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解耦联蛋白2在人卵巢的表达及与年龄的关系
目的探讨解耦联蛋白2(UCP2)在卵巢组织的表达及其与年龄的关系.方法用原位杂交和Western blot检测33例,其中＜36岁11例,≥36岁22例.手术切除的卵巢组织UCP2 mRNA和蛋白的表达,结果UCP2主要表达于人类卵巢生长卵泡的颗粒细胞和卵巢血管壁细胞内,在蛋白水平,年长女性UCP2表达水平显著低于年轻女性.结论UCP2可能参与卵泡发育调控,年长女性颗粒细胞UCP2表达降低可能是年龄相关卵母细胞改变的机制之一.
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解耦联蛋白2对大鼠肝纤维化形成中星形细胞活化的影响
目的：探讨解耦联蛋白2（ UCP2）在肝纤维化形成过程中的作用及其发生机制。方法体内实验采用四氯化碳（CCl4）诱导肝纤维化模型，取肝脏观察病理变化，用Western blotting、免疫组织化学和Real-time PCR等方法检测UCP2和p38丝裂素活化蛋白激酶（ p38MAPK）的表达水平；体外实验采用UCP2特异性抑制剂京尼平和CCl4刺激星形细胞，检测UCP2和p38MAPK相关蛋白的表达情况。结果与正常组相比，模型组大鼠肝脏α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和UCP2表达增高（P＜0．05，n＝10）；加入CCl4刺激细胞后，星形细胞α-SMA表达增加， p38MAPK及其磷酸化水平增高（P＜0．05，n＝6）；而在加入京尼平后，α-SMA表达增加，p38 MAPK及其磷酸化水平明显降低（P＜0．05，n＝6）。结论 UCP2参与了肝纤维化的发生，可能促进了星形细胞的活化及增殖过程。
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膳食辣椒素对醋酸脱氧皮质酮-盐型高血压大鼠肾脏氧化应激损害的保护作用
目的 观察膳食辣椒素对醋酸脱氧皮质酮(DOCA)-盐型高血压大鼠的肾脏保护作用.方法 10周龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠16只,术后随机分成普食组和辣椒素组,每组8只;另取8只大鼠行假手术作为对照(假手术组).辣椒素组于术后给予含0.2 g/kg辣椒素饲料喂养,普食组与假手术组给予普通饲料喂养,膳食干预时间为8周.每周监测血压、体质量;干预8周后收集24 h尿液及取血浆观察肌酐、尿素氮、尿蛋白等指标;解剖显微镜下分离肾内小动脉行冰冻切片,利用超氧阴离子和一氧化氮的荧光探针染色后分析一氧化氮和超氧阴离子水平,Western blot法观察肾内小动脉解耦联蛋白2(UCP2)、硝基酪氨酸、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)和瞬时受体电位香草醛亚家族1(TRPV1)蛋白表达的变化.结果 干预8周后,DOCA-普食组收缩压高于假手术组[(186.5±9.4)比(103.8±8.9)mm Hg,P＜0.01];肾内小动脉超氧阴离子水平升高,一氧化氮水平下降[DHE荧光强度(69.1±3.0)比(18.3±1.6),P＜0.01;DAF-2DA荧光强度:(15.0±1.1)比(27.0±0.8),P＜0.01];Western blot显示肾内小动脉组织TRPV1、p-eNOS下降(P＜0.01),硝基酪氨酸蛋白表达水平增加(P＜0.01);单肾质量/体质量、血尿素氮、24 h尿蛋白、血肌酐增加[分别(9.64±1.31)比(4.13±0.64)mg/g;(11.13±3.01)比(4.25±1.66) mmol/L,(44.85±8.50)比(7.48±1.07)mg/24 h,(71.47±9.32)比(36.97±2.32)μmol/L,均P＜0.05],肌酐清除率下降[(2.25±1.13)比(5.88±0.14) mL/min,P＜0.05].与DOCA-普食组相比,DOCA-辣椒素组肾内小动脉TRPV1和UCP2表达、肾内小动脉组织中p-eNOS蛋白表达水平、一氧化氮水平增加(均P＜0.01),硝基酪氨酸蛋白表达、超氧阴离子水平降低(均P＜0.01),血压[(160.3±7.3)比(186.5±9.4)mm Hg,P＜0.01]和肾功能指标[单肾质量/体质量:(7.94±1.08)比(9.64±1.31) mg/g;血尿素氮:(8.25±1.16)比(11.13±3.01)mmol/L;24 h尿蛋白:(31.54±6.45)比(44.85±8.50)mg/24 h;血肌酐:(60.32±5.13)比(71.47±9.32)μmol/L,均P＜0.05]降低.结论 辣椒素对DOCA-盐型高血压大鼠肾脏氧化应激损害有明显的保护作用,其机制涉及激活TRPV1,上调UCP2的表达,从而减轻氧化应激对肾脏的损害.
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糖尿病大鼠肾脏解耦联蛋白2表达及促红细胞生成素对其干预的研究
目的 观察DN大鼠肾脏解耦联蛋白2(UCP2)的表达,并探讨促红细胞生成素(EPO)对其表达的影响. 方法 STZ构建糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病(DM)组,促红细胞生成素干预(EPO)组,另设健康对照(NC)组.PAS和HE染色观察各组肾脏病理变化,免疫组织化学及Western blot观察肾组织UCP2蛋白表达水平,RT-PCR测定各组肾组织UCP2 mRNA表达. 结果 DM组4、8、12周肾脏中UCP2 mRNA及蛋白的表达逐渐升高,EPO组肾脏UCP2 mRNA及蛋白表达均较DM组减少(P＜0.05). 结论 糖尿病大鼠肾脏中UCP2表达升高,EPO可减少UCP2表达,对肾脏起保护作用.
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运动预适应对急性运动性损伤后心肌组织解耦联蛋白2表达及氧化应激水平的影响
目的：观察运动预适应对急性运动损伤后大鼠心肌组织解耦联蛋白2表达及氧化应激水平的影响，探讨运动预适应对急性运动性心肌损伤的保护作用。方法将30只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为3组（每组各10只）：安静对照组（C）、一次力竭运动组（E）、运动预适应+一次力竭组（EE）。通过一次性力竭游泳运动建立大鼠急性运动性损伤模型，EE组力竭运动前进行运动预适应训练，力竭运动时记录各组大鼠力竭时间，力竭运动后检测各组大鼠心肌线粒体内丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平；RT-PCR检测心肌组织解耦连蛋白2（UCP2）的mRNA水平，免疫组化法检测心肌组织UCP2蛋白表达。结果氧化应激水平：与C组比较，E、EE组心肌细胞线粒体SOD活性及GSH-Px活性均显著降低，SOD活性分别降低60.50%、28.64%（P均＜0.01）， GSH-Px活性分别降低51.23%、39.12%（P均＜0.01），MDA浓度分别升高187.70%、155.66%（P均＜0.01）。与E组比较，EE组心肌细胞线粒体SOD活性分别升高80.65%，GSH-Px活性升高24.83%；MDA浓度降低11.14%（P均＜0.01）。UCP2表达水平：与C组比较，E组UCP2mRNA相对量及蛋白相对表达量均明显升高（P＜0.01）；与E组比较，EE组UCP2mRNA相对量及蛋白相对表达量均明显降低（P＜0.01）。结论急性运动性损伤使心肌组织UCP2表达增多，并可提高氧化应激水平，运动预适应可减少UCP2表达并减轻氧化应激水平，对心肌组织具有保护作用。
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压力超负荷致心力衰竭大鼠解耦联蛋白2表达及心肌能量变化
目的 探讨压力超负荷致心力衰竭大鼠心肌线粒体解耦联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)表达的改变及其意义.方法 雄性SD大鼠45只随机分为腹主动脉缩窄组(H20w组)、假手术组(SH20w组)和正常对照组(N组)3组,每组15只,H20w组行腹主动脉缩窄术.术后20周,行心脏超声检测心功能、观察大鼠血液动力学参数,高压液相色谱法测量心肌组织腺苷酸含量,密度梯度法提取大鼠心肌线粒体,逆转录聚合酶链反应及Western blot法分析心肌线粒体UCP2表达.结果 大鼠行腹主动脉缩窄术后20周出现心功能减退,血液动力学异常等心力衰竭表现,提示建模成功.同时间比较,H20w组心肌组织内三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷、单磷酸腺苷及磷酸肌酸含量均低于SH20w组和N组.逆转录聚合酶链反应及Westem blot表明H20w组心肌线粒体UCP2表达水平分别较SH20w组高69%、61%,较N组高76%、65%(P<0.01),相关性分析显示UCP2表达量与心肌组织内ATP含量变化呈负相关(r=-0.929,P<0.01).结论 心力衰竭时,心肌线粒体UCP2表达增高,导致心肌ATP含量减少,可能参与了衰竭心肌能量代谢障碍.
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解耦联蛋白2与动脉粥样硬化
心血管疾病是目前全世界范围内致死和致残的主要疾病,其主要病理改变是动脉粥样硬化.越来越多的证据表明病理状态下活性氧簇生成增多所导致的血管功能异常在动脉粥样硬化的发生、发展过程起到了重要作用.解耦联蛋白2是位于线粒体内膜上的质子载体蛋白,通过解耦联作用能降低线粒体内膜电势,使活性氧簇产生减少,因而具有预防动脉粥样硬化的作用.
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解耦联蛋白2的主要生理功能及研究进展
解耦联蛋白2是位于线粒体内膜上的转运蛋白,广泛存在于骨骼肌、心脏、肝、肾、胰等多种组织中.解耦联蛋白2参与能量代谢、凋亡、活性氧的生成等过程,并同非酒精性脂肪肝、动脉粥样硬化、局部缺血以及缺血再灌注损伤、肥胖及2型糖尿病等有着密切的关系,故引起人们的广泛重视.本研究对解耦联蛋白2的主要生理功能及研究进展予以综述.
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PPARγ、UCP2与非乙醇性脂肪性肝病
研究显示过氧化物酶体增殖物激活受体γ和解耦联蛋白2参与了非乙醇性脂肪性肝病的发病.过氧化物酶体增殖物激活受体γ和胰岛素抵抗及脂肪细胞因子间有密切联系.解耦联蛋白2也可调节胰岛素分泌、限制活性氧产生、调节ATP合成等.阐明过氧化物酶体增殖物激活受体γ、解耦联蛋白2与非乙醇性脂肪性肝病之间的联系有助于进一步防治非乙醇性脂肪性肝病.
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解耦联蛋白2:肥胖及2型糖尿病发展过程中的关键因子
众所周知,胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能受损是发生2型糖尿病(T2DM)的两个重要的病理生理学因素.研究发现,解耦联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)与胰岛β细胞功能相关.下面就其新研究进展综述如下.
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水溶性壳聚糖对缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用
目的 探讨水溶性壳聚糖(WSC)对缺血再灌注损伤(IRI)大鼠心肌的保护作用及其机制,为药物防治心肌IRI提供实验依据.方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、IRI模型组、低剂量WSC组、中剂量WSC组和高剂量WSC组,每组12只.其中,IRI模型组和各剂量WSC组大鼠用开胸直视下结扎左冠状动脉前室间支法建立大鼠IRI模型,假手术组大鼠仅分离而不结扎左冠状动脉前室间支.假手术组和IRI模型组给予生理盐水10ml/kg.低剂量WSC组、中剂量WSC组和高剂量WSC组分别给予WSC120 mg/kg、180 mg/kg和240mg/kg,每日灌胃一次,15 d后处死大鼠.心脏取血,分离血清,用ELSIA法检测血清中SOD和MDA水平.在靠近心尖部1/3处平行于房室沟横行切取新鲜心肌组织块,固定后石蜡包埋.用HE染色法观察心肌组织形态变化.RT-PCR检测心肌组织中UCP2 mRNA表达.结果 光镜下观察,假手术组心肌纤维排列整齐,结构清楚,细胞核染色清晰,心肌间质未见炎性细胞浸润;IRI模型组大鼠心肌纤维紊乱,界线不清,胞浆淡染,核有浓缩或溶解,大量炎性细胞浸润,充血淤血,心肌纤维横纹消失,心肌组织灶性坏死;WSC干预组肌纤维偶有断裂、融解现象,少量心肌细胞颗粒变性、水肿,偶见炎性细胞浸润.与假手术组相比,IRI模型组SOD水平明显下降,而MDA水平和心肌组织中UCP2 mRNA表达均明显升高(P＜0.01);与IRI模型组比较,低剂量WSC组、中剂量WSC组和高剂量WSC组SOD水平显著提高,MDA水平和心肌组织中UCP2 mRNA表达降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 WSC可逆转心肌IRI,对IRI大鼠心肌具有保护作用.这种作用可能与对抗IRI时氧化应激反应有关.
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解偶联蛋白2对高糖诱导心肌线粒体损伤与细胞凋亡的调节作用
目的 观察解偶联蛋白2(UCP2)在高糖干预下的心肌细胞中的表达水平,以及对线粒体功能与细胞凋亡的影响.方法 将同期培养的AC16人心肌细胞按随机数方法随机分为正常糖对照组、高糖组、高糖+ UCP2 siRNA组、高糖+阴性对照siRNA组,分别测定各组细胞中UCP2表达水平、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、三磷酸腺苷(ATP)含量、细胞内活性氧水平、细胞凋亡率、caspase-3活性与细胞活力的变化.结果 高糖干预使心肌细胞活性氧生成增多、SDH活性下降与ATP生成减少,并引起细胞凋亡增加、casapse-3活性增强、细胞活力减弱,同时UCP2表达水平升高;抑制心肌细胞内UCP2表达则使高糖诱导的心肌细胞内活性氧生成(37.96±1.08比27.68±0.60,P＜0.05)进一步增多,细胞凋亡[(25.68±0.78)％比(17.80±0.99)％,P＜0.05]、caspase-3活化[(2.71±0.13)％比(2.14±0.28)％,P＜0.05]及细胞失活(0.74±0.04比0.62±0.03,P＜0.05)进一步加剧,而对SDH活性、ATP生成无明显影响.结论 高糖诱导下的心肌细胞内UCP2表达上调可能是对线粒体损伤的反馈性保护机制,UCP2可能抑制高糖诱导的心肌细胞凋亡.
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线粒体损伤与糖尿病发病的相关机制
线粒体是机体代谢和能量合成的重要场所,其功能损伤与糖尿病的发病有密切联系.线粒体跨膜电位超极化、解耦联蛋白2表达异常、线粒体自噬障碍引起线粒体功能或结构受损,导致活性氧簇的产生过多,加重胰岛素抵抗.线粒体自身甲状腺激素受体活性对胰腺转录因子的表达也有调节作用,间接影响胰岛素的分泌水平.同时,线粒体基因不同位点的变异与糖尿病发病易感性相关.了解线粒体损伤与糖尿病发病的相关机制将为糖尿病的治疗提供新的思路.
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碘缺乏大鼠肾脏解耦联蛋白2与骨形态发生蛋白2的表达
目的 通过测定碘缺乏大鼠肾脏解耦联蛋白(UCP)2、骨形态发生蛋白(BMP)2的表达,探讨其表达的改变与分布.方法 实验前适应性喂养1周,应用随机数字表法将雌性Wistar大鼠分为3组:轻度低碘组(MIDG组)和重度低碘组(SIDG组),并设适碘组为正常对照组(CL组)(日总碘摄入量分别为5.00,1.24,10.00μg/d),每组10只,通过免疫组化等方法观察实验大鼠离体肾脏UCP2、BMP2的表达,并对结果进行相关统计学分析.结果 与CL组相比,MIDG组血游离T3、总T3、总T4水平下降(t=2.54,1.81,4.41,P＜0.05),仅血游离T4下降不明显,差异无统计学意义.SIDG组血游离T3、游离T4、总T3、总T4水平均明显下降(=6.68,20.25,5.38,21.56,P＜0.01),与MIDG组相比,SIDG血激素水平下降更明显(t=3.19,15.45,6.93,13.48,P＜0.05).免疫组化显示,UCP2与BMP2少量表达于肾小球,主要表达于肾皮质远端肾小管.与CL组相比,MIDG组和SIDG组UCP2、BMP2表达量明显减少(t=5.72,8.79,8.74,18.63,P＜0.01),与MIDG组相比,SIDG组下降更明显(t=7.43,11.77,P＜0.01).同时相关性分析显示这种下降趋势与血游离T4水平呈明显正相关(r=0.81,0.82).结论 碘缺乏可以导致甲状腺功能减退症(甲减),甲减大鼠肾脏UCP2、BMP2表达降低.
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黄芪多糖对实验性2型糖尿病大鼠肝脏组织中解耦联蛋白2表达的影响
目的 研究高脂加STZ诱导的糖尿病大鼠肝脏组织中解耦联蛋白2(UCP2)表达变化,并探讨黄芪多糖(APS)对糖尿病治疗作用及可能机制.方法 将雄性SPF级SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、正常+APS对照组(B组)、糖尿病组(C组)及APS治疗组(D组),每组8只,饲养期间定期检测动物血糖(BG、FBG)、口服葡萄糖耐量(OGTT)、血胰岛素(FINS),计算胰岛素敏感指数(ISI).于APS治疗第8周末,取各组动物的肝脏组织冻存,以Western blotting检测UCP2的表达.结果 C组出现高血糖、糖耐量降低等2型糖尿病特征,经APS治疗8周后,D组各项实验指标均有显著改变,并且肝脏组织中UCP2表达水平较C组明显上升(P<0.01).结论 APS能够降低血糖,改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗,其作用机制可能与APS增加肝脏组织中UCP2表达有关.
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沉默1,25-二羟维生素D3受体基因对高糖诱导的肾小管上皮细胞解偶联蛋白2表达及氧化应激的影响
目的:观察1,25-二羟维生素D3(1,25-dihydroxyvitaminD3,1,25-(OH) 2VitD3)及其受体(vitamin D receptor,VDR)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)解偶联蛋白2(UCP2)表达及氧化应激的影响,探讨1,25-(OH)2 VitD3在糖尿病肾病(DN)进展中的作用.方法:利用RNAi技术构建基因干扰表达载体质粒pGIPZ-VDR,脂质体介导质粒转染HK-2细胞,构建稳定转染细胞系.细胞分组:未转染低糖对照组(NG组,5.5 mmol/L D-葡萄糖)、稳转低糖控制组(CG组,5.5 mmol/L D-葡萄糖)、未转染高糖诱导组(HG组,30 mmol/L D-葡萄糖)、稳转高糖诱导组(THG组,30 mmol/L D-葡萄糖)、未转染高糖+ VitD3处理组(VG组,30 mmol/L D-葡萄糖+10-7 mol/LVitD3)、稳转高糖+VitD3处理组(TVG组,30 mmol/L D-葡萄糖+10-7 mol/LVitD3)、稳转高渗对照组(MG组,5.5 mmol/L D-葡萄糖+24.5 mmol/L D-甘露醇)、稳转无永乙醇溶剂对照组(SG组,30 mmol/L D-葡萄糖+6.86×10-2 mmol/L无水乙醇).实时荧光定量PCR及Western blot 法检测HK-2细胞中VDR及UCP2的mRNA和蛋白表达;比色法检测胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和丙二醛(MDA)水平.结果:(1)稳转细胞中VDR mRNA和蛋白表达显著低于转染空载质粒组(P＜0.01);(2)与CG组比较,HG组、THG组、TVG组中T-SOD活力均降低(P＜0.05)而MDA水平均显著升高(P＜0.05),但此三组之间比较T-SOD活力及MDA水平差异无统计学意义(P＞0.05);与THG组比较,VG组T-SOD活力显著升高(P＜0.05),MDA水平显著下降(P＜0.05);(3)与NG组比较,CG组UCP2 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);与CG组比较,HG组和THG组UCP2mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.05),但此二组之间差异无统计学意义;与THG组比较,VG组UCP2mRNA和蛋白表达显著下降(P＜0.05),而TVG组UCP2mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:沉默VDR基因并不影响高糖诱导HK-2细胞时胞内UCP2高表达以及氧化应激水平增高;1,25-(OH) 2VitD3可能通过VDR介导的途径来调节细胞内UCP2的表达并抑制高糖诱导下的氧化应激反应.
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解耦联蛋白2在不同年龄大鼠脾、胸腺中的分布与表达
目的 探讨解耦联蛋白2(UCP2)在老年大鼠免疫器官中的表达.方法 健康雄性SD大鼠30只,按年龄分为幼年组、成年组和老年组,实验室适应性喂养7d后断头处死,分别取各组大鼠脾、胸腺组织测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH);测定脾、胸腺指数;通过免疫组织化学观察脾、胸腺组织中UCP2蛋白的表达与分布.结果 ①老年组大鼠脾、胸腺组织中MDA含量显著高于幼年组和成年组(P＜0.01).②GSH含量在老年组大鼠脾组织中显著低于幼年组和成年组(P＜0.01),在老年组大鼠胸腺组织中显著低于幼年组(P＜0.01).③老年组大鼠胸腺指数、脾指数均低于幼年组和成年组.④UCP2蛋白在老年组大鼠脾、胸腺实质细胞内表达较多,在幼年组、成年组大鼠脾、胸腺实质内表达较少(几乎无表达).结论 老年大鼠脾、胸腺MDA含量升高,GSH含量下降,提示老年大鼠脾、胸腺内活性氧(ROS)水平较高,并引起UCP2表达增多,UCP2可能对延缓脾、胸腺细胞的衰老和增强免疫功能起重要作用.
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UCP2启动子-866G/A与APOEε 4多态性在糖尿病肾病发生中的协同效应
目的:探讨解耦联蛋白2基因(UCP2)启动子变异-866G/A及载脂蛋白E与北京人群糖尿病肾病(DN)的发生关联和协同效应.方法:基于聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对228例DN患者,243例非DN的2型糖尿病患者及78例正常对照进行基因分型,同时进行体格检查和生化指标测定,数据处理使用SPSS(version16.0)完成,用Hardy-Weinberg平衡检验评价人群代表性,按照加性模型分析基因型的整体分布规律,隐性模型和显性模型分析风险等位基因与疾病的关联,通过Logistic回归分析基因变异间的交互作用,分层分析评估其相互作用对DN的贡献.结果:加性模型分析提示UCP2基因-866G/A在DN组和DM组间的分布差异达到统计学显著性(P＜0.001),进一步通过显性模型发现-866A同DN存在正关联,调整年龄和性别混杂后,正关联仍然存在(OR=1.814,95％CI:1.148-2.867).UCP2×APOE交互项和DN存在独立于年龄、性别、体质指数、血糖、甘油三酯等血脂指标的正关联,二者存在效应的协同作用.分层分析表明UCP2基因-866A是独立APOEε4的DN的危险因素,且APOEε4对UCP2基因-866A存在异位显性(epistasis)关系.结论:UCP2基因启动子-866A等位基因和APOEε4等位基因是北京汉族人群DN的风险等位基因,APOEε4存在异位显性,二者效应存在叠加.
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急性肝损伤小鼠中线粒体解耦联蛋白2的表达变化及意义
目的:观察C57小鼠急性肝损伤(acute liver injury,ALI)中解偶联蛋白2(Uncouple Protein2,UCP2)的表达,探讨ALI与UCP2表达变化的意义.方法:领取36只小鼠,随机分为对照组、ALI 1 d组、ALI4d组、ALI 7 d组.分别检测血清谷氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的变化;肝组织病理变化用HE染色观察;利用Western Blot方法分别检测全肝组织蛋白和肝细胞线粒体提纯蛋白中的UCP2蛋白水平的变化;Real Time quality PCR检测UCP2在mRNA水平的表达变化.结果:ALI组1d、4d组与对照组相比,ALT(160.69± 22.11 vs 34.43± 5.19;96.37± 15.39 vs 34.43± 5.19)、AST(306.54± 68.09 vs 97.74± 14.49;173.94±26.74 vs 97.74± 14.49)表达差异具有统计学意义(P＜0.05);肝组织病理学检查ALI组1d和4d组中肝细胞出现大面积坏死,7d组肝细胞坏死缓解;蛋白水平检测UCP2在ALI 1 d和4d时全肝组织分别增加2.84倍和2.25倍,在肝线粒体中1d、4d和7d时分别增加2.19倍、1.68倍和1.56倍,差异具有统计学意义(P＜0.05);mRNA水平检测UCP2在ALI1 d和4d与对照组相比明显升高,相对增加3.79倍和1.46倍(P＜0.05).结论:急性肝损伤状态下UCP2在蛋白和mRNA水平高表达,UCP2可能对于治疗急性肝损伤具有重要意义.
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构建psiCHECK-2-解耦联蛋白2双荧光素酶报告基因及其荧光素酶活性的分析
目的:构建含解耦联蛋白2(UCP2)-3’非翻译区(UTR)序列的野生型和突变型质粒的双荧光素酶报告基因载体,探讨微小RNA(miR)-15b对UCP2基因表达的调控作用.方法:应用生物信息软件预测miR-15b的靶基因,分别将预测靶基因UCP2的3'UTR及其突变体克隆到荧光素酶载体psiCHECK-2骨架中,构建UCP2野生型和突变型质粒.并采用测序方法鉴定psiCHECK-2-UCP2载体是否构建成功.将UCP2野生型和突变型质粒分别与miR-15b模拟物、miR-15b模拟物正常对照、miR-15b抑制剂、miR-15b抑制剂正常对照在293T细胞中共转染.通过双荧光素酶报告基因检测分析miR-15b对UCP2基因表达的调控作用.结果:测序鉴定证实psiCHECK-2-UCP2双荧光素酶报告基因载体构建成功.双荧光素酶报告基因检测显示转染UCP2野生型和UCP2突变型报告基因的293T细胞过表达miR-15b后,UCP2野生型报告基因的荧光素酶活性明显下降,下调31％(P=-0.003),过表达miR-15b抑制剂后,UCP2野生型报告基因的荧光素酶活性明显增加,上调46％(P=0.01).而miR-15b模拟物、miR-15b模拟物正常对照、miR-15b抑制剂、miR-15b抑制剂正常对照对UCP2突变型的表达均无明显影响(P＞0.05).结论:UCP2是miR-15b直接作用的靶基因,且miR-15b结合于UCP2基因3'UTR区域,转录后水平对UCP2有直接的抑制作用.
