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人乳头瘤病毒E7蛋白生物活性研究进展
人乳头瘤病毒(HPV)是一种小分子DNA病毒,其早期基因E7编码具有多种生物活性的E7蛋白.E7蛋白与腺病毒EIA及多瘤病毒SV40蛋白有相似的结构,可与pRB、P53反应,改变宿主细胞G1/S期的转化.E7蛋白还能同多种细胞因子发生反应,影响宿主细胞代谢,直接导致宿主细胞中心体的变化.E7蛋白在HPV的致病性方面发挥重要作用.
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中心体在头颈部鳞状细胞癌的扩增表达
目的:通过对头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)细胞系中心体表达和细胞分裂形态的研究,探讨中心体通过对细胞分裂过程的调控,在促进HNSCC染色体不断交化、发展机制过程中的作用.方法:8个HNSCC细胞系和6例头颈部正常组织上皮细胞培养.收获细胞经苏木素和伊红染色,观察分裂中期细胞核形态,计算核多极分裂像细胞百分比.应用抗γ-微管蛋白抗体免疫荧光染色检测细胞中心体,计算含异常中心体数目细胞的百分比.二组数据行直线相关分析.HNSCC组和对照组两组数据平均值行T检验.结果:HNSCC细胞系多极核分裂像细胞平均占分裂中期细胞的9.9±4.8%,含中心体扩增的细胞平均占总体细胞的6.7±3.1%.且二者呈显著正相关,r=0.857,P＜0.01.而正常对照组细胞仅偶尔出现异常分裂中期形态及异常的中心体数目,其平均值分别为0.8±0.9%和1.2±1.4%.HNSCC组和对照组两组数据平均值行T检验,HNSCC组显著高于对照组,T值分别为4.50和4.01,P＜0.01.结论:中心体的异常扩增及其导致的细胞多极分裂是HNSCC病程中的重要体现,在促进HNSCC染色体畸变及其基因变异过程中起重要作用.
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中心体在肿瘤发生及治疗中的作用
中心体维持细胞形态和染色体的准确分离,与损伤修复系统协同应对DNA损伤,维护基因组的稳定性.中心体结构或功能异常与非整倍体及肿瘤发生密切相关,抑制中心体蛋白可诱导肿瘤细胞凋亡,将成为肿瘤治疗的新策略.
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Aurora A在原发性上皮性卵巢癌组织中的表达
Aurora A(又称为BTAK、SKT15、AIK1、ARK1)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于AuroraIpI1相关激酶家族中的一员,其编码基因位于染色体20q13.2-13.3,此区域在多种上皮性恶性肿瘤中经常发生扩增[1].它在中心体的成熟、纺锤体的组建及染色体的正常分离过程中起着重要的调节作用.Aurora A基因的异常表达可引起有丝分裂的错误,导致异倍体的产生或染色体拷贝数的增加,终引起细胞死亡或者诱发细胞恶性转化[2].提示Aurora A与肿瘤的发生存在着强烈的相关性.本研究采用免疫组织化学的方法,检测了52例不同组织类型的原发性上皮性卵巢癌组织中Aurora A的蛋白表达,并与其在正常卵巢组织及癌旁组织中的表达水平比较,以探讨Aurora A与卵巢癌发生发展的关系.
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中心体蛋白centrin在大鼠精子发生过程中的表达
目的 研究中心体蛋白centrin在大鼠生精细胞中的表达情况，以深入了解centrin在精子发生过程中的作用。 方法 通过重力沉降法分离大鼠不同发育阶段的生精细胞，用免疫荧光和蛋白印迹实验检测各级生精细胞中centrin蛋白的表达，用定量RT-PCR检测centrin同源基因centrin1和centrin2 mRNA的表达水平。 结果 间接免疫荧光和蛋白印迹显示精母细胞、圆形、长形精子细胞均有centrin蛋白存在，位于中心粒上，而在附睾的成熟精子中centrin则消失。RT-PCR研究发现，centrin1在睾丸组织中特异性表达，centrin2在多种组织中均有表达。在睾丸中，centrin1仅在生精细胞进入减数分裂后转录，其mRNA水平在圆形精子细胞中高，而centrin2在精原细胞中即有表达，减数分裂后其mRNA难以检测到。 结论 centrin蛋白在大鼠雄性配子的发育过程中终丢失；该基因家族中同源基因centrin1和centrin2表达呈现组织特异性和发育阶段特异性，在精子发生过程中发挥不同功能，centrin1蛋白可能与减数分裂及鞭毛生成相关，centrin2则参与细胞有丝分裂过程。
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中心体蛋白centrin研究进展
Centrin是普遍存在于中心体上的蛋白成分,具有钙离子结合能力.Centrin家族包含多种同源蛋白,这些蛋白在结构上高度保守.研究表明centrin可能与细胞的分化,纤毛的生成定向和切断,精子尾部的生成,中心体复制及其结构维持有密切关系,同时也和细胞的癌变、生长及细胞周期调控有关,还有许多未知功能有待研究.
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口腔鳞状细胞癌细胞周期蛋白E表达与中心体扩增相关性
目的 了解口腔鳞状细胞癌细胞周期蛋白E(cyclin E)表达与中心体扩增相关性,探讨其中心体扩增的可能分子机制.方法 正常口腔黏膜组织12例,不同分化程度的口腔鳞状细胞癌46例石蜡包埋组织,采用间接免疫荧光双重染色(γ-微管蛋白单克隆抗体及细胞角蛋白多克隆抗体)观察口腔鳞状细胞癌中心体扩增状况;采用免疫组织化学(SABC法)检测相应组织cyclin E蛋白表达情况,分析cyclin E蛋白表达与中心体扩增之间的相关性.结果 中心体扩增可见于80.4%(37/46)口腔鳞状细胞癌组织中,而cyclin E蛋白过表达可在65.2%(30/46)的口腔鳞状细胞癌组织中见到;中心体扩增发生率在cyclin E阳性组为90.0%(27/30),而在cyclin E蛋白阴性组为10/16,两组间差异有统计学意义(x2=5.014,P＜0.05);Spearman相关分析显示中心体扩增与cyclin E蛋白阳性表达间存在相关关系(r=0.330,P＜0.05);绝对危险度分析OR值为5.400(1.130,25.809).结论 肿瘤细胞中心体循环调控可能是一个多因素参与的复杂过程,cyclin E蛋白表达的高调作为危险因素之一可能在口腔鳞状细胞癌中心体扩增中起一定作用.
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Aurora A激酶研究进展
Aurora A激酶是进化上保守的有丝分裂丝/苏氨酸激酶Aurora激酶家族成员之一,在细胞内随细胞周期的变化呈动态分布,它广泛的参与了细胞周期不同阶段的各种事件,并在人类多种恶性肿瘤的发生发展过程中起到了至关重要的作用,因而很有可能成为一个极具前途的恶性肿瘤的分子治疗靶点.
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癌基因B-RafV600E导致黑色素瘤Sbcl2和SK-MEL31细胞染色体不稳定性的分子机制研究
目的 研究癌基因B-RafV600E导致肿瘤细胞染色体不稳定的分子机制.方法 采用RNA干扰技术敲除稳定表达B-RafV600E基因的黑色素瘤Sbcl2和SK-MEL31细胞中内源性单核纺锤体蛋白激酶(Mps1)基因表达,免疫荧光染色技术检测中心体及纺锤体结构.HU-arrest分析法观察Mps1基因缺失对癌基因B-RafV600E致肿瘤细胞中心体过度复制及多极纺锤体形成的影响.结果 未敲除内源性Mps1基因的表达B-RafV600E基因的Sbcl2和SK-MEL31细胞中36％出现中心体过度复制及多极纺锤体,Mps1基因被敲除后上述异常细胞比例降低至6％.结论 B-RafV600E可能通过Mps1调控中心体过度复制及多极纺锤体结构的形成,影响肿瘤细胞染色体不稳定性及非整倍体细胞的出现.
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喉癌细胞系中心体扩增与细胞异常分裂的检测
目的 通过对喉鳞状细胞癌(简称喉癌)细胞系中心体表达和细胞分裂形态的研究,探讨中心体通过对细胞分裂过程的调控,在促进喉癌基因不断变异、发展机制过程中的作用.方法 6个喉癌细胞系和4例喉癌旁正常组织上皮细胞培养.收获细胞经苏木素和伊红染色,观察分裂中期细胞核形态,计算核多极分裂像细胞百分比.应用抗γ-微管蛋白抗体免疫荧光染色检测细胞中心体,计算含异常中心体数目细胞的百分比.二组数据行直线相关分析.喉癌组和正常对照组两组数据平均值行t检验.结果 喉癌细胞系多极核分裂像细胞平均占分裂中期细胞(11.53±4.54)%,含中心体扩增的细胞平均占总体细胞的(7.50±3.13)%.且二者呈显著正相关,r=0.814,P＜0.01.而正常对照组细胞仅偶尔出现异常分裂中期形态及异常的中心体数目,其平均值分别为(0.83±0.99)%和(1.26±1.59)%.喉癌组和对照组两组数据平均值行t检验,喉癌组显著高于对照组,t值分别为3.522和3.877,P＜0.01.结论 喉癌细胞系表现为高度的中心体的扩增及细胞多极分裂,这在促进喉癌基因组不稳定性发展过程中起重要作用.
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口腔鳞状细胞癌中心体扩增与染色体不稳定的相关性研究
目的 探讨口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinomas,OSCC)染色体不稳定形成的潜在机制.方法 采用间接免疫荧光染色法观察8例正常口腔黏膜及32例OSCC石蜡包埋组织的中心体形态及数目,采用流式细胞术检测相应组织DNA倍性情况,分析中心体异常与非整倍体之间的相关性.结果 8例正常口腔黏膜均显示大小数目正常的中心体,32例OSCC组织中,25例有明显的中心体数目扩增及排列紊乱,21例为非整倍体;中心体扩增发生率在非整倍体OSCC组(19/21)高于二倍体OSCC组(6/11)(Fisher确切概率=0.032);相关分析显示中心体扩增与OSCC非整倍体之间存在相关关系(Spearman r=0.413,P=0.019),中心体扩增程度与核型异常程度之间呈直线正相关关系(Pearson r=0.364,P=0.041).结论 中心体扩增作为有丝分裂过程中染色体分离错误的始动因素,可能是OSCC非整倍体形成的潜在原因之一.
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p53-p21waf1通路在口腔鳞状细胞癌中心体扩增中的作用及意义
目的 了解口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell cancer,OSCC)p21waf1蛋白表达与中心体扩增的相关性,探讨p53-p21waf1通路在OSCC中心体扩增中的作用及意义.方法 8例正常口腔黏膜及27例OSCC石蜡包埋组织,采用间接免疫荧光双重染色法了解OSCC组织中心体扩增情况;采用流式细胞术及免疫组织化学方法对相应组织p21waf1蛋白表达量及突变型p53蛋白进行检测,分析三者间的相关性.结果 中心体数目扩增(＞2个/细胞)可见于78%(21/27)的OSCC组织,p21waf1蛋白表达量在有中心体扩增的OSCC组织中[(0.878±0.081)]低于无中心体扩增的OSCC组织[(0.952±0.018),t=3.838,P=0.001],OSCC组织中心体扩增程度与p21waf1蛋白表达量间存在负相关关系(r=0.472,P＜0.05);p21waf1蛋白表达量在OSCC组织p53阳性组[(0.823±0.071)]低于p53阴性组[(0.909±0.075),t=3.905,P＜0.01],两者间存在负相关关系(r=-0.491,P＜0.05).结论 p53-p21waf1通路可能参与了OSCC中心体循环调控,p53突变导致的p21waf1蛋白表达下调在OSCC中心体扩增中可能起一定作用.
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Nek2调节中心体异常及其与肿瘤关系的研究进展
Nek2作为中心体的一种调控因素并因其与肿瘤发生、发展的关系逐渐被人们所认识.目前已经发现,Nek2在很多恶性肿瘤中都存在高表达、异位表达或基因变异,其异常表达会导致细胞有丝分裂的异常进而引起肿瘤的发生.该文旨在阐明Nek2基因与肿瘤的发生、发展关系的研究进展.
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LATS2基因在肿瘤研究中的新进展
1 LATS2的概述1.1 LATS2基因编码的蛋白质及生物学作用 LATS2基因属于拉特抑癌家族,编码一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶.该蛋白定位于中心体,作用于细胞各个时期.参与形成aurora-A和ajuba蛋白,负责积累γ-微管蛋白和纺锤体的形成,在中心体有丝分裂环节中起到重要作用[1].LATS2还作为一个负调控因子参与p53功能调控,并可能在与p53功能的一个正反馈循环中起到重要作用[2].此外,它还参与雄激素应答基因表达的抑制[3].
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plk1分子病理学的研究进展
人类Polo样激酶1(polo-like kinase-1,Plkl)是一种高度保守丝/苏氨酸激酶,1994年由Golsteyn等先克隆报道,定位于16p12,mRNA长约2.3 kb,编码的蛋白质分子量约为67 ku,其 N端有一个高度保守的催化区域,C端常有3个被称作Polo盒的保守区域[1],Plk1对细胞周期的正常进行、中心体成熟、细胞质分离等方面有重要作用.近年来,Plkl与肿瘤的关系也受到人们的关注.现就plk1目前的研究进展综述如下.
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中心体α、γ-微管蛋白在乳腺癌前病变及乳腺癌中的表达及其意义初探
目的探讨中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白在人乳腺癌前病变和乳腺癌中的表达及其在乳腺癌发生发展过程中的作用.方法采用免疫组织化学S-P法检测乳腺导管上皮不典型增生、乳腺导管内癌和浸润性导管癌各40例中中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白表达水平,30例正常乳腺组织作为对照组,并用Western 印迹进行验证.所得数据经统计学分析并结合随访情况进行评价.结果不同样本组α-微管蛋白、γ-微管蛋白表达水平不同(P=0.000),随正常上皮组织到出现不典型增生至进展为原位癌和浸润性癌的发展变化,α-微管蛋白、γ-微管蛋白表达量呈增高趋势,以浸润性癌为高(40例中分别有14例、11例表达为+++),各组间差异均有统计学意义(P=0.001).比较同例和同组α、γ-微管蛋白的表达程度差异无统计学意义(P>0.05).癌前病变、导管内癌、浸润性导管癌组α、γ-微管蛋白的表达水平与预后具有相关性.结论中心体异常为乳腺癌细胞恶性表型的明显特征之一,并可能为乳腺癌形成过程中的早期事件.α、γ-微管蛋白的表达情况可为乳腺癌发生机制探讨、高危病例筛选及估测预后提供一种新的途径.
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p21~(waf1)-p27~(kip1)基因联合转染对乳腺癌细胞增殖和中心体复制的影响
目的 探讨外源性 p21~(waf1)-p27~(kip1)基因联合转染对人乳腺癌细胞细胞增殖及中心体复制的影响和意义.方法 应用脂质体介导法分别将构建的plRES-p27~(waf1)、p27~(kip1)、pIRES-p21~(waf1)-p27~(kip1)真核表达载体,转染入常规培养的人乳腺癌细胞系MCF-7,未转染组、转染空质粒组细胞做对照,Western免疫印迹法验证转染前后p21~(waf1)、p27~(kip1)基因蛋白表达情况;噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期DNA分布变化;免疫荧光技术检测转染前后中心体复制的变化情况.结果 Western免疫印迹法证实p27~(waf1)、p27~(kip1)、p27~(waf1)基因转染24 h后,其蛋白表达量明显增多(P<0.01),与对照组比较,各转染实验组细胞生长明显受抑制(P<0.01),细胞周期大部分停滞于G1期,各实验组G.期和S期细胞比例依次为:(69.52±3.21)%、(18.38±2.51)%,(60.83±3.02)%、(24.52±1.89)%,(78.37±2.83)%、(15.27±1.74)%,对照组则为(47.28±2.25)%、(33.52±1.97)%,中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前(13.47±0.33)%明显减少:(5.07±0.38)%,(6.28±0.35)%,(3.47±23)%,两两比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 外源性p21~(waf1)和p27~(kip1)基因转染可抑制人乳腺癌细胞的增殖及中心体的异常复制,二者联合转染时效果显著.提示,乳腺癌的发生、发展是多基因、多因素共同参与的过程,p21~(waf1)和p27~(kip1)在调控细胞增殖及中心体复制方面具有协同作用,对于p21~(waf1)、p27~(kip1)基因失活、低表达或不表达的乳腺癌,联合转染外源性p21~(waf1)、p27~(kip1)基因不失为一种有效的治疗手段.
关键词： 乳腺肿瘤 中心体 细胞增殖 p21~(waf1)基因 p27~(kip1)基因 -
煤焦沥青烟提取物致BEAS-2B恶性转化细胞中心体及其调控蛋白的变化
目的 分析煤焦沥青烟提取物诱导人支气管上皮细胞BEAS-2B恶变过程中细胞内中心体及其调控蛋白的变化,探讨中心体在煤焦沥青烟提取物致肺癌中的作用及机制.方法 用中温煤焦沥青烟提取物作为诱导剂,建立永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B的恶性转化模型,作为煤焦沥青烟提取物染毒组(煤焦沥青组),设溶剂对照组和正常对照组平行传代培养,用细胞爬片间接免疫荧光法检测中心体改变,用实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测相关基因的mRNA表达;细胞爬片免疫组化半定量法检测相关蛋白表达.结果 煤焦沥青组第20代细胞中心体总异常率为6.56％±1.01％,明显高于正常对照组(3.40％±0.86％)和溶剂对照组(3.14％±0.59％),差异有统计学意义(P＜0.05).与正常对照组(4.34％±1.04％)和溶剂对照组(4.33％±1.20％)比较,煤焦沥青组第30代细胞中心体总异常比例(22.39％±9.5％)明显增大,差异有统计学意义(P＜0.05).煤焦沥青组第20、30代细胞的P53、P21基因和蛋白表达明显降低,Cyclin E基因和蛋白表达明显升高,与正常对照组相和溶剂对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在煤焦沥青烟提取物诱导BEAS-2B细胞恶性转化过程中,中心体异常出现在细胞恶性改变前.中心体异常可能是通过P53/P2 1/CyclinE通路异常而引起.
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野生型p53基因对K562细胞中心体数量和蛋白的影响
目的 研究重组腺病毒介导的野生型p53基因(Ad5wtp53)对人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞系中心体数量和中心体蛋白表达的影响.探讨应用重组腺病毒p53基因对CML进行基因治疗的可行性.方法 分别将含有野生型p53基因、突变型p53基因和绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体(AdSwtp53、Ad5mtp53和Ad5GFP)反复扩增,联合多聚季胺共同感染K562细胞.观察感染效率.MTT法确定适重组腺病毒感染滴度和感染时间.然后用RT-PCR和Western blot检测p53 mRNA和蛋白的表达.后应用间接免疫荧光染色法对中心体γ-微管蛋白和纺锤体α-微管蛋白同时进行标记,在激光共聚焦显微镜下观察中心体γ-微管蛋白的表达和有丝分裂,并对中心体进行计数.结果 多聚季胺可显著提高腺病毒载体对K562细胞的感染效率.多聚季胺的剂量选择为4μg/ml;感染K562细胞的适腺病毒滴度为20 000 MOI,感染时间为72 h;Ad5wtp53和AdSmtp53转染的K562细胞均可表达p53 mRNA和蛋白.Ad5wtp53感染K562细胞后,中心体数量减少,γ-微管蛋白的表达降低.结论 重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达;野生型P53蛋白能够降低K562细胞中心体数量及中心体γ-微管蛋白的表达.
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核磷蛋白与恶性血液病
核磷蛋白(nucleophosmin,NPM)又名B23、NO38、Numatrin,是一种多功能的核仁磷酸化蛋白,广泛表达于各组织细胞,穿梭于胞核与胞质参与核糖体的装配、前rRNA的加工剪切、DNA复制、中心体复制、细胞分裂等生命活动.近年来,对于其生物学功能的研究颇受关注.自从Stein首先报道了NPM-ALK基因是CD30+(ki-1)间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)的典型特征后,NPM作为分子遗传标志物与疾病诊断、预后的关系越来越引起研究者的关注.1994年,Morris和Shiota克隆出NPM-ALK融合基因后,人们发现NPM变异对于肿瘤尤其是恶性血液病的发生、发展和预后起着重要的作用.
