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1-03 塞替派诱发人支气管上皮细胞恶性转化的基因突变
目的了解药物致癌过程中的基因突变情况.方法利用以塞替派为致癌原诱导永生化人支管上皮细胞(BEAS-2B)发生恶性转化建立的癌前转化细胞(BEAS-TE)以及从软琼脂上筛选到了克隆化多倍体细胞,沿转化细胞代龄进行了转化进程中p53、p16和Ki-ras基因突变情况的动态观察.结果 p53、Ki-ras基因存在多位点、p16基因单位点的的碱基突变.结论 p53和Ki-ras基因的多位点突变是塞替派诱导细胞转化过程中发生的重要分子事件,p16基因非编码区单个碱基的缺失是细胞转化过程中的次要分子事件.
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1-04 反式BPDE诱导人支气管上皮细胞恶性转化
目的探索苯并(a)芘代谢物反式BPDE诱导人支气管上皮细胞16HBE转化的理想实验方案,构建恶性转化的细胞模型,为后期进一步研究其致癌分子机制提供理想的材料.方法细胞存活率试验及克隆形成率试验确定诱导的剂量,以不同剂量反式BPDE 1次或多次处理细胞,观察培养的不同阶段转化灶出现情况,用软琼脂培养鉴定其锚着依存性生长的恶性特征,比较各组转化细胞的集落形成率.结果以0.1、0.5、1.0、2.0 μmol/L的剂量,对细胞多次间断染毒,传代15次,是反式BPDE诱导16HBE细胞恶性转化的理想方案.其集落形成率分别为2.0‰o、5.5‰、7.0‰、10.5‰,剂量-反应关系呈现良好的直线相关,r=0.974 1.结论反式BPDE能诱导人支气管上皮细胞16HBE转化,构建理想的恶性转化的细胞模型.
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白花前胡对心肺功能的药理作用/苯并(a)芘诱导BEAS-2B细胞恶性转化的不同阶段特征
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环境污染物致DNA损伤与修复的分子机制研究进展
作者就环境污染物致DNA损伤、修复与细胞转化的研究进展做一综述,介绍和讨论了外源性因素导致的DNA损伤及特性、DNA修复基因改变和某些重要相关基因特异性的修复与复制过程在致癌过程中的作用.
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缺氧诱导因子1α在砷所致人肝细胞上皮间质转化及其恶性转化中的作用
目的 探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在亚砷酸钠(NaAsO2)所致人肝细胞(L-02细胞)上皮-间质转化(EMT)及其在恶性转化中的作用.方法 用2.0μmol/L NaAsO2慢性处理L-02细胞0、10、20或30代,以0代为对照组.用LipofectamineTM2000将缺氧诱导因子1α对照小干扰RNA(con siRNA)和HIF-1α小干扰RNA(siRNA)转染砷诱导的恶性转化人肝细胞(T-L-02)后,将其分别设定为T-L-02+con siRNA和T-L-02+HIF-1αsiRNA组,并设立L-02组及T-L-02对照组.采用Western blots检测不同组别的EMT指标及HIF-1α表达水平,采用双荧光素酶报告基因实验检测HIF-1α与Snail的结合水平,软琼脂集落形成实验检测细胞恶性程度,侵袭转移实验检测细胞侵袭转移能力.结果 NaAsO2处理10、20和30代L-02细胞后,其E-钙黏附蛋白水平均低于0代细胞组,P值均<0.05;而N-钙黏附蛋白和转录因子Snail相对表达量及HIF-1α水平均高于0代细胞组,P值均<0.05.siRNA处理后,T-L-02+HIF-1αsiRNA组的HIF-1α、N-钙黏附蛋白、Snail水平低于T-L-02对照组,而细胞E-钙黏附蛋白水平高于T-L-02对照组,P值均<0.05.同时,HIF-1α直接靶向Snail调控其表达,使其表达升高.细胞侵袭实验发现,T-L-02+HIF-1αsiRNA组细胞的集落形成数、侵袭细胞数和转移细胞数均低于T-L-02对照组,P值均<0.05.结论 HIF-1α通过调控Snail参与砷所致人肝细胞EMT及其恶性转化.
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癌基因与抑癌基因的检测及其临床诊断意义
癌基因(oncogene)和抑癌基因(tumor suppressor gene)是直接参与肿瘤发生、发展的两大基因. 现已知道, 癌基因有一百多种, 而抑癌基因却不多. 在众多的癌基因中, 任何一种(或多种)发生变化,或癌基因被激活, 均可能引发细胞癌变.癌基因的表达产物,也会促进细胞过分增殖, 具有潜在诱导细胞恶性转化的作用. 抑癌基因正常表达的产物对肿瘤的增殖起着抑制作用, 具有调节细胞正常分化和增殖的功能.
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Aurora A在原发性上皮性卵巢癌组织中的表达
Aurora A(又称为BTAK、SKT15、AIK1、ARK1)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于AuroraIpI1相关激酶家族中的一员,其编码基因位于染色体20q13.2-13.3,此区域在多种上皮性恶性肿瘤中经常发生扩增[1].它在中心体的成熟、纺锤体的组建及染色体的正常分离过程中起着重要的调节作用.Aurora A基因的异常表达可引起有丝分裂的错误,导致异倍体的产生或染色体拷贝数的增加,终引起细胞死亡或者诱发细胞恶性转化[2].提示Aurora A与肿瘤的发生存在着强烈的相关性.本研究采用免疫组织化学的方法,检测了52例不同组织类型的原发性上皮性卵巢癌组织中Aurora A的蛋白表达,并与其在正常卵巢组织及癌旁组织中的表达水平比较,以探讨Aurora A与卵巢癌发生发展的关系.
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实时荧光定量PCR测定人乳头状瘤病毒16型E7基因方法学的建立及其在宫颈疾病诊断中的应用价值
宫颈癌是世界妇女第2高发肿瘤,每年新发病例493 000人,并导致274 000人死亡[1].高危型人乳头状瘤病毒(HPV),尤其是HPV16型,在宫颈癌发生、发展进程中起关键作用[2].病毒早期,E7基因是导致宫颈上皮细胞恶性转化和永生化的重要因素[3],其编码的E7蛋白通过与pRb结合,干扰细胞周期调控及DNA修复,从而使细胞不稳定性增加[4].
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病毒性疾病的诊断
病毒学是从1892年俄国植物学家Dmitri Iwanovski发现了烟草叶病的致病因子具有可滤过性之后,逐渐发展起来的一门独立的学科.近年来不断出现的新发传染病大多由病毒引起,如冠状病毒、猴痘病毒、禽流感病毒等;特别是与常见病毒显然不同,并且导致传染发病的一群新病毒,如慢病毒;致胎儿患先天不治之症的病毒,如风疹、巨细胞病毒等;还有不少病毒在体外能使细胞恶性转化、发展成肿瘤的病毒,如乳头状病毒等等.因此,病毒性疾病是严重危害人民健康的主要病种之一.
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乙型肝炎病毒DNA整合的机制及后果
乙型肝炎病毒(HBV)的感染,与肝细胞癌(HCC)的发生发展密切相关.关于HBV DNA与肝细胞基因组DNA之间的整合,在HCC的发病过程中具有十分重要的意义.经过30 a的积累,形成了一整套研究HBV DNA整合有效的研究技术.参与整合的HBV DNA片段大小不等,主要包括乙型肝炎病毒编码反式调节蛋白的基因区段,如X基因和羧基末端截短的表面抗原中蛋白的编码基因等.关于HBV DNA整合位点也没有明确的特异性位点.HBV DNA与肝细胞基因组DNA整合之后,引起了肝细胞染色体的不稳定性,甚至导致染色体的异常转位.整合的HBV DNA可通过调节基因序列启动指导细胞恶性转化的相关基因,同时HBV DNA整合的基因片段编码的反式激活蛋白可激活细胞生长及恶性转化的基因,导致正常肝细胞的恶性转化.与HBV DNA基因整合相关蛋白的研究还处于初级阶段,包括15AB结合蛋白、小鼠上游结合因子结合蛋白、DNA结合蛋白A、整合序列结合蛋白3以及转录因子阴和阳1蛋白有关.关于HBV DNA整合机制和后果的研究,必将进一步阐明HCC发生的分子生物学机制,为探索新型的治疗技术和治疗方法奠定基础.
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大鼠肝癌形成过程中癌基因表达变化的意义
目的:探讨癌基因在实验性大鼠肝癌形成过程中的表达变化特点及其生物学意义.方法:应用化学致癌剂3'-Me-DAB建立大鼠肝癌模型,取其肝脏用核酸原位杂交和RNA Slot blot杂交方法,动态检测c-myc、Ha-ras和Ki-ras在实验性大鼠肝癌形成过程中的表达变化.结果:在诱癌全过程中,c-myc和Ha-ras均为同步表达;在诱癌的早期可检测到较多c-myc和Ha-fas的阳性表达细胞,而Ki-ras阳性的细胞数则很少,且反应强度弱;而诱癌后期,各癌基因mRNA阳性表达细胞均减少;至17 wk,所有癌组织内均显示3种癌基因表达阴性,或仅见个别小癌巢内少数癌细胞呈弱阳性.而癌旁肝组织内却可见三种癌基因的大量表达.结论:c-myc与Ha-fas被激活是肝癌发生过程中的早期事件,且二者之间具有协同作用,而这种协同作用在肝癌的启动上可能具有重要意义;Ki-ras的激活则发生较晚,可能与促进细胞恶性转化有关.
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幽门螺杆菌CagA蛋白与胃癌组织中Bcl-2、p53蛋白表达的关系
目的:CagA+H.pylori感染与胃癌的相关性在我国报道不一,且致癌机制不祥.本研究应用ELISA法检测H.pylori相关胃癌和慢性胃病血清中抗CagA抗体和免疫组化方法检测全部组织标本中Bcl-2、p53蛋白的表达,研究H.pylori CagA阳性株感染与胃癌、慢性胃病的相关性及与胃黏膜组织中Bcl-2、p53蛋白表达的相互关系,探讨H.pylori的致癌机制.方法:79例患者(胃癌50例、萎缩性胃炎17例、胃溃疡伴不典型增生5例、浅表性胃炎7例)胃镜诊断明确后取胃窦或病变部位活检,用于H.pylori的诊断、病理诊断及免疫组化检测Bcl-2、p53蛋白的表达.H.pylori的诊断采用快速尿素酶试验和ELISA法血清H.pylori抗体或病理Warthin-Starry银染色,两项阳性诊断为H.pylori阳性.用ELISA法检测患者血清CagA-H.pylori抗体,用免疫组化方法检测全部组织标本中Bcl-2、p53蛋白的表达.结果:胃癌组CagA+H.pylori感染阳性率86%(43/50)高于慢性胃病组45%(13/29)(P<0.01),有显著性差异.Bcl-2蛋白表达:胃癌组高于慢性胃病组(62% vs41%;P>0.05),胃癌CagA+组高于CagA-组(65% vs 43%;P>0.05),慢性胃病CagA+组显著高于Cagn-组(77%vs12%;P<0.01).p53蛋白表达:胃癌组显著高于慢性胃病组(54% vs 28%;P<0.05),胃癌CagA+组显著高于CagA-组(60% vs 14%;P<0.05),慢性胃病CagA+组显著高于CagA-组(46% vs12%;P<0.05).结论:胃癌患者CagA+H.pylori感染明显高于慢性胃病者,CagA+H.pylori感染与胃癌发生明显相关,而H.pylori的CagA可使癌前疾病组织中出现Bcl-2蛋白表达,且随着Bcl-2蛋白表达增加疾病的严重程度也增加,即在细胞恶性转化的早期阶段就发挥作用,并逐渐增强,导致胃上皮细胞增生增加,凋亡减少.增生的过程中继而出现p53基因的突变,即突变型p53蛋白表达增强,诱导凋亡作用减弱.
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卵巢癌化疗中若干问题的思考
肿瘤存在异质性( heterogeneity),主要表现为在同一肿瘤内部存在组织学、抗原性、免疫性、激素受体、代谢、生长速度、对化学药物敏感性、浸润和转移等方面的差异[l].肿瘤细胞恶性转化时涉及始祖突变、潜伏、促癌等,这是肿瘤异质性的基础.近的研究显示,在肿瘤组织中可能存在一小部分具有干细胞性质的细胞群体,具有自我更新能力和多向分化潜能[2].因此,肿瘤干细胞也是肿瘤异质性的基础.由于肿瘤异质性的普遍存在,因此在临床诊治卵巢癌时,除遵循规范化治疗外,也应考虑个体化治疗对其诊治结果的影响,需对现有的诊治模式加以思考,不断修改和更正,以符合“否定之否定”规律.
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儿童急性T淋巴细胞白血病诊治进展
急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)为T系前体细胞恶性转化所致的一组造血系统恶性肿瘤,与B前体细胞急性淋巴细胞白血病(B cell precursor ALL,BCP-ALL)在临床特征、细胞遗传学、分子生物学及相关信号传导路径异常等方面具有显著差异,为两组ALL总体预后不同的重要原因,也是临床上制定治疗策略、合理选择治疗方案的重要考虑因素.本文就儿童T-ALL临床特征、发病机制和治疗方面的研究进展综述如下.
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慢性粒细胞白血病伊马替尼耐药性的机制与对策
慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是造血干细胞异常转化而产生的髓系恶性克隆性白血病.CML发病的大特点是存在特异性的费城染色体.其遗传学异常特征为t(9;22)(q34;q11)易位,产生Bcr-Abl融合基因.Bcr-Abl融合蛋白属非受体酪氨酸激酶(tyrosine kinase,TK),其二聚体形式Bcr-Abl融合蛋白的TK活性失控,导致自身及细胞内许多底物蛋白的酪氨酸残基磷酸化,激活多条信号传递途径,干扰细胞的基本活动,如诱导细胞恶性转化和增殖,抑制细胞凋亡,削弱细胞的黏附作用等,从而导致CML.因此,Bcr-Abl酪氨酸激酶被认为是理想的分子靶向.
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口腔鳞状细胞癌Rb基因的检测
口腔鳞状细胞癌是常见的口腔颌面部恶性肿瘤之一,其预后较差.抽烟、饮酒及咀嚼槟榔是重要的致癌因素.目前,口腔上皮细胞恶性转化的分子机制尚未完全阐明.为了更好地预防及治疗口腔鳞状细胞癌,我们应用地高辛标记的Rb cDNA探针对30例原发性口腔鳞状细胞癌中Rb抑癌基因的存在状态进行了研究.
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CDC42与癌症
细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,CDC42)是Rho蛋白鸟苷三磷酸酶(guanosine triphosphatase, GTPase)家族成员之一,在细胞增殖、迁移、转化等过程发挥重要作用。与大多数GTPase一样,CDC42的活性受到鸟嘌呤核苷酸转换因子( guanine nucleotide exchange factors , GEF )、GTP 酶激活蛋白( GTPase activating proteins , GAP)和鸟苷酸解离抑制因子( guanine nucleotide-dissociation inhibitors ,GDI)的调控。目前研究表明,CDC42在大多数人癌症组织中表达异常,对癌症的发生发展具有复杂而重要的调控作用。该文就CDC42自身活性变化、CDC42调节因子的变化及其下游效应因子的变化在癌症中的作用进行综述,旨在深入理解CDC42在人类癌症中的作用机制。
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胰岛素样生长因子Ⅰ及受体与肿瘤研究
胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin-like growthfactorⅠ,IGF-Ⅰ)是细胞增殖的多功能调控因子,由70个氨基酸的多肽组成.正常机体内主要由肝脏合成,大部分存在于血液,与特异性蛋白(IGFBP)结合的形式存在.IGF-Ⅰ通过IGF-Ⅰ受体(IGF-IR)介导可调节机体的代谢,促进细胞有丝分裂、分化和凋亡等.近年来研究发现,IGF-Ⅰ、IGF-IR与细胞恶性转化及肿瘤发生发展有密切的关系.现将它们与细胞转化和肿瘤发生发展及针对它们提出的肿瘤基因治疗方面综述如下.
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细胞角蛋白片断19检测对肺癌的临床意义
细胞角蛋白( Cytokeratin,CK)是一种分化特异的蛋白质,广泛存在于上皮细胞,是组成细胞骨架的蛋白质之一,而间叶组织缺乏角蛋白.在细胞恶性转化和肺癌发生过程中,角蛋白继续存在于上皮性肿瘤内,间叶细胞恶变后仍不表达角蛋白,这为角蛋白的应用提供了理论依据.迄今为止,已发现 20种角蛋白的多肽,角蛋白 19( CK- 19)是其中之一. [1]近 10年来,角蛋白 19片断( CYFRA21- 1)作为一种新发现的肿瘤标记物,对它的研究非常活跃. CYFRA21- 1是一种分子量为 10× 103的酸性蛋白质,在恶性上皮细胞中,激活的蛋白酶加速了角蛋白的降解,使得大量角蛋白片断释放入血,尤其是 CYFRA21- 1在肺癌中含量丰富 [2].下面就 CYFRA21- 1检测对肺癌的临床意义作一综述.
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微囊藻毒素-LR诱导的恶性转化肝细胞miRNA表达谱的变化
目的 构建微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)诱导的人永生化肝细胞株(WRL68细胞)恶性转化模型,检测miRNA表达谱,寻找差异表达的rniRNA.方法 用10 nmol/L MC-LR对WRL68细胞进行连续染毒至第25代,进行软琼脂集落形成实验及裸鼠成瘤实验.通过miRNA芯片技术检测和分析对照WRL68细胞和恶性转化细胞的miRNA表达谱;采用实时荧光定量PCR对芯片结果加以验证;应用TargetScan在线软件预测miRNA可能调控的靶基因.结果 第25代MC-LR染毒组细胞在软琼脂中可以形成集落,能在裸鼠皮下形成肿瘤.芯片检测分析显示,表达差异显著的miRNA有54个,表达上调有35个,表达下调有19个.实时荧光定量PCR结果显示,hsa-miR-140-3p、hsa-miR-19b-1-5p、hsa-miR-203a和hsa-miR-494均下调(P<0.05),与芯片检测结果趋势一致.以生物信息学技术分析miR-494可能调控的靶基因,结果预测到3个与肿瘤相关的潜在靶基因,分别是肿瘤坏死因子受体相关因子3 (TNF receptor-associated factor 3,TRAF3)、微管相关肿瘤抑制基因(microtubule associated tumor suppressor1,MTUS1)和结肠癌转移相关基因(metastasis associated in colon cancer1,MACC1).结论 MC-LR诱导肝细胞恶性转化过程中可引起miRNA表达谱发生显著改变,差异表达的miRNA可能在肝细胞恶性转化过程中起着重要作用.