ＜0.05);正己烷9 000 mg/m3组雄性仔鼠睾丸组织出现曲精小管排列疏松、精原细胞萎缩、曲精小管管壁变薄等病理改变;各组雄性仔鼠睾丸丙二醛含量无明显差异.结论 妊娠期高剂量正已烷暴露可通过非脂质过氧化途径介导明显抑制雄性仔代生殖发育.

维生素C拮抗氟致大鼠雄性生殖损害的初步研究

探讨在饮水中加入1.0mg/ml的维生素C时对氟染毒大鼠雄性生殖系统损害的影响.结果表明,实验剂量的维生素C对雄性大鼠饮用150mg氟化钠/L饮水所导致的附睾精子总数减少、血清和睾丸组织中LPO含量升高、附睾ATP酶活性抑制等损害作用具有明显的拮抗作用,与饮水中加入2.0mg亚硒酸钠/L的拮抗效果类似.但不能显著改善睾丸和附睾组织中谷胱甘肽过氧化物酶的活性.机理有待进一步研究.

羟基酪醇拮抗PFOS雄性小鼠生殖损害作用

目的 探讨羟基酪醇对全氟新烷磺酸(PFOS)所致雄性小鼠生殖损害的拮抗作用.方法 50只雄性昆明系小鼠随机分成对照组、PFOS组及PFOS+羟基酪醇低、中、高(12.5、25.0、50.0 mg/L)组,通过饮水加PFOS、羟基酪醇的方法染毒35 d,观察小鼠精子计数、活动率及畸形率、睾丸生化标志酶、血清性激素水平以及氧化应激指标的改变.结果 低、中、高剂量羟基酪醇组小鼠精子数量分别为21.01×107、22.76×107、23.76×107个/g附睾,精子活动率分别为55.24％、71.03％、83.19％,与PFOS组比较,精子数量增多,精子活动率升高；与PFOS组比较,中、高剂量羟基酪醇组小鼠乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、促黄体生成素(LH)和血清睾酮(T)水平均有不同程度升高(P＜0.05),各剂量羟基酪醇组超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力升高、丙二醛(MDA)含量降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 羟基酪醇可以拮抗PFOS所致的小鼠雄性生殖功能损伤,其主要机制可能与氧化应激和性激素调节有关.

亚慢性砷暴露对小鼠精子发育及Uty基因表达影响

目的 探讨亚慢性砷暴露对小鼠精子发育和调控基因Uty表达影响.方法 雄性小鼠随机分为对照组、三氧化二砷(As2O3)1、2、4 mg/L暴露组,每组10只,自然饮用含不同浓度As2O3水染毒,连续暴露60 d.取双侧睾丸、附睾,称重计算脏器系数,显微镜下观察精子活动度,苏木素-伊红染色观察精子畸形率和生精周期各级生精细胞数量,实时定量PCR检测Y染色体Uty基因表达.结果 对照组、1、2、4 mg/L染砷组小鼠睾丸脏器系数分别为(3.6±0.41)、(3.47±0.41)、(3.15±0.46)、(3.14±0.45),附睾脏器系数分别为(0.82±0.14)、(0.80±0.12)、(0.70±0.11)、(0.68±0.11),与对照组比较,2、4 mg/L染砷组小鼠睾丸、附睾脏器系数明显降低(P＜0.05);2、4 mg/L染砷组小鼠精子活动度分别为82％、81％,明显低于对照组(97％),差异有统计学意义(P＜0.05),4 mg/L染砷组小鼠精子畸形率(6.6％)明显高于对照组(2.6％)(P＜0.05).与对照组比较,4 mg/L染砷小鼠睾丸中A型精原细胞、前细线期精母细胞、中粗线期精母细胞、第七阶段精细胞数量[分别为(33.4±3.8)％、(4.0±4.1)％、(125±1.2)％、(220±18.8)％]明显下降(P＜0.05);与对照组比较,2、4 mg/L砷染毒小鼠睾丸和附睾内Uty基因表达下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 亚慢性砷暴露影响小鼠精子发育,其雄性生殖毒性作用可能与Uty基因表达下调有关.

亚慢性砷暴露对雄性小鼠脑组织性基因Ddx3y和Uty表达的影响

[目的]观察亚慢性砷暴露对雄性小鼠脑组织性基因Ddx3y和Uty表达的影响.[方法]SPF级雄性小鼠30只,按体重将小鼠随机分为对照组、低剂量染砷组(1 mg/L As2O3)和高剂量染砷组(4 mg/L As2O3),每组10只.自然饮水使小鼠染砷,连续染毒60 d后取脑.RT-PCR法检测雄性小鼠脑组织性基因Ddx3y和Uty的mRNA表达变化.[结果]与对照组比较,染砷组小鼠大脑髓质和小脑组织Ddx3y和Uty mRNA表达量明显增多,差异有显著性意义(P<0.05).而大脑皮质性基因Ddx3y和Uty mRNA表达量明显减少,差异有显著性意义(P<0.05),尤其高剂量染砷组mRNA表达变化更明显.[结论]亚慢性砷暴露可下调雄性小鼠脑皮质性基因Ddx3y和Uty的mRNA表达,同时上调髓质和小脑性基因Ddx3y和Uty的mRNA表达.

醋酸铅对雄性小鼠附睾Y染色体基因Ddx3y蛋白表达的影响

[目的]通过观察亚慢性铅暴露对小鼠附睾组织Y染色体基因Ddx3y表达的影响,为探讨铅的雄性生殖毒作用机制提供依据.[方法]昆明种小鼠48只,按体重将小鼠随机分为对照组、0.5 g/L、1.0 g/L和1.5 g/L醋酸铅染毒组.通过自然饮用舍不同浓度醋酸铅的方式使小鼠染铅,连续染毒60d后取附睾组织.HE染色观察组织病理学变化,Western blotting和免疫组化方法检测附睾组织Ddx3y蛋白的表达及组织分布.[结果]与对照组比较,染铅组附睾管内精子数和分泌液均减少,尤其1.5 g/L染铅组为明显.Western blotting检测结果显示,染铅组的小鼠附睾组织中Ddx3y蛋白表达明显低于对照纽,且有剂量-反应关系.免疫组化结果显示,随着染铅剂量的增加,附睾组织中抗Ddx3y蛋白免疫反应明显降低.[结论]亚慢性铅暴露显著下调小鼠附睾组织Y染色体基因Ddx3y蛋白表达.