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NEK2基因沉默促进卵巢癌细胞SKOV3凋亡
目的 研究siRNA干扰NEK2表达对卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响及其分子机制.方法 设计合成3条对NEK2的siRNA,转染进SKOV3细胞,采用real-time PCR和Western blot技术筛选出抑制效率高的NEK2-siRNA序列,进行后续实验；分别采用MTT和流式细胞学技术检测细胞增殖和凋亡,用Western blot检测BAD、BCL-2和caspase-3的表达.结果 1)RNA干扰序列2对SKOV3细胞NEK2的抑制效果明显；2)与空白组和阴性对照组相比,NEK2-siRNA转染48 h后,SKOV3细胞增殖能力下降,发生凋亡的细胞增加(P＜0.01)；3)与空白组和阴性对照组相比,NEK2-siRNA转染48 h后,SKOV3细胞中BAD和caspase-3的蛋白表达上调,而BCL-2的蛋白表达下调(P＜0.01).结论 NEK2-siRNA可能通过沉默NEK2的表达,促进卵巢癌细胞SKVO3的凋亡.
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Nek2调节中心体异常及其与肿瘤关系的研究进展
Nek2作为中心体的一种调控因素并因其与肿瘤发生、发展的关系逐渐被人们所认识.目前已经发现,Nek2在很多恶性肿瘤中都存在高表达、异位表达或基因变异,其异常表达会导致细胞有丝分裂的异常进而引起肿瘤的发生.该文旨在阐明Nek2基因与肿瘤的发生、发展关系的研究进展.
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小分子NEK2干扰RNA对肺癌细胞耐药的研究
目的 探讨小分子NEK2干扰RNA (siRNA-NEK2)逆转人肺癌耐药细胞(A549/DDP)耐药性的研究.方法 应用Real-time PCR法及Western blot法验证NEK2基因在人肺腺癌耐药细胞系(A549/DDP)细胞系呈现高表达;并采用脂质体为转染介质,将NEK2小片段RNA导入A549/DDP细胞沉默NEK2基因;应用MTT法观察顺铂、阿霉素对沉默NEK2基因后的A549/DDP细胞的细胞毒活性变化.结果 NEK2-mRNA、NEK2蛋白在A549/DDP细胞系表达水平均显著高于A549细胞系,差异有统计学意义(P＜0.05);顺铂、阿霉素对A549/DDP细胞的半数抑制浓度(IC50)分别是(53.08±0.56)、(8.09±0.31) μg/mL,对siRNA-control A549/DDP细胞的IC50分别是(53.09±0.78)、(8.10±0.98) μg/mL,而对siRNA-NEK2 A549/DDP细胞的1C50有显著下降,其值分别是(18.59±0.10)、(2.30±0.14) μg/mL,两组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 小分子NEK2干扰RNA沉默NEK2可以提高耐药的肺癌细胞对化疗药物的敏感性.NEK2可能成为逆转肺癌耐药的一个新的靶点.
关键词： 肺癌 细胞耐药 NEK2 siRNA-NEK2 -
NEK2、ERK2和P53在乳腺癌中的表达及意义
目的 通过检测乳腺原位癌及浸润性癌组织中NIMA相关蛋白激酶Nek2、细胞外信号调节激酶ERK2和细胞周期调节因子P53的表达,探讨其在乳腺癌的意义及相关性.方法 采用免疫组织化学ElivisionTMplus两步法,研究86 例乳腺浸润性癌、10例乳腺导管原位癌、20例正常乳腺组织NEK2、ERK2和P53的表达情况.结果 Nek2在三组中的表达率分别为87.2%、50.0%和10.0%;ERK2分别为96.7%、80.0%和10.0%;P53分别为0.0%、40.0%和58.1%.Nek2与ERK2的表达呈正相关,ERK2与P53的表达呈正相关,NEK2与P53的表达呈正相关.Nek2蛋白和ERK2蛋白的表达均与患者发生肿瘤的淋巴结转移、组织学分级及临床分期呈明显正相关,而与患者的年龄,肿物大小,月经情况,组织类型无关.而P53仅与组织学分级有关.结论 ERK2相关信号传导通路和Nek2、P53相关的细胞周期调节共同参与了乳腺癌的形成过程.
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NEK2及ERK2在乳腺癌中的表达及意义
目的 通过检测乳腺原位癌及浸润性癌组织中NIMA相关蛋白激酶NEK2和细胞外信号调节激酶ERK2的表达,探讨其在乳腺癌变过程中发挥的作用.方法 采用免疫组织化学ElivisionTMplus两步法,研究86例乳腺浸润性癌、10例乳腺原位癌、20例乳腺组织的表达情况.结果 NEK2在3组中的表达情况分别为87.2%、50.0%、10.0%.ERK2在3组中的表达情况分别为96.7%、80.0%、10.0%.NEK2与ERK2的表达呈正相关.NEK2蛋白和ERK2蛋白的表达均与患者发生肿瘤的淋巴结转移、病理学分级及临床分期呈明显正相关,而与患者的年龄,肿物大小,月经情况,组织分型无关.结论 ERK2相关信号传导通路和NEK2共同作用参与了乳腺癌的形成过程.
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胃癌组织中Nek2、Plk1和Cdk1的表达及意义
目的：探讨胃癌组织中Nek2、Plk1和Cdk1的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测80例胃癌组织中Nek2、Plk1和Cdk1的表达。结果80例胃癌组织中Nek2、Plk1和Cdk1的阳性率分别为64%(51/80)、79%(63/80)、85%(68/80)，正常胃黏膜组织中Nek2、Plk1和Cdk1的阳性率分别为15%(3/20)、10%(2/20)、20%(4/20)，胃癌组织中Nek2、Plk1和Cdk1的表达水平明显高于正常胃黏膜组织，差异有统计学意义( P<0．01)。 Nek2表达与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期显著相关(P<0．05)，与患者年龄、性别、肿瘤大小无明显相关性(P>0．05)。 Plk1、Cdk1表达与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期呈显著相关性( P<0．05)，与患者年龄、性别无明显相关性( P>0．05)。 Nek2与Plk1、Plk1与Cdk1、Nek2与Cdk1的表达呈显著正相关(P<0．001)。结论 Nek2、Plk1和Cdk1异常表达与胃癌的发生、发展密切相关，联合检测三者对胃癌的诊断、治疗及判断预后具有重要意义。
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CDC20、TOP2A、NEK2在食管鳞癌中的表达及其与临床病理特征及预后的相关性
目的 探讨CDC20、TOP2A、NEK2在食管鳞癌中表达及其与食管鳞癌临床病理特征及预后的相关性.方法 选取实施根治性手术的食管鳞癌患者70例,均术中做病理取材标本,A组(癌组织)、B组(癌旁组织)、C组(正常组织),采用免疫组化法、半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CDC20、TOP2A、NEK2表达情况.结果 A组CDC20、TOP2A、NEK2表达水平高,与B、C组差异明显(P＜0.05);B组CDC20、TOP2A、NEK2表达水平高于C组,差异明显(P＜0.05).食管鳞癌患者性别、年龄、瘤体大小、位置等因素与CDC20、TOP2A、NEK2表达无相关性(P＞0.05);TNM分期、淋巴转移及浸润因素与CDC20、TOP2A、NEK2呈正相关性(P＜0.05);肿瘤分化与CDC20、TOP2A、NEK2阳性表达率呈负相关.TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴转移、静脉浸润及CDC20、TOP2A、NEK2阳性表达均是影响食管鳞癌患者预后存活的危险因素.结论 CDC20、TOP2A、NEK2高表达与食管鳞癌转移、复发、预后均有密切相关,三项指标联检可准确评估食管癌病理状态,为患者预后判定提供参考.
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Nek2对肝癌细胞凋亡的影响及其分子机制的研究
目的 研究Nek2(nima-related kinase2)在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达,并通过沉默肝癌细胞中的Nek2 基因,研究Nek2对肝癌细胞凋亡的影响,并初步探索其机制.方法 使用Western blotting对27对肝癌及非癌组织和正常肝细胞株HL-77026及人肝癌细胞株HepG2、PLC/PRF/5、Hep3B、BEL-7402、SMMC-7721、QGY-7701中Nek2的蛋白表达情况进行分析.筛选HepG2细胞系进行下一步实验.沉默肝癌细胞HepG2中的Nek2因子,通过流式细胞仪( FACS)分析,采用Western blotting技术检测转染前后肝癌细胞中P53、Bcl-2、Bad、Caspase-3蛋白表达的变化.结果 Nek2在肝癌组织和6个肝癌细胞株中均表达升高.沉默肝癌细胞系HepG2中的Nek2后可使细胞的凋亡增强,P53、Caspase3和Bad的蛋白表达升高,抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表达下降.结论 抑制Nek2表达可以明显促进肝癌HepG2细胞的凋亡,并通过影响凋亡信号传导通路中的重要因子来促进细胞的凋亡.
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Nek2和β-连接素在乳腺浸润性导管癌中的表达和意义
目的 探讨中心体相关调节因子Nek2和β-连接素(β-cat)在人乳腺浸润性导管癌(IDC)和IDC伴发的导管内癌(DCIS)中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学方法(IHC)检测186例IDC、伴发的75例DCIS和80例癌旁正常组织及40例乳腺纤维腺瘤中Nek2和β-cat蛋白的表达定位及表达水平,并与其他多个临床病理参数进行比较分析.结果 IDC中不同组织学分级(x2=8.756;P<0.05)、不同肿瘤大小(x2=6.518;P<0.05)间Nek2细胞质表达不同,在其他指标分组间表达差异无统计学意义(P>0.05);Nek2细胞核表达在IDC中有32例(32/186),在伴发的DCIS中有15例(15/75);IDC中不同组织学分级(x2=45.493;P<0.01)、TNM分期(x2=9.510;P<0.01)、淋巴结转移(Z=-2.035;P<0.05)、雌激素受体(ER)表达(Z=-3.004;P<0.01)组间[β-cat细胞膜表达有差异,在其他临床病理参数组间差异无统计学意义(P>0.05);β-cat细胞质表达在不同TNM分期间差异有统计学意义(x2=8.194;P<0.05),在其他参数组间差异无统计学意义(P>0.05);伴发的75例DCIS中Nek2和β-cat表达在各病理学参数组间差异均无统计学意义(P>0.05),Nek2细胞质表达与β-eat细胞质表达正相关(r=0.226,P<0.05).IDC中Nek2细胞质表达与β-cat细胞质表达正相关(r=0.368,P<0.01).此外,在75例伴发DCIS的病例中,β-cat细胞膜表达率在DCIS中比IDC中要高(Z=-3.804,P<0.01).癌旁正常组织和纤维腺瘤中Nek2细胞质和细胞核均为低表达或阴性,β-cat细胞膜均为高表达而细胞质均为低表达.结论 研究中心体调节因子Nek2和β-cat的表达可能成为探讨乳腺浸润性导管癌发生发展机制的途径.
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Nek2在消化系统肿瘤中的表达
目的 检测NIMA相关激酶Nek2在消化系统肿瘤中的表达.方法 对由11例消化系统正常组织及37例肿瘤组织制成的96个点的组织芯片,采用免疫组化方法,检测Nek2在不同组织中的表达.结果 Nek2在消化系统肿瘤胞核和(或)胞浆表达普遍增高.在37例消化系统肿瘤组织中,Nek2在细胞核中高表达率为43.2％,而正常组织只有9.1％,两者差异有统计学意义(P＜0.05).Nek2在肿瘤组织胞浆中高表达率为56.8％,明显高于正常组织的0.0％(P＜0.05).结论 Nek2在消化系统肿瘤中表达普遍上调,可能成为一个鉴别肿瘤与正常纽织的有价值的分子标记物.
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miR-195调控NEK2对前列腺癌细胞增殖的影响
目的 研究miR-195调控中心体相关激酶2(NEK2)对前列腺癌细胞增殖的影响.方法 Western blot检测在稳定表达和抑制表达miR-195的LNCaP细胞株中NEK2蛋白的表达水平;构建克隆编码miR-195的序列片段慢病毒载体和表达NEK2的质粒载体,对转染空载体和NEK2,以及同时转染了miR-195模拟物和NEK2、miR-195模拟物和空载体的LNCaP细胞株进行CCK8细胞增殖实验;采用shRNA方法构建干扰NEK2基因表达质粒,NEK2抑制成功和miR-195过表达的LNCaP细胞进行细胞增殖实验,测定si-NC、si-NEK2、si-195的LNCaP细胞的生长速度.结果 在过表达miR-195的LNCaP细胞株中NEK2蛋白的表达水平比阴性对照miR-NC的LNCaP细胞株中蛋白表达水平明显降低(P＜0.01);相反,在miR-195被抑制表达的LNCaP细胞株中NEK2蛋白的表达水平明显增加(P＜0.01).细胞增殖实验显示转染NEK2基因的LNCaP细胞在72、96 h生长速度显著快于转染空载体的细胞(P＜0.01);转染miR-195模拟物和NEK2的LNCaP细胞在72、96 h生长速度显著慢于单纯转染NEK2的LNCaP细胞(P＜0.01);si-NEK2的LNCaP细胞在72、96 h生长速度明显慢于si-NC,且与miR-195过表达的LNCaP细胞相似.结论 miR-195负性调控相关下游基因NEK2的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖,初步验证了miRNA-195-NEK2信号轴在前列腺癌中的作用.
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NEK2与前列腺癌预后的相关研究
目的 研究NEK2(中心体相关激酶2)在前列腺癌和良性组织中的表达情况及其与前列腺癌预后的相关性.方法 运用qRT-PCR检测NEK2在前列腺癌和癌旁组织的表达差异,通过组织芯片免疫组化染色检测的方法检验NEK2在前列腺癌和癌旁组织的表达情况,后使用Taylor的数据对NEK2进行生物信息学分析. 结果 qRT-PCR检测NEK2在前列腺癌组织的表达显著高于癌旁组织(6.93±0.15 vs 5.38±0.4,t=6.25,P=0.003),组织芯片免疫组化结果显示NEK2在前列腺癌组织的表达显著高于癌旁组织(5.84±0.56 vs 4.27±0.49,t=5.38, P<0.001),结合Taylor公用数据库分析,NEK2高表达组患者术后的生化复发生存率减少(x2=4.33,P=0.037),NEK2高表达组和低表达组在前列腺癌总体生存率上没有明显区别(x2=0.27,P=0.605).结论 NEK2参与前列腺癌的发生、发展进程,同前列腺癌发病进程密切相关,通过检测前列腺癌患者NEK2的表达情况,可早期预测生化复发的概率,能够作为判断前列腺癌预后的潜在生物学标志物.
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NEK2在子宫内膜异位症的表达及意义
目的:研究子宫内膜异位症组织中NEK2 mRNA和蛋白的表达情况及意义.方法:利用real-time RT-PCR和Western Blot免疫印迹的方法,对子宫内膜异位症的在位内膜组织(在位内膜组)、异位内膜组织(异位内膜组)和非子宫内膜异位症的在位内膜组织(对照组)进行NEK2mRNA和蛋白水平的半定量分析.结果:NEK2mRNA和蛋白在异位内膜组、在位内膜组及对照组中均有表达(0.506 ±0.311、1.509±0.408、1.820±0.621;0.344±0.093、1.298±0.594、1.577±0.167),异位内膜组的表达均低于在位内膜组和对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01);在位内膜组和对照组表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:NEK2在子宫内膜组织中均表达,且在异位内膜中表达下调.NEK2表达可能与子宫内膜异位症有关,但其低表达以何种方式影响子宫内膜异位症的病程发展还需进一步深入研究.
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中心体相关激酶Nek2与乳腺癌前病变及早期癌变的相关性研究
目的：探讨中心体相关蛋白激酶Nek2蛋白及DNA水平在乳腺上皮恶变过程中各阶段的作用。方法：选取正常乳腺组织20例、重度不典型导管上皮增生/外周型乳头状瘤病伴导管上皮不典型增生20例、导管内癌20例，浸润性导管癌20例。采用免疫组织化学的方法分别检测4组样本组织冻切片Nek2蛋白的表达情况，采用荧光实时定量聚合酶链式反应检测4组样本组织Nek2拷贝数扩增情况。结果：Nek2蛋白表达在4组样本之间差异性显著（ p=0.000）。荧光实时定量PCR结果显示Nek2的DNA拷贝数在各组之间的表达有统计学差异（ p=0.000）。Nek2蛋白表达随着肿瘤恶性程度的提高而增加，同时DNA拷贝数随着肿瘤恶性程度的提高而扩增，二者存在正相关性（ r=0.887，p<0.01）。结论：Nek2蛋白表达在导管内癌组显著高于癌前病变组，说明Nek2蛋白表达免疫组化检测结果可作为乳腺癌早期诊断和高危人群筛选的辅助指标。Nek2基因扩增同蛋白表达呈正相关性，变化趋势一致，提示蛋白过表达可能来自于基因扩增。Nek2异常同中心体异常变化趋势一致，作为中心体相关激酶，通过对中心体的调节作用，可造成中心体数量、结构和功能的异常，从而导致肿瘤的发生。
