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黑曲霉菌pyrG基因的克隆与黑曲霉菌同源转化系统的建立
黑曲霉菌(Aspergillus niger)是一种不产生黄曲霉毒素的丝状真菌,它有生长迅速、易于培养、可大量产生分泌性蛋白质的特点,因此它除了在生产各种真菌代谢物及酶类的发酵工业上被广泛应用外,在基因工程中作为宿主菌生产蛋白质产物方面也受到很大重视和应用。为了将待表达的基因导入宿主菌,首先需要建立一个稳定有效的基因转化系统。以乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶(pyrG)基因作为标志基因并以该基因的缺陷株真菌作为受体菌的转化系统已被证明是一种十分行之有效的基因转化系统。乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶是尿嘧啶核苷酸合成中一种关键性酶,缺乏该酶的pyrG缺陷株不能在不含尿嘧啶核苷的培养基上生长。通过基因转化,向其导入含pyrG基因的质粒,可使其获得在不含尿嘧啶核苷培养基上生长的能力。如果将要导入的基因连接在该质粒上,此时pyrG可作为基因是否导入的标志。我们首次从黑曲霉菌ATCC 12049野生型菌株的基因文库中克隆获得全长pyrG基因,并在此基础上构建了表达性质粒载体,建立了pyrG基因为标志基因,以同型黑曲霉菌pyrG基因缺陷株为受体菌的同源基因转化系统。
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氟尿嘧啶通道基因对进展期结直肠癌术后化疗预后影响分析
氟尿嘧啶(5-Fu)作为联合甲酰四氢叶酸和奥沙利铂的抗癌药物,显示了无可争议的优势.我们选择测定5-Fu通道基因中的胸苷酸合成酶(TS)、二氢嘧啶脱氢酶(DPD)和乳清酸磷酸核糖转移酶(OPRT).TS-mRNA是5-Fu代谢靶酶,DPD-mRNA是5-Fu降解起始和限速酶[1],OPRT-mRNA是5-Fu磷酸化的关键酶.本研究计划采集新鲜结直肠癌冰冻样本评价5-Fu通道基因表达,以预测结直肠癌患者接受FolFox4化疗的疗效.
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新生儿起病的鸟氨酸转氨甲酰基酶缺乏症一家系的临床与生化及基因分析
目的 通过对1例新生儿期急性起病的鸟氨酸转氨甲酰基酶缺乏症(OTCD)患儿家系从临床、生化和鸟氨酸转氨甲酰基酶基因(OTC)进行分析,初步探讨OTC在产前诊断中的意义.方法 分析患儿的临床、生化等特点,利用质谱技术检测患儿、患儿父母及第2胎新生儿血、尿氨基酸和有机酸代谢产物,同时应用聚合酶链反应与DNA测序的方法对患儿、患儿父母血样、第2胎胎儿羊水细胞及出生后血样进行OTC基因突变检测.结果 患儿出生后3 d起病.表现为反应差,喂养困难,新生儿感染,生化检测发现高血氨,轻度代谢性酸中毒,符合尿素循环代谢障碍的临床诊断标准.患儿于出生后第9天死亡.2次血质谱检测均显示瓜氨酸浓度明显下降,分别为0.86 μm和1.06μm,尿质谱有机酸检测发现乳清酸升高(124μm/M肌酐),并伴乳酸明显升高.父母及第2胎新生儿血尿瓜氨酸和乳清酸等均正常.基因分析显示患儿9号外显子存在无义突变(C.958 C>T),使编码精氨酸的密码变成终止密码.其母亲为杂合携带者;在患儿和母亲的9号和5号内含子分别存在插入和杂合突变,分别为C.1005+132 InsT和C.542+134 G>G/A;而父亲血样和第2胎胎儿羊水细胞及出生后血样DNA分析均正常.结论 OTC基因C.958 C>T的突变可引起新生儿期急性起病.该突变如发生于男性患儿,出生后不久即可出现症状,起病迅速,如未及时抢救,极易导致死亡,而C.1005+132 InsT和C.542+134 G>G/A是否与新生儿起病的OTCD有关,还需进一步的分析研究.OTC基因分析可应用于产前诊断.
关键词: 鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺发症 瓜氨酸 乳清酸 鸟氨酸氨甲酰基转移酶 -
对保肝药和HBsAg转阴药的评价
目前所谓"保肝药"或"护肝药"名目繁多,现已达数百种.随着市场经济的发展,有人声称制造出其疗效远超国际水平的新药,但临床不能重现.这类药物的作用基本上都没有经过严格的临床药理学验证,经权威客观评价,充分肯定其疗效者,迄今尚无一种特效药物能够达到满意的治疗效果.1.对保肝药现状及评价常用的抗脂肪肝药和胆碱、蛋氨酸、复方胆碱和肌醇等,仅在动物实验中有一定作用,而对人类的酒精性脂肪肝或其他脂肪肝,没有去脂作用,现属淘汰品种.过去常用的一些所谓改善肝脏代谢或解毒功能的药物,如三磷酸腺苷(A1TP),辅酶A,细胞色素C,肌苷,复方磷酸酯酶,肝泰乐,肝乐,维丙胺,硫辛酸,乳清酸等,均未经随机对照研究证明有效,在治疗急、慢性肝病时基本上没有价值.
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高血脂症患者青睐的食品
牛奶牛奶所含的丰富的乳清酸和钙质,既能抑制胆固醇沉积于动脉血管壁,又能抑制人体内胆固醇合成酶的活性,从而减少胆固醇产生.因此,坚持每天喝牛奶可以降低血脂.
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乳清酸诱导大鼠脂肪肝的机制研究
目的 研究乳清酸诱发大鼠脂肪肝的机制.方法 将大鼠分成两组,对照组喂食AIN93标准饲料,模型组饲料中添加1%乳清酸.饲喂10d后,分别测定大鼠血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-c)含量,以及肝脏TC、TG、磷脂含量.同时测定了肝脏中脂肪酸合成酶(FAS)、肉碱棕榈酰转移酶(CPT)、微粒体甘油三酯转运蛋白(MTP)的活性和其mRNA表达量,以及固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARα)的mRNA表达量.结果 乳清酸可显著提高大鼠血清TG浓度和肝脏TC、TG含量.添加乳清酸后,大鼠肝脏中FAS活性及mRNA水平明显上调,而CPT、MPT活性及mRNA水平明显下调,同时作为转录调节因子的SREBP-1c mRNA表达量增加3.13倍,PPARα mRNA表达量无明显变化.结论 1%乳清酸诱发大鼠脂肪肝与SREBP-1C的表达量升高引发的脂肪合成亢进有关,并与脂肪酸氧化分解受抑制及MTP活性和基因表达量降低有关.
关键词: 乳清酸 脂肪肝 脂肪酸合成酶 微粒体甘油三酯转运蛋白 过氧化物酶体增殖物激活受体 -
2015年9月FDA批准新药概况
2015年9月,FDA批出5个新分子实体药品,为止吐药Varubi(罗拉吡坦)、治疗遗传性乳清酸尿症药物Xuriden(尿苷三乙酸酯)、治疗精神分裂和双相抑郁症药物Vraylar(卡利拉嗪)、治疗癌症药物Lonsurf(曲氟尿苷+tipiracil)和治疗糖尿病药物Tresiba(德谷胰岛素)。
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海星皂苷对非酒精性脂肪肝大鼠肌肉胰岛素信号通路的影响
目的 研究海星皂苷对乳清酸诱导的非酒精性脂肪肝大鼠肌肉胰岛素信号通路的影响.方法 ♂ Wistar大鼠连续6周喂食1%乳清酸建立NAFLD(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型.将NAFLD模型大鼠随机分为模型组(model group,Model)和海星皂苷组(starfish saponins group,Sfs),分别喂食1%乳清酸饲料和添加含0.04%海星皂苷的1%乳清酸饲料.海星皂苷干预8周后,分别测定大鼠肝脏脂质水平、肝功指标以及肌肉胰岛素信号通路相关蛋白表达量.结果 海星皂苷明显降低肝脏脂质水平、改善肝功,并通过增强IRS-1/PI3K/Akt胰岛素信号通路和上调GLUT4的表达来改善肌肉组织的胰岛素抵抗,提高肌肉对葡萄糖的摄取.结论 海星皂苷能促进肌肉组织胰岛素信号通路的传递,从而改善乳清酸诱导NAFLD大鼠肌肉中胰岛素信号传递受阻现象.
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减肥降脂食品种种
牛奶牛奶含有丰富的乳清酸和钙质,既能抑制胆固醇沉积于动脉血管壁,又能抑制人体内胆固醇的活性,减少胆固醇产生.当然,选择脱脂牛奶或低脂牛奶对高脂血患者及肥胖者更合适.
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高含量DHA/EPA甘油三酯对脂质代谢相关酶活力的影响
目的 研究高含量DHA/EPA甘油三酯对脂肪肝模型大鼠肝脏脂质代谢相关酶活力的影响.方法 采用1%乳清酸饲喂法建立脂肪肝大鼠模型.灌胃高含量DHA/EPA甘油三酯20 d后,检测大鼠血清和肝脏总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量以及肝脏脂肪合成和分解相关酶活力.结果 高含量DHA/EPA甘油三酯可预防大鼠血清和肝脏脂质含量升高(P<0.05,P<0.01),有效降低脂肪酸合成酶(fatty acid synthesase,FAS)、苹果酸酶(malic enzyme,ME)等脂肪合成酶活力(P<0.01),显著提高肉碱棕榈酰转移酶(carnitine palmitoyl transterase-1,CPT-1)和过氧化物酶体β-氧化酶系(peroxisomal β-oxidation enzymes,POE)等脂肪分解酶活力(P<0.01),其效果明显优于乙酯型和低含量DHA/EPA甘油三酯型鱼油.结论 高含量DHA/EPA甘油三酯通过抑制脂肪合成,促进脂肪氧化分解,有效调节脂肪肝大鼠的脂质代谢.
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氟尿嘧啶的临床新用途
氟尿嘧啶(5-Fu)为嘧啶类抗代谢药,对多种动物肿瘤都有抑制作用,而且与常用抗肿瘤药无交叉耐药现象,是一种广泛应用于临床的抗肿瘤药.该药在体内先转变为5-氟-2-脱氧尿嘧啶核苷酸,后者抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶,阻断脱氧尿嘧啶核苷酸转变为脱氧胸腺嘧啶核苷酸,从而抑制DNA的生物合成,此外,还能掺入RNA,通过阻止尿嘧啶和乳清酸掺入RNA而达到抑制RNA合成的作用.