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黑曲霉菌pyrG基因的克隆与黑曲霉菌同源转化系统的建立
黑曲霉菌(Aspergillus niger)是一种不产生黄曲霉毒素的丝状真菌,它有生长迅速、易于培养、可大量产生分泌性蛋白质的特点,因此它除了在生产各种真菌代谢物及酶类的发酵工业上被广泛应用外,在基因工程中作为宿主菌生产蛋白质产物方面也受到很大重视和应用。为了将待表达的基因导入宿主菌,首先需要建立一个稳定有效的基因转化系统。以乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶(pyrG)基因作为标志基因并以该基因的缺陷株真菌作为受体菌的转化系统已被证明是一种十分行之有效的基因转化系统。乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶是尿嘧啶核苷酸合成中一种关键性酶,缺乏该酶的pyrG缺陷株不能在不含尿嘧啶核苷的培养基上生长。通过基因转化,向其导入含pyrG基因的质粒,可使其获得在不含尿嘧啶核苷培养基上生长的能力。如果将要导入的基因连接在该质粒上,此时pyrG可作为基因是否导入的标志。我们首次从黑曲霉菌ATCC 12049野生型菌株的基因文库中克隆获得全长pyrG基因,并在此基础上构建了表达性质粒载体,建立了pyrG基因为标志基因,以同型黑曲霉菌pyrG基因缺陷株为受体菌的同源基因转化系统。
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miRNAs在乳腺癌侵袭与转移中作用的研究进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,并常于后期侵袭转移,它的转移涉及诸多因素,并有多种基因及其蛋白质产物参与该过程发生.近年相关研究发现,miRNA能够在转录水平调节基因的表达,进而影响乳腺癌细胞的侵袭和转移,因此对影响乳腺癌侵袭和转移的miRNA的研究成为乳腺癌的研究热点[1].
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自身免疫性甲状腺炎患者血清瘦素水平的检测及其与发病的关系
1994年Zhang等[1]首次发现瘦素是肥胖基因(ob基因)的蛋白质产物,以后发现瘦素与促进生殖功能、保护骨质疏松、防止高血压及某些激素代谢性疾病等有关[2-4].
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瘦素在男性急性心肌梗死患者中的变化
近年研究发现肥胖基因编码的蛋白质产物--瘦素(Leptin,LEP)参与了冠心病的发生与发展[1].但LEP在急性心肌梗死(AMI)发病过程中的影响,国内外研究较少.本研究选取男性患者来探讨LEP在AMI患者中的变化规律.
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降低男性的白介素6的水平可用来减少男性肝癌的发病率
男性肝癌的发病率比女性高,在加州大学圣地亚哥分校,医学院的研究人员在小鼠身上进行了研究.他们发现,与雄性小鼠相比,雌性小鼠会产生的一种称为白介素6的蛋白质少,此蛋白质产物由雌激素抑制,这种蛋白质可减少男性患肝癌可能性.
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脑缺血再灌注后细胞凋亡基因的研究进展
急性脑血管病以高发病率、高死亡率、高致残率给社会、家庭和患者带来沉重的经济和精神负担.其治疗原则是及时恢复缺血区的血液灌注.然而在某些情况下缺血后再灌注不仅没有使组织功能恢复,反而使缺血所致的功能障碍和结构破坏进一步加重,这种现象即缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury).许多研究表明,脑缺血再灌注损伤过程包括坏死和凋亡.脑缺血再灌注可诱导多种基因表达,包括促凋亡基因和抑制凋亡基因.这些基因编码的蛋白质产物可直接或间接参与凋亡的调控.
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分子信号传导靶点阻断剂治疗慢性粒细胞白血病应注意的问题
95%的慢性粒细胞白血病(CML)患者表达bcr/abl融合基因,STI 571(格列卫、伊马替尼)能够有效阻断bcr/abl融合基因蛋白质的磷酸化过程,使之酪氨酸激酶样作用失活而促进白血病细胞凋亡从而实现治疗目的.2001年5月美国FDA批准STI571用于干扰素-α(IFN-α)耐药,慢性粒细胞白血病加速期(CML-AP)和急变期(CML-BP)患者的挽救性治疗,至2003年底全世界已治疗6万多例.2004年被美国NCCN修改的CML治疗指南列为CML各期的一线治疗用药,获准用于临床.发展如此之快是任何药物前所未有的,也是目前继全反式维甲酸之后第二个公认的基因融合蛋白质产物的靶向药物.以下结合我们的研究及文献复习浅谈对白血病分子靶向治疗的认识.
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肝豆状核变性基因蛋白产物表达的改变
肝豆状核变性(Wilson′ disease, WD)是一种常染色体隐性遗传病。其致病基因定位于13q14.3, 编码的蛋白质产物是一种铜转运P型ATP酶(WD蛋白)[1-3]。该病以原发性铜代谢障碍为特征,目前的研究多认为WD基因突变使该酶功能降低或丧失而致病[4-6]。在WD患者,WD基因突变,导致WD蛋白的表达变化,其表现可能为量的减少、功能异常等,目前该课题的研究在国内外尚未见报道。为此,我们应用特定的抗P型ATP酶抗体(抗ABD),结合Western blot印迹技术检测了WD蛋白的变化,同时筛查患者WD基因exon 8的突变,以探讨WD的发病机制。
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携带突变k-ras基因的重组腺病毒转染树突状细胞体外诱导的抗肿瘤免疫
近年来,肿瘤疫苗的研究已成为肿瘤免疫治疗的热点之一.肿瘤抗原的发现及确认为肿瘤的免疫治疗尤其是主动性免疫治疗提供了新的手段.有研究证实突变的ras蛋白质产物可被特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)所识别[1,2].由于ras基因突变发生在多种类型肿瘤的实质部分,相对应的抗原决定簇也被发现存在于多种肿瘤组织中,有较为一致的突变热点(密码子12,13,61).许多研究已经证明肺腺癌中k-ras基因12位密码子点突变是频发、常见的,且与患者的预后有关.因此以ras为靶目标,建立肿瘤生物治疗的方法有重要的临床价值.树突状细胞(dendritic cells,DC)在免疫系统中有特殊的作用,DC疫苗在恶性肿瘤的生物治疗中也具有独特的地位.为此,我们在成功构建携带编码12位密码子突变的k-ras基因的重组腺病毒载体的基础上[3],探讨其修饰的DC能否诱导机体产生特异性CTL,为以DC为基础的肿瘤主动性免疫性治疗提供实验依据.
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大鼠局灶性脑缺血-再灌注后caspase-8和caspase-9 mRNA及蛋白质表达
1994年MacManus等[1]首先报告大鼠全脑缺血后存在神经元凋亡.近10年来,关于脑缺血后细胞凋亡机制的研究取得了巨大进展.已知脑缺血后可有多种基因被诱导表达,这些基因编码的蛋白质产物直接或间接参与了凋亡的调控.天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶家族(cysteinyl aspartate specific protease,caspase),是细胞凋亡过程中重要的蛋白酶,细胞凋亡的后实施是通过caspase的激活而实现的[2].
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瘦素、肥胖与胰岛素
瘦素(Leptin)是肥胖( ob)基因的蛋白质产物,是一种相对分子量为16000的脂肪组织源激素[1].1956年Kennedy[2]提出一个设想,脂肪组织能产生一种物质,通过作用于下丘脑的代谢控制中枢影响机体的能量摄入和消耗以调节体重和体脂量.此设想被后来的实验证实[3],被命名为瘦素.1994年美国洛克菲大学的Friedman领导的实验室成员Zhang等[4]通过实验首先阐明瘦素基因的概念既肥胖(ob)基因的产物,是脂肪细胞分泌的一种由167个氨基酸组成的蛋白质.这使得肥胖基因和瘦素的研究更加深入.目前的研究表明瘦素具有广泛的生物学效应,它作用于中枢神经系统调节能量代谢,引起食欲降低,消耗增加从而减轻体重.它还作为脂肪-胰岛素内分泌轴的一部分参与胰岛素分泌的调节[5].胰岛B细胞内有瘦素受体存在.提示瘦素可抑制胰岛素分泌.另有学者研究论述了瘦素主要由皮下脂肪分泌,瘦素本身就可以造成脂肪组织的胰岛素抵抗既脂肪合成减少,分泌增加,产生大量的游离脂肪酸而引发肝脏和肌肉的胰岛素的抵抗[6,7].
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Wilson病基因突变与cSNP的研究进展
肝豆状核变性又称Wilson病(Wilson' disease,WD)是一种伴随原发性铜代谢障碍的常染色体隐性遗传病,WD基因被精确地定位于13q14.3,编码的蛋白质产物是一种铜转运P型ATP酶(WD蛋白),它含有21个外显子,编码1411个氨基酸[1].
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瘦素与代谢综合征及临床联系
瘦素(leptin)是肥胖基因编码的一种蛋白质产物,主要由白色脂肪组织分泌,通过与其受体结合发挥抑制食欲、减少能量摄入、增加能量消耗的生物学作用.代谢综合征是一组由多种代谢相关疾病如糖耐量减低、糖尿病、冠心病、高血压、脂代谢紊乱等中的两种或两种以上的组合,胰岛素抵抗(胰岛素抵抗Insulin resistance,IR是指胰岛素的靶器官对胰岛素刺激的葡萄糖摄取、利用或处置的抵抗或减弱)其病因及发病机制中起关键作用.
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瘦素与肥胖和糖尿病及其测定
瘦素是由肥胖(ob)基因编码的蛋白质产物;外周循环的瘦素含146aa,分子量为16Kda,具有强亲水性,并以单体形式存在与血浆中.
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瘦素、胰岛素与糖尿病
瘦素(Leptin)是肥胖基因编码的蛋白质产物,是脂肪细胞分泌的一种激素,其分子量为16KD.自从1994年被Zhang等利用定位克隆技术发现以来,人们对瘦素的认识越来越深入.瘦素被认为是肥胖病激素源性研究中的一个重大进展.瘦素主要作用于下丘脑食欲及温度控制中枢,调节能量代谢一抑制摄食、增加能耗.肥胖被认为与下丘脑瘦素受体缺陷及瘦素敏感性降低致过度进食有关.大量研究证实胰岛素是调节瘦素水平的重要因素,研究胰岛素、瘦素之间的关系有助于糖尿病及其慢性并发症发病机制的阐释.
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瘦素与动脉粥样硬化
1 瘦素概述瘦素是由肥胖基因(obese gene,ob gene)编码的蛋白质产物,人类ob基因位于7号染色体长臂(7q31.3),全长20kb,包括3个外显子和2个内含子.小鼠ob基因位于6号染色体,与人有84%的同源性,两者的氨基酸序列则有87%的同源性.瘦素受体(LR或ob-R)位于人类1号染色体p31,属于I类细胞因子受体家族,由胞外、跨膜、胞内3个结构域构成,按胞内长度及氨基酸序列不同可分为长型受体和短型受体两种.人类瘦素主要由脂肪细胞分泌,约16 ku,是一种多靶器官、功能广泛的蛋白激素,它与广泛分布瘦素受体相结合发挥其多样的生物效应,如:调节能量代谢、调节生长发育、调节血脂代谢、维持造血功能、调节胰岛细胞功能、产热等.
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蒙古族、汉族肥胖者的诊断及瘦素差异与相关因素分析
肥胖是一种常见疾病,与瘦素关系密切。瘦素(Leptin),脂肪细胞合成的一种激素,是肥胖基因编码的蛋白质产物,具有广泛的生物学活性,且受体分布广泛,是一种作用于多靶器官、多功能的激素。它可控制能量消耗与食欲,与胰岛素密切相关,多数肥胖个体存在瘦素抵抗且大都存在明显高胰岛素血症。本研究通过对蒙古族、汉族肥胖及非肥胖人群血清瘦素水平、胰岛素水平、血糖的测定,研究蒙古族和汉族肥胖者瘦素水平的差异及与肥胖、胰岛素、血糖之间的关系。
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瘦素与胰岛素抵抗及糖代谢异常的关系
当供给人体的热量多于消耗量而以脂肪形式贮存在体内,使人体重量超过标准体重的20%时称为肥胖.肥胖患者常出现胰岛素抵抗(IR),血浆胰岛素增高,外周组织对胰岛素的敏感性下降.研究表明,肥胖是糖代谢异常的重要诱发因素,与2型糖尿病的发生相关.近年来发现,肥胖基因的蛋白质产物瘦素(leptin)能调节体重与能量代谢,但与IR及糖代谢异常的关系仍不十分清楚,本研究测定84例受检者血清瘦素含量及其它有关指标,探讨瘦素与IR及糖代谢异常的关系.
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Wilson病基因突变、cSNP的研究进展
肝豆状核变性又称Wilson病(Wil-son'disease,WD),是一种伴随原发性铜代谢障碍的常染色体隐性遗传病.WD基因被精确地定位于13q14.3,编码的蛋白质产物是一种铜转运P型ATP酶(WD蛋白),它含有21个外显子,编码1411个氨基酸[1].
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瘦素与临床相关疾病
瘦素(Leptin)是由肥胖(OB)基因编码的一种蛋白质产物,主要由白色脂肪细胞分泌,初被认为可能与食物消耗和能量平衡有关.现有的资料表明,体内瘦素异常与疾病有着广泛的联系,在一些疾病的发生发展过程中发挥了作用,现就瘦素与一些临床相关疾病的关系综述如下.