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酸性成纤维细胞生长因子对缺血再灌注小肠绒毛细胞内bax和bcl-2表达的影响
目的:探讨外源性酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对大鼠肠缺血再灌注后小肠绒毛细胞凋亡以及凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响.方法:采用肠系膜上动脉(SMA)夹闭45 min后松夹造成缺血再灌注(I/R)损伤的动物模型,将108只Wistar大鼠随机分成假手术组(C)、肠缺血组(I)、肠缺血-再灌注组(R)和aFGF治疗组(A).根据缺血后再灌注时间的不同又将R组和A组又分成0.25,0.5,1,2,6,12,24和48 h共8组,每组6只动物.A组和R组在松开动脉夹的同时,分别经尾静脉注入20μg/kg aFGF和生理盐水0.15 mL.各时相点取小肠组织,通过末端脱氧核糖转移酶介导的生物素化脱氧尿嘧啶缺刻标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率;利用免疫组织化学方法检测bax和bcl-2蛋白表达;用RT-PCR方法测定bax和bcl-2基因的表达水平.结果:缺血再灌注后2,6,和12 h,A组中大鼠小肠绒毛组织的细胞凋亡率分别为(41.17+3.49%),(42.83+5.23%)和(53.33+6.92%),显著低于C组中各对应时间点上的细胞凋亡率(P<0.05).I/R后小肠绒毛细胞内bax基因表达逐渐增强,蛋白含量升高,而bcl-2基因转录迅速降低,蛋白含量减少.在再灌注2-12 h,A组中bcl-2基因转录水平和蛋白含量都较C组增加,而bax基因的mRNA含量和蛋白水平均较C组降低.结论:外源性aFGF能够减轻缺血再灌注对小肠绒毛的损伤,其机制可能与aFGF促进bcl-2基因转录、抑制bax基因表达相关.
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血小板源生长因子和脂多糖对吸烟大鼠小气道平滑肌细胞凋亡的影响
采用免疫组织化学和末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TUNEL)来观察血小板源生长因子(PDGF)和脂多糖(LPS)对体外培养的吸烟大鼠小气道平滑肌细胞Bcl-2、Bax和凋亡的影响,以探讨其对小气道平滑肌细胞凋亡的调节作用.
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神经生长因子和高压氧对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经再生的影响
新生儿窒息所致缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD),是造成新生儿死亡和导致神经系统后遗症的主要原因,目前临床上以对症支持治疗为主,尚无特效疗法.近年不少文献报道采用神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和高压氧(hyperbaric oxygenation,HBO)治疗新生儿HIBD,但疗效不肯定.本研究于2006年4~11月通过建立新生鼠HIBD模型,给予外源性NGF和HBO早期治疗,并结合5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记技术,通过动态检测新生鼠脑缺氧缺血后海马齿状回(dentate gyrua,DG)巢蛋白(Nestin)表达、Brdu标记阳性神经细胞数的变化,比较NGF和HBO对新生鼠HIBD后神经增殖再生的影响.
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静脉灌注氟尿嘧啶致3级静脉炎的药学监护
氟尿嘧啶为抗代谢药类抗肿瘤药物,进入人体内后先转变为5-氟-2-脱氧尿嘧啶核苷酸,能够抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶,阻断脱氧尿嘧啶核苷酸转变为脱氧胸腺嘧啶核苷酸,从而抑制DNA的生物合成,起抗肿瘤的作用。静脉灌注为氟尿嘧啶化疗常用的给药方式,由于该药物的细胞毒性,对局部组织皮肤具有较强的刺激性,易形成静脉炎。本文针对1例因静脉灌注氟尿嘧啶而致3级静脉炎的患者,探索氟尿嘧啶致静脉炎患者的药学监护模式。
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糖原染色与核苷酸标记法评价雄性生殖毒性
近年来,雄(男)性生殖毒性危害评价问题日益受到重视.由于精子细胞的顶体中有大量糖原,因此通过糖原染色(PAS)可以区分生精上皮不同时期[1],从而显示其更精确地评价睾丸生殖毒性病理学损伤的特点.随着对生殖毒性机制研究的不断深入,发现一些物理或化学因素可以通过诱发生精细胞凋亡而造成雄性生殖毒性[2~4].研究细胞凋亡常需要应用脱氧尿嘧啶核苷酸末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUDP-nick end hbeling,TUNEL)检测DNA片段断裂.为了探索睾丸生精上皮细胞具体在哪一个时段(周期)对外源化合物诱导的细胞凋亡更为敏感,本文应用糖原染色与TUNEL联合方法探讨建立雄性生殖毒性病理学评价技术.
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dUTP/UDG反应体系在荧光定量PCR中抗污染能力评价
目的探讨dUTP/UDG反应体系在荧光定量PCR中抗PCR产物污染的能力.方法用TaqMan荧光定量PCR检测方法进行定量检测.将一系列不同浓度的含dUTP的HBV-DNA PCR扩增产物作为污染源,分别加至含dUTP/UDG的PCR反应体系和普通荧光定量PCR反应体系中,在荧光定量PCR仪上进行定量检测,从而得出含dUTP/UDG的PCR反应体系的抗污染能力.结果 1.佳抗污染实验条件:UDG酶含量0.05 U,消化时间37℃5 min,灭活时间92℃1 min;dUTP100%代替dTTP,四种底物浓度相等.2.含0.05 U的UDG抗污染反应体系对每管浓度为103拷贝/ml的污染物可完全消化,并随UDG含量的增高及消化时间的延长,抗污染能力增强.结论 dUTP/UDG反应体系的应用能有效防止PCR产物污染,但抗污染能力是有一定限度的,尚需加强实验室标准化管理,才能真正达到抗污染效果.
关键词: 尿嘧啶DNA糖基化酶 脱氧尿嘧啶 荧光定量PCR -
肝脏铁质浓度测量的研究进展
铁是人体必需的微量元素之一,是血红蛋白、肌红蛋白等的组成成份,同时与人体内重要酶的合成和活动密切相关,在生命代谢过程中起着重要作用。食物摄入和衰老红细胞释放的铁经吸收、利用后,剩余的铁以铁蛋白及含铁血黄素的形式储存于肝、脾和骨髓等网织内皮系统。肝脏是体内储存铁的大器官,约占体内储存铁的1/3,正常人体肝脏铁质浓度较低,约为20μmol/g[1]。由于人体缺乏有效的铁排泄机制,遗传性血色病、反复输血及溶血、慢性肝疾病均会造成铁吸收及释放过多,导致铁在肝脏、心脏及内分泌器官异常沉积。沉积在肝脏的铁质诱导肝细胞发生Feton反应,产生氧自由基、羟基自由基及活性氧,羟基自由基与肝细胞内核酸8-羟基脱氧尿嘧啶反应,破坏正常的肝细胞[2]。有研究显示血清乙肝表面抗原(hepatitis B virus surface antigen, HBsAg)阳性者肝组织内铁含量显著高于阴性者,提示乙型肝炎病毒(hepati-tis b virus, HBV)与铁之间有着密切关系[3-4]。30%~40%慢性丙型肝炎患者血清铁、血清铁蛋白及转铁蛋白饱和度增加[5]。超负荷的铁元素能加快HBV复制,诱导脂质发生过氧化反应,其产物能够刺激肝细胞胶原的合成,还能干扰电子传递氨酸羟化酶的重要辅助因子,终造成肝脏纤维化及肝硬化[6-8]。病毒性肝炎时,即使轻微的铁过载,也会导致肝脏的显著损害[8]。实验和人体研究支持铁过载是癌症尤其是肝细胞癌的危险因素,甚至和患者临床症状的恶化及肿瘤组织病理的改变亦有关系,对肝硬化阶段的铁过载进行早期干预可能降低肝癌发生的风险值[9]。
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氟尿嘧啶的临床新用途
氟尿嘧啶(5-Fu)为嘧啶类抗代谢药,对多种动物肿瘤都有抑制作用,而且与常用抗肿瘤药无交叉耐药现象,是一种广泛应用于临床的抗肿瘤药.该药在体内先转变为5-氟-2-脱氧尿嘧啶核苷酸,后者抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶,阻断脱氧尿嘧啶核苷酸转变为脱氧胸腺嘧啶核苷酸,从而抑制DNA的生物合成,此外,还能掺入RNA,通过阻止尿嘧啶和乳清酸掺入RNA而达到抑制RNA合成的作用.
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骨髓基质细胞移植联合应用脑源性神经营养因子促进大鼠脊髓损伤修复
1 材料与方法取Wistar大鼠(鼠龄2~4个月)股骨和胫骨骨髓组织, 采用Percoll分离液(比重1.077)分离法获取骨髓基质细胞(BMSCs)进行培养纯化.细胞传3代,移植前72 h按20 μmol/L终浓度加入5溴-2脱氧尿嘧啶(BrdU)标记细胞核.采用大鼠T12,13脊髓半横断损伤模型.选择Wistar大鼠48只,体重250~300 g,雌雄不拘.随机分成Ⅰ组:脊髓半横断后明胶内给予DMEM 10 μl;Ⅱ组:明胶内给予脑源性神经营养因子(BDNF)10 μl(33 μg/ml);Ⅲ组:明胶内给予BMSCs悬液8 μl,损伤上下各1 mm处用无损伤玻璃针头 (尖端50 μm)移植 BMSCs悬液共2 μl(多点注射 ,每点0.5 μl);Ⅳ组:明胶内给予BMSCs+BDNF.每组12只大鼠.