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糖原染色与核苷酸标记法评价雄性生殖毒性
近年来,雄(男)性生殖毒性危害评价问题日益受到重视.由于精子细胞的顶体中有大量糖原,因此通过糖原染色(PAS)可以区分生精上皮不同时期[1],从而显示其更精确地评价睾丸生殖毒性病理学损伤的特点.随着对生殖毒性机制研究的不断深入,发现一些物理或化学因素可以通过诱发生精细胞凋亡而造成雄性生殖毒性[2～4].研究细胞凋亡常需要应用脱氧尿嘧啶核苷酸末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUDP-nick end hbeling,TUNEL)检测DNA片段断裂.为了探索睾丸生精上皮细胞具体在哪一个时段(周期)对外源化合物诱导的细胞凋亡更为敏感,本文应用糖原染色与TUNEL联合方法探讨建立雄性生殖毒性病理学评价技术.
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锰对小鼠生育指数和生精上皮细胞数影响
目的 研究锰对雄性小鼠生殖能力的影响,并探讨其时间-效应和剂量-效应关系.方法 将雄性小鼠随机分为3个染锰组和1个对照组,分别给予腹腔注射7.5,15.0,30.0mg/kg氯化锰和生理盐水,于染锰第3,7,14,28,56 d处死小鼠5只/组.观察小鼠睾丸脏器系数和染锰56 d各组雄性小鼠生殖能力、曲细精管横截面积及生精上皮细胞数量.结果 染锰56 d,与对照组比较,15和30 mg/kg组睾丸脏器系数差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);30mg/kg组生育指数和总死胎率差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.05);3个染锰组的平均着床数与平均活胎率差异均有统计学意义(P＜0.01);曲细精管横截面积和生精上皮细胞数差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 各剂量的MnCl2对雄性小鼠生殖能力均有损害作用,以染锰56 d,30 mg/kg对雄性小鼠生殖能力的损害为严重.
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小牛血清及维生素对小鼠生精上皮细胞冻存的影响
目的: 探讨维生素C(VC)、维生素E(VE)及小牛血清(NBS)对冻存小鼠生精上皮细胞的影响. 方法: 在DMEM培养液-10%二甲基亚砜(DMSO)的基础上,分别添加0～20% NBS,以及在DMEM培养液-10%DMSO-10%NBS的基础上,分别添加150 μg/ml VC及50 μg/ml VE,冷冻保存7 d龄小鼠生精上皮细胞,37 ℃水浴复苏,锥虫蓝染色检查细胞复苏率. 结果: 冻存液中分别含0、5%、10%及20%NBS时,细胞复苏率分别为83.4%、84.7%、85.7%及83.6%,各复苏率之间差异无显著性(P>0.05).冻存液中分别含150 μg/ml VC及50 μg/ml VE时,细胞复苏率分别为88.0%及82.9%,其复苏率与未加维生素的冻存液组(85.7%)相比差异无显著性(P>0.05). 结论: 在冻存液中添加不同浓度的NBS及添加抗氧化剂VC或VE,对小鼠生精上皮单细胞冻存没有明显的保护作用,不能显著提高细胞复苏率.
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氯化锰对小鼠睾丸组织形态学的影响
目的 研究锰对小鼠睾丸组织形态学的影响,探讨其时间-效应关系和剂量-效应关系.方法 将雄性小鼠随机分为3个染锰组和1个对照组,分别给予腹腔注射7.5、15.0、30.0mg/kg氯化锰和生理盐水,于染锰第3、7、14、28、56天处死小鼠5只/组.观察小鼠睾丸组织学的变化和染锰56d各计量组曲细精管横截面积及生精上皮细胞数量.结果 与对照组比较睾丸组织的损伤随染锰剂量的增加和时间的延长而逐渐加重;染锰56d与对照组比较,曲细精管横截面积和生精上皮细胞数差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 各剂量的MnCl2对雄性小鼠睾丸组织形态结构均有损害作用,以染锰56d,30mg/kg对小鼠的损害为严重,染锰56d,7.5mg/kg对小鼠睾丸曲细精管横截面积和生精上皮细胞明显减少,证实7.5mg/kg的锰对小鼠睾丸曲细精管横截面积和生精上皮细胞有明显的损害.
