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乙型流感病毒诱导HeLa细胞凋亡并伴随P16蛋白高效表达
近年的研究发现,甲、乙、丙型流感病毒感染宿主细胞时均可不同程度地诱导细胞凋亡,细胞凋亡是流感病毒杀死宿主细胞的主要方式.目前,甲型流感病毒诱导宿主细胞凋亡基因的调控及蛋白表达的研究结果已有报道,而乙、丙型流感病毒诱导细胞凋亡调节机制的结果尚未见报道.本文以乙型流感病毒(B/沪防93-1株)感染HeLa细胞,通过Hoechst 33258荧光染色、琼脂糖凝胶电泳分析检测细胞凋亡,并用免疫组化技术测定P16基因蛋白表达,以MPIAS-500计算机多媒体图象分析系统作蛋白表达图象分析,用阳性染色A值(吸光度,原为光密度OD值)表示P16蛋白表达量,从而探讨乙型流感病毒诱导细胞凋亡及P16蛋白在细胞凋亡过程中可能的调节作用.
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性激素和细胞凋亡基因与妊娠期淋巴细胞亚型间平衡的关系
胚胎作为一个半同种异体移植物,在母体内不被排斥而能正常生长发育,这涉及十分复杂的免疫学机理.近年来的研究认为,妊娠期母体通过复杂的相互作用的细胞因子网络,对妊娠的各个生理过程进行免疫调节.大量的临床实践和研究表明,母体在妊娠时,辅助性T淋巴细胞(Th)中Ⅱ型细胞因子(Th2)参与的体液免疫增强,而由Ⅰ型细胞因子(Th1)参与的细胞免疫受抑制[1,2].这意味着分泌Th1、Th2的Th1、Th2型细胞的功能平衡发生改变.现就性激素、细胞凋亡基因、细胞因子种类等因素对Th1、Th2型细胞功能调节的影响综述如下.
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半胱氨酸蛋白酶1参与新生鼠缺氧缺血性脑损伤形成的研究
半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)是第一种被识别的线虫细胞凋亡基因ced-3的哺乳动物同源物,但目前关于其对缺氧缺血后未成熟神经细胞损伤调控的了解还很少.为此本研究对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后脑组织caspase-1的表达进行了检测,以明确caspase-1在HIBD发生发展中的作用.
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运动性心肌微损伤发生中凋亡基因表达谱研究
表达,抑制心肌细胞凋亡的发生与发展,可能对运动心肌有保护作用,防止严重性心肌损伤的发生.
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脑缺血再灌注后细胞凋亡基因的研究进展
急性脑血管病以高发病率、高死亡率、高致残率给社会、家庭和患者带来沉重的经济和精神负担.其治疗原则是及时恢复缺血区的血液灌注.然而在某些情况下缺血后再灌注不仅没有使组织功能恢复,反而使缺血所致的功能障碍和结构破坏进一步加重,这种现象即缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury).许多研究表明,脑缺血再灌注损伤过程包括坏死和凋亡.脑缺血再灌注可诱导多种基因表达,包括促凋亡基因和抑制凋亡基因.这些基因编码的蛋白质产物可直接或间接参与凋亡的调控.
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中药对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡基因调控作用的研究进展
细胞凋亡(apoptosis)是普遍存在于人体组织细胞内的细胞死亡的形式之一,是不同于坏死的正常生理性的程序性细胞死亡.它参与体内细胞数量的调节,并清除体内无功能的细胞、对机体有害的细胞、突变的细胞以及受到损伤后不能存活的细胞.
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细胞凋亡基因P53在子宫内膜异位症的表达
子宫内膜异位症(endometriosis,EM)是指具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔被覆黏膜以外的身体其他部位(不包括子宫肌层),在卵巢内分泌影响下,这些异位的子宫内膜组织呈周期性改变.引起所在部位的一系列病变[1].
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Bcl2与妇科肿瘤的关系
Bcl2(B-cell lymphoma/leukemia-2,B细胞淋巴瘤/白血病)基因于1984年研究人类B细胞滤泡性淋巴瘤时首次发现.正常的Bcl2基因位于染色体18q1.3上,约含230Kb,有3个外显子和2个内含子.编码产物为26×103KDa的蛋白,位于线粒体膜、滑面内质网和核膜上.Bcl2基因家族是细胞凋亡的重要控制基因,在维持细胞生理性分化、发育和细胞数量的动态平衡中具有重要作用,他们的表达状态在一定程度上影响着肿瘤的发生、发展及多药耐药性的产生.凋亡是细胞受基因调控的程序性死亡过程,Bcl2是调控细胞凋亡的相关基因,是一种较为肯定的抗细胞凋亡基因[1,2].本身不能使细胞增殖,也不促进细胞恶性转化,但过度表达能抑制多种凋亡因素诱导的细胞凋亡,延长细胞的存活时间.虽然仅仅Bcl2蛋白的过度表达不足以引发肿瘤,但由于Bcl2能使细胞免于凋亡获得永生,Bcl2就有可能与某些癌基因产生协同作用终导致肿瘤形成.Bcl2在多种肿瘤中的异常表达已得到证实.本文着重论述Bcl2与妇科肿瘤的关系.
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细胞因子及细胞凋亡与糖尿病性腺轴损伤关系探讨
众所周知,生殖功能障碍是糖尿病的一项重要临床表现.近年来,细胞因子及细胞凋亡在其发病机制中的重要作用已成为研究热点,本文将对与其密切相关的细胞因子、细胞凋亡基因的产生、定位、表达及其作用做一综述.
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烧伤后肉芽组织和病理性瘢痕组织中细胞凋亡相关基因的表达意义
目的研究烧伤后肉芽组织和病理性瘢痕组织中的细胞凋亡相关基因的表达意义.方法对烧伤后肉芽组织和病理性瘢痕组织进行bcl2与bax表达的免疫组化检测.结果结果表明bcl2在肉芽组织和瘢痕组织中成纤维细胞内呈强阳性表达,其阳性率均为90%;bax在肉芽组织中呈现部分阳性表达,其阳性率为50%,瘢痕组织中则以阴性表达为主.结论bcl2在烧伤后的病理过程中发挥着较为重要的主导作用,是肉芽组织和病理性瘢痕形成的主要刺激基因,在这个调控网络中,bax的作用受到抑制.
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前列腺癌中FasL的表达及意义
目的:检测细胞凋亡基因FasL在前列腺癌组织中的表达,并探讨其意义.方法:应用免疫组织化学方法检测9例正常前列腺组织和24例前列腺癌标本中FasL蛋白的表达.结果:前列腺癌组织中FasL的表达显著高于正常前列腺组织中的表达(P<0.01).结论:FasL表达异常可能在前列腺癌的发生发展过程中起重要作用.
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程序性细胞凋亡基因单核苷酸多态性与慢性乙型肝炎患者干扰素早期病毒学应答的相关性
目的 探讨程序性细胞凋亡基因-1(PD-1)单核苷酸多态性(SNP)与IFN-α治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者发生早期病毒学应答的关系.方法 采用前瞻性队列研究方法,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术,检测135例中国汉族抗病毒初治CHB患者的PD-1.1和PD-1.2的SNP,并分析其与IFN-α早期病毒学应答的关系.分类变量资料采用x2检验.结果 135例CHB患者IFN-α治疗获得早期病毒学应答有33例,占24.4%.PD-1.1的AA、AG、GG基因型各占35、77和23例,IFN-α的早期病毒学应答各有5、25和3例,分别占14.3%、32.5%和13.0%(x2=6.258,P=0.044),AG基因型相对AA、GG基因型有较高的病毒学应答率(x2=6.246,P=0.012).在PD-1.2的AA、AG、GG基因型之间比较IFN-α的早期病毒学应答,差异无统计学意义(x2=3.957,P=0.138).结论 PD-1.1的SNP与中国汉族CHB患者IFN-α治疗早期病毒学应答有关.
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BCL-2基因研究进展
B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)基因于1984年由Tsujimoto首先发现.1988年试验报告Bcl-2基因可使细胞存活时间延长.1990年进一步确证Bcl-2基因具有抗细胞凋亡的功能后,Bcl-2基因作为重要的凋亡抑制基因,在多种肿瘤中得到研究.近年来的研究表明,Bcl-2基因的异常表达,与肺癌的发生、发展及预后密切相关.1 Bcl-2基因的分子生物学1.1 Bcl-2基因家族已发现的Bcl-2基因家族成员包括:抑制细胞凋亡的Bcl-2、Bcl-X2、BHRF1和Ced9,促进细胞凋亡的Bax、Bcl-Xs、Bad和Bak,以及参与细胞存活的Mcl-1、Al和LMW5HL等.人的Bcl-2基因是从大多数滤泡型非霍奇金B细胞淋巴瘤中,首先在第14和18号染色体易位断裂点t(14,18)(q31~q21)分离获得的.正常Bcl-2基因位于18q21.3染色体上,约含230kb,该基因有3个外显子和2个启动子,在外显子2和3之间,有一个大约225kb的内含子.在B细胞滤泡型淋巴瘤中,Bcl-2基因常易位至14q32染色体,正常与易位的基因均表达分子质量为26kD的蛋白,含有229个氨基酸.染色体易位使14号染色体上的免疫球蛋白重链基因与位于3′端的Bcl-2基因并列形成头尾结构,这一异常融合基因导致Bcl-2蛋白的过度表达,它编码26kD的蛋白定位于线粒体膜、核膜和内质网,能在各种不同的正常组织和细胞(如T细胞、B细胞和造血细胞)的激活过程中表达.Bcl-2基因及其表达蛋白可抑制多种组织细胞的凋亡,并延长细胞寿命,所以称其为凋亡抑制基因.1993年,Boise等发现了另一类与Bcl-2有44%同源并参与调节细胞死亡的蛋白质Bcl-X.Bcl-X分两种,即Bcl-Xl和Bcl-Xs.研究证实,Bcl-Xl蛋白可抑制细胞凋亡,其功能与Bcl-2蛋白相似而作用强度较弱.Bcl-Xs的作用则与Bcl-2、Bcl-Xl相反,即通过抑制后两者的作用而促进细胞的程序性死亡.近年来认为,Bcl-Xs可能是作为Bcl-2的结构抑制子,通过对其下游的细胞凋亡调节因子作用而抑制Bcl-2基因的功能.Oltvai等于1993年用免疫共沉淀法测到Bax蛋白,与Bcl-2有21%的同源性.研究发现,Bax蛋白有对抗Bcl-2蛋白抑制细胞凋亡的作用.Bcl-2/Bax两蛋白之间的比例,是决定对细胞凋亡抑制作用强弱的关键因素,Bcl-2>Bax,细胞趋于存活;Ba>Bcl-2,细胞趋于凋亡.因此Bax被认为是极重要的促细胞凋亡基因之一.Bak是新近发现的基因,对Bcl-2有抑制作用,类似Bax/Bcl-Xs.Bak蛋白对Bcl-2的抑制作用,可能是通过其它蛋白质信号传递途径中介.在酵母细胞中,Bak蛋白与Bcl-Xl或E1B19K蛋白形成异源二聚体.大量实验证明,这种异源二聚体的形成可能具有细胞特异性.由于Bak可与E1B19K蛋白相互作用,而后者参与核骨架中核纤层作用,Bak可能通过E1B19K蛋白或其他蛋白与核物质作用调控细胞死亡.由于Bcl-Xl的分布不如Bak广泛,推测在细胞中可能存在与Bak相互作用的Bcl-2家族新成员.
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肝细胞凋亡的基因调控
自1972年病理学家Kerr首先提出细胞凋亡的概念以来,其重要的生理意义早为人们所熟知,近年来研究发现细胞凋亡与各种肝病有密切关系,细胞凋亡的基因调控一直是研究热点,现扼要综述肝细胞凋亡基因调控研究进展.
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缪刺对脑缺血大鼠细胞凋亡相关基因表达影响的研究
目的 研究缪刺对局灶性脑缺血大鼠神经保护作用的机制.方法 RT-PCR法检测其对脑缺血后24h大脑皮质细胞凋亡相关基因Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达的影响.结果 缪刺能有效调控缺血脑损伤后大脑皮质Bcl-2和Bax的基因表达水平并提高Bcl-2/Bax比值.结论 缪刺抑制细胞凋亡,提高细胞存活率,对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用.
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人参皂甙改善Hsp70、Bax及EAAS表达在脊髓缺血再灌注损伤中作用的实验研究
目的 观察人参皂甙对大鼠脊髓缺血再灌注损伤中热休克蛋白70 (Hsp 70)、细胞凋亡基因(Bax)的表达及兴奋性氨基酸的含量的影响,探讨其作用与机制.方法 SD大鼠随机分为空白组、损伤组、人参组、甲强龙组.术前30分钟,前两组腹腔注射0.9%氯化钠溶液,人参组给予人参注射液,甲强龙组给予注射甲基强地松龙.空白组打开腹腔但不夹闭腹主动脉,余3组制作脊髓缺血再灌注损伤模型.4组分别于术后0.5、1、4、8和12小时检测脊髓组织中的Hsp70、Bax及兴奋性氨基酸的含量,并系统地进行大鼠神经功能学变化观测.结果 空白组各观测时点Hsp70、Bax未见阳性表达.其余3组伤后0.5小时,Hsp70及Bax开始升高,4小时达到高峰值.人参组及甲强龙组Hsp70及Bax的含量在1、4、8、12小时较损伤组明显降低(P<0.05).伤后0.5小时开始出现Bax阳性表达,12小时内持续增多.人参组及甲强龙组在1、4、8、12小时时点差异无显著意义(P>0.05).3组兴奋性氨基酸于0.5小时后开始上升,并在4小时达到高峰值,人参组及甲强龙组在1、4、8、12小时较损伤组明显降低(P<0.05),人参组及甲强龙组在1、4、8、12小时时点差异无显著意义(P>0.05).大鼠神经功能学变化观测结果显示,各时间点甲强龙组和人参组均明显高于损伤组(P<0.05),而甲强龙组与人参组间无显著差异.结论 人参可以降低脊髓缺血再灌注损伤中脊髓的Hsp70及Bax的表达,降低兴奋性氨基酸的含量,减轻炎症反应.人参皂甙作用与甲强龙相当,且避免了甲强龙的副作用.
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新型器官保存液抗脐静脉内皮细胞凋亡作用的研究
由于供者器官在获取、保存和移植过程中难以避免的会遭遇冷缺血、热缺血及缺血再灌注损伤,这将影响供者血管内皮细胞的生存状态[1].缺血时间过长及器官保存液都会启动血管内皮细胞凋亡基因,引起血管内皮的损伤,从而导致移植物功能恢复延迟,甚至原发性移植物无功能[2],并且可缩短移植物的存活时间[3],引起慢性移植物功能丧失[4].2006年2-10月,我们分别采用新型器官保存液(TRS液)、UW液及HTK液对人脐静脉血管内皮细胞进行培养,观察不同器官保存液对人血管内皮细胞凋亡的影响.
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神经保护剂治疗缺血性脑血管病研究进展
脑血管病与心血管病、恶性肿瘤并列为威胁人类健康的"三大杀手",且在此三类疾病中其致残率高居第一位.脑血管病又以缺血性脑血管病(ICD)为多见,迄今未找到特效疗法.脑梗塞的病理生理研究表明,缺血超早期,神经元膜离子转运停止,神经元去极化,钙离子内流导致兴奋性氨基酸-谷氨酸大量释放,后者又加剧钙离子内流和神经元去极化,进一步加重细胞损害.同时,钙离子内流激活酶,致细胞自身稳定功能失调,细胞骨架、线粒体和细胞膜的破坏;自由基的形成和NO合酶加剧神经元损害.细胞因子、细胞粘附分子刺激引起局部炎症,并加剧微循环障碍.后由于激活细胞凋亡基因导致细胞凋亡,使缺血性半暗区终与坏死区融合.动物实验已发现针对上述诸多环节的神经保护剂具有较好的脑保护作用,目前已在临床应用及有临床应用价值的药物主要有:
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消化性溃疡修复的分子生物学进展
消化性溃疡的治愈过程和一般的损伤治愈过程不同,胃酸和胃蛋白酶的分泌具有特异的影响,而且消化性溃疡还具有易复发的特性.可是,二者有许多共同点,特别是在以增殖因子为中心的分子生物学研究方面有许多共同之处.以下就影响消化性溃疡修复的增殖和凋亡因子作一简要综述.
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缺血后处理对供体犬肺组织细胞凋亡基因表达的影响
[目的]观察供体犬肺再灌注后早期供体肺组织脂质过氧化反应的变化,了解缺血后处理对供体犬肺植入后细胞凋亡基因表达的变化情况.[方法]随机选取12对比咯犬,组成供受体,进行异体左侧单肺移植术.随机分成两组,对照组:6对犬,进行供受体左侧异体单肺移植,不予缺血后处理的干预,按常规方式进行.缺血后处理组:6对犬,进行供受体左侧异体单肺移植,常规方式获取的供体犬肺植入后,再灌注早期实施3个周期的10 s再灌~10s再阻断,总时程1 min的缺血后处理.于供体犬肺再灌注后1、2h时间点采集供肺标本检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)的含量;采用RT-PCR技术检测供体肺脏再灌注后1、2h时间点细胞凋亡基因Bcl-2、Bax的表达;光镜下观察供体犬肺植入后1、2h时间点肺组织的病理变化,应用SPSS 13.0统计软件处理,以P<0.05为统计学上有显著差别.[结果]供体肺脏植入时间平均(35.9±1.7)min.缺血后处理组在1、2h时间点的供体肺组织SOD活性水平较对照组升高、MDA含量较对照组减低,有统计学差异(P<0.05);对照组与实验组相比较,肺组织再灌注后1、2h时间点,Bc12蛋白表达上调(P<0.05),而Bax蛋白表达下调(P<0.05);缺血后处理组肺组织光镜下观察在各时间点的炎症反应均较对照组的变化轻微.[结论]缺血后处理可以抑制再灌注时氧化自由基的堆积,从而减少供体肺的缺血再灌注损伤;缺血后处理能够通过抑制促凋亡Bax蛋白的表达,及促进抗凋亡Bc12蛋白表达,从而影响内源性细胞凋亡途径.