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沉默1,25-二羟维生素D3受体基因对高糖诱导的肾小管上皮细胞解偶联蛋白2表达及氧化应激的影响
目的:观察1,25-二羟维生素D3(1,25-dihydroxyvitaminD3,1,25-(OH) 2VitD3)及其受体(vitamin D receptor,VDR)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)解偶联蛋白2(UCP2)表达及氧化应激的影响,探讨1,25-(OH)2 VitD3在糖尿病肾病(DN)进展中的作用.方法:利用RNAi技术构建基因干扰表达载体质粒pGIPZ-VDR,脂质体介导质粒转染HK-2细胞,构建稳定转染细胞系.细胞分组:未转染低糖对照组(NG组,5.5 mmol/L D-葡萄糖)、稳转低糖控制组(CG组,5.5 mmol/L D-葡萄糖)、未转染高糖诱导组(HG组,30 mmol/L D-葡萄糖)、稳转高糖诱导组(THG组,30 mmol/L D-葡萄糖)、未转染高糖+ VitD3处理组(VG组,30 mmol/L D-葡萄糖+10-7 mol/LVitD3)、稳转高糖+VitD3处理组(TVG组,30 mmol/L D-葡萄糖+10-7 mol/LVitD3)、稳转高渗对照组(MG组,5.5 mmol/L D-葡萄糖+24.5 mmol/L D-甘露醇)、稳转无永乙醇溶剂对照组(SG组,30 mmol/L D-葡萄糖+6.86×10-2 mmol/L无水乙醇).实时荧光定量PCR及Western blot 法检测HK-2细胞中VDR及UCP2的mRNA和蛋白表达;比色法检测胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和丙二醛(MDA)水平.结果:(1)稳转细胞中VDR mRNA和蛋白表达显著低于转染空载质粒组(P＜0.01);(2)与CG组比较,HG组、THG组、TVG组中T-SOD活力均降低(P＜0.05)而MDA水平均显著升高(P＜0.05),但此三组之间比较T-SOD活力及MDA水平差异无统计学意义(P＞0.05);与THG组比较,VG组T-SOD活力显著升高(P＜0.05),MDA水平显著下降(P＜0.05);(3)与NG组比较,CG组UCP2 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);与CG组比较,HG组和THG组UCP2mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.05),但此二组之间差异无统计学意义;与THG组比较,VG组UCP2mRNA和蛋白表达显著下降(P＜0.05),而TVG组UCP2mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:沉默VDR基因并不影响高糖诱导HK-2细胞时胞内UCP2高表达以及氧化应激水平增高;1,25-(OH) 2VitD3可能通过VDR介导的途径来调节细胞内UCP2的表达并抑制高糖诱导下的氧化应激反应.
