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等温扩增荧光法(IAFT)快速检测食品中沙门菌方法的建立
沙门菌属一类革兰氏阴性杆菌,是引起人类食物中毒的常见细菌之一。传统的沙门菌检测方法主要是经过增菌培养,分离琼脂平板培养等步骤后,通过形态学和染色法和各种生化指标,如硫化氢气体、赖氨酸脱羧酶、氧化酶、靛基质尿素和KCN等加以鉴定。
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黑曲霉菌pyrG基因的克隆与黑曲霉菌同源转化系统的建立
黑曲霉菌(Aspergillus niger)是一种不产生黄曲霉毒素的丝状真菌,它有生长迅速、易于培养、可大量产生分泌性蛋白质的特点,因此它除了在生产各种真菌代谢物及酶类的发酵工业上被广泛应用外,在基因工程中作为宿主菌生产蛋白质产物方面也受到很大重视和应用。为了将待表达的基因导入宿主菌,首先需要建立一个稳定有效的基因转化系统。以乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶(pyrG)基因作为标志基因并以该基因的缺陷株真菌作为受体菌的转化系统已被证明是一种十分行之有效的基因转化系统。乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶是尿嘧啶核苷酸合成中一种关键性酶,缺乏该酶的pyrG缺陷株不能在不含尿嘧啶核苷的培养基上生长。通过基因转化,向其导入含pyrG基因的质粒,可使其获得在不含尿嘧啶核苷培养基上生长的能力。如果将要导入的基因连接在该质粒上,此时pyrG可作为基因是否导入的标志。我们首次从黑曲霉菌ATCC 12049野生型菌株的基因文库中克隆获得全长pyrG基因,并在此基础上构建了表达性质粒载体,建立了pyrG基因为标志基因,以同型黑曲霉菌pyrG基因缺陷株为受体菌的同源基因转化系统。
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氨基酸脱羧酶培养基的改进及应用
氨基酸脱羧酶试验是非发酵菌鉴定中的重要项目.目前国内实验室自制氨基酸脱羧酶培养基配方有数种,检验结果时有差异.我们在临床工作中注意到市售成品氨基酸脱羧酶培养基有时非发酵非产碱菌出现氨基酸对照管及测定管均产碱呈假阳性反应.为比较客观地反映非发酵菌的生化特性,对非发酵菌氨基酸脱羧酶培养基的配方进行了调整,经初步临床应用,结果满意.现报告如下.
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急诊抢救异烟肼急性中毒11例的体会
我站1998年以来抢救急性异烟肼中毒11例.所有病例均1次口服异烟肼,小量10.0g,大量15.0g,服量均超过了倪庭枢推测成人半致死量(LD50).其突出的中毒症状是在清醒状态下突然抽搐成癫痫样发作,伴有脑水肿征象.原因:异烟肼在大剂量时易进入血脑屏障,竞争性地取代或转移VB6,后者是氨基酸脱羧酶的辅酶磷酸吡哆醛的前身物质.其缺乏时,脑组织中谷氨酸脱羧生成中枢抑制性神经介质,γ-氨基丁酸的过程受阻,浓度下降,导致中枢神经系统的兴奋性增高,出现阵发性强直抽搐等症状.
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"单管三用培养基"制备与使用
从临床感染和食物中毒标本培养检出肠道致病菌,需要进行赖氨酸脱羧酶、靛基质和运动性试验,因市售的赖氨酸培养基质量不稳定,为此,我们自制出"LIM培养基"(Lysine Indole Motility Medium).本文,将此培养基改称"单管三用培养基",就制备与使用有关问题做进一步探讨.
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鹅不食草对实验性变应性鼻炎血清组胺影响的观察
组胺在变应性鼻炎(Allegic Rhinitis,AR)发病的多个环节起重要作用,又称β-咪唑乙胺,由肥大细胞、嗜碱性粒细胞受刺激后脱颗粒释放组氨酸,组氨酸再经组氨酸脱羧酶脱羧后产生,作用于其受体引起效应.
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非发酵菌"氨基酸脱羧试验"的特点
氨基酸脱羧酶试验是细菌鉴定过程中的一个非常重要的试验,其原理是某些细菌具有特异性脱羧酶,能作用于氨基酸的羧基部位生成碱性的胺类和CO2,使培养基中的溴甲酚紫指示剂变紫色.加石蜡油是为了造成一个厌氧环境,因为只有在厌氧环境下生成的胺才稳定[1],非发酵菌的氨基酸脱羧酶试验是否应加石蜡油,有关书籍说法不一,笔者就此问题进行了探讨,现报告如下.
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临床生物化学与生物化学检验练习题(3)
一、单选题(A1/A2型题)1.下列哪一类酶需要磷酸吡哆醛作为辅因子A.还原酶 B.脱氢酶 C.氧化酶 D.转氨酶 E.脱羧酶
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WS-赖氨酸沙门菌检验程序应用报告
卫生法规确定的有关人群的沙门菌健康带菌检验工作,时间集中,面广量大,鉴定烦琐.作者根据主要生化几率和经验,建立以WS琼脂-赖氨酸脱羧酶(简称LLA)程序,具有简明、质高、快速、价廉等优点.
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应用过筛法检测侵袭性大肠杆菌
侵袭性大肠杆菌(EIEC)是一种常见的致泻性病原菌.现行的分离方法繁琐,给日常性监测工作带来了一定的困难.寻找一种简单、有效的过筛EIEC方法非常必要.本文借鉴国内外研究EIEC之经验[1],提出用肠杆菌科分属诊断噬菌体、赖氨酸脱羧酶和动力三试验作为过筛EIEC方法,对排菌量少的健康人群进行检测,经应用取得了较满意的效果.从健康人群中检得EIEC62株,分属于9个O血清型,并有部分毒力丧失株.现将结果报告如下.
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酿酒原料对蒸馏酒中杂醇油含量影响的研究
杂醇油是异丁醇、异戊醇等一些高级醇的通称,具有强烈气味,在体内氧化分解速度慢,可引起剧烈头痛。在酿酒过程中杂醇油来源于原料中蛋白质水解为氨基酸,氨基酸再经酵母或糖化菌分泌的脱羧酶和脱氨基酶的作用而生成与氨基酸相应的杂醇油。为了解不同原料酿酒对杂醇油含量的影……
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家族性枫糖尿病1例临床诊治体会
枫糖尿病(maple syrup urine disease,MSUD)又称分支酮酸尿症,早于1954年报道,是由于线粒体酶-支链α-酮酸脱羧酶缺陷引起的遗传性代谢病(hereditary metabolic disease,IMD).
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青少年起病的成人型糖尿病一家系八例
先证者(Ⅲ6)男,16岁,汉族.因两个姐姐均死于糖尿病酮症酸中毒而前来体检.查体:身高170 cm,体重54kg,血压110/70 mmHg.面容无特殊,全身皮肤粘膜无异常,视力、听力均正常,心肺正常,肝脾不大.实验室检查:口服75克葡萄糖耐量试验:空腹血糖8.03mmol/L(正常3.9~5.6 mmol/L),0.5h 8.18 mmol/L,1 h 12.36mmol/L,2 h 15.22mmol/L,3 h 17.64mmol/L;胰岛素释放试验:空腹胰岛素5.32 mU/L(正常3~17mU/L),0.5 h 6.25mU/L,1 h 19.04mU/L,2 h 19.88 mU/L,3 h 14.05 mU/L;肝肾功能、血脂未见异常;胰岛自身抗体:ICA阴性,谷氨脱羧酶抗体阴性;尿常规:尿糖(+/-),酮体阴性,尿蛋白(+/-),尿微量白蛋白25.40mg/L(正常0~30mg/L);腹部B超示:双肾多个小的囊状无回声区,边界清楚,左侧较大者0.8 cm×0.7 cm,右侧较大者1.0 cm×0.8 cm,肝、胆、脾、胰腺未见异常.给予胰岛素等治疗后血糖控制良好.
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反相分配离子对色谱法快速测定鱼肉中的组胺
1前言组胺是组胺酸的分解产物,而组胺酸是蛋白质经分解后的一种氨基酸,组胺酸在莫根氏变形杆菌、组胺无色杆菌等细菌存在的组氨酸脱羧酶的作用下,脱去羧基后形成的一种胺类物质,反应如下: