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Cdc20基因突变对 APCmin／＋小鼠胚胎成纤维细胞生长的影响
目的：观察Cdc20AAA/＋APCmin/＋基因型小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）的生物学性状，探讨Cdc20基因突变对MEFs生长的影响及机制。方法制作Cdc20AAA/＋APCmin/＋基因型、Cdc20AAA/＋基因型、APCmin/＋基因型和野生型（ WT）小鼠胚胎成纤维细胞，绘制生长曲线、进行平板克隆形成实验，比较各种基因型MEFs生长特性的改变。各种基因型MEFs核型分析染色体个数，并检测有丝分裂姐妹染色单体分离情况及是否存在染色体不稳定。结果Cdc20AAA/＋APCmin/＋基因型MEFs生长速度快于APCmin/＋基因型（P＜0.01）。 Cdc20AAA/＋APCmin/＋基因型MEFs克隆形成能力明显增强。 Cdc20AAA/＋APCmin/＋MEFs 中可见姐妹染色单体的提前分离，且染色体数目异常要多于APCmin/＋MEFs，大多数为38对。结论 Cdc20AAA/＋基因突变促进APCmin/＋小鼠胚胎成纤维细胞生长及增殖，使其呈现肿瘤细胞的生长特性，其机制可能与染色体不稳定有关。
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三氧化二砷对急性髓系白血病细胞HL-60Cdc20及Mad2的影响
目的:探讨三氧化二砷(As2 O3)对急性髓系白血病细胞HL-60增殖过程中Cdc20及Mad2的影响.方法:不同浓度As2O3处理HL-60细胞24、48、72 h后CCK-8法检测细胞增殖情况;Real-Time PCR及Western blot技术检测不同浓度As2O3作用于HL60细胞48 h后Mad2和Cdc20 mRNA及蛋白表达情况.结果:As2O3能显著抑制HL-60细胞增殖,并具有良好的时间剂量相关性.RT-PCR和Westem blot检测结果表明,As2O3 4、8、10 μmol/L作用于HL-60细胞后,Mad2表达上调,Cdc20表达下降(P＜0.05).结论:As2O3对人急性髓系白血病HL60细胞增殖具有较明显的抑制作用,其机制可能与上调Mad2表达和下调Cdc20表达有关.
关键词： 三氧化二砷 HL-60 有丝分裂纺锤体检验点 Mad2 Cdc20 -
培美曲塞对PC9肺腺癌细胞株的放射增敏作用
目的 培美曲塞是治疗非鳞癌非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的常用药物,其对表皮生长因子受体(pithelial growth factor receptor,EGFR)敏感突变的肺腺癌是否具有放射增敏作用尚未明确.本课题研究培美曲塞在体外对EGFR 19外显子突变的人肺腺癌细胞株PC9的放射增敏作用,并初步探讨其作用机制.方法 以PC9细胞作为研究对象,采用MTT法检测培美曲塞的20%抑制浓度(20% inhibition concentration,IC20),将PC9细胞分为对照组、单独照射组、培美曲塞单药组和培美曲塞+照射组4组;采用流式细胞术检测培美曲塞联合或不联合照射对PC9细胞的凋亡率及细胞周期的影响;克隆形成实验检测培美曲塞对PC9细胞的放射效应,计算存活分数,拟合存活曲线;蛋白质印迹法检测CDC20蛋白在各组的表达.结果 MTT结果显示,PC9细胞的增殖抑制与培美曲塞呈时间-剂量依赖性,取48 h的IC20(0.084 μmol/L)的培美曲塞作为实验浓度.流式细胞术结果显示,培美曲塞单药组和单独照射组均可增加凋亡率,分别为(7.17±1.14)%和(10.78±1.52)%,而培美曲塞+照射组具有协同增效作用,凋亡率达(29.23±1.33)%,F=227.57,P<0.001;细胞周期结果显示,对照组G2/M期比例为(0.79±0.63)%,培美曲塞单药组为(0.79±0.47)%,单独照射组为(18.21±0.72)%,培美曲塞+照射组为(25.09±1.04)%,提示培美曲塞使细胞阻滞在S期,与放射线联合作用后,S期细胞比例减少,G2/M期的比例明显增多,差异有统计学意义,F=276.85,P<0.001.克隆形成实验提示,培美曲塞具有较好的放射增敏作用,其放射增敏比(sensitization enhancement ratio,SER)为1.41.培美曲塞联合照射能增加细胞周期相关蛋白CDC20的表达,F=282.12,P<0.001.结论 培美曲塞可提高EGFR 19外显子突变的PC9肺腺癌细胞的放射敏感性,其机制可能与照射引起CDC20的增加致对放射敏感的G2/M期阻滞,而照射耐受的S期比例减少有关.
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Cdc20基因突变促进APCmin/+小鼠结肠癌的发展
目的 运用Cdc20loxp/+APCmin/+ villin-cre+/-基因突变小鼠,研究Cdc20基因突变在APCmin/+小鼠结肠癌发生和发展中的作用.方法 通过小鼠杂交得到Cdc20lloxp/+APCmin/+ villin-cre+/-基因突变小鼠和APCmin/+基因突变小鼠,通过表型分析及组织学分析,比较两组小鼠肠道肿瘤的差异.结果 Cdc20loxp/+APCmin/+ villin-cre+/-和APCmin/+基因突变小鼠肠道肿瘤数分别为(1.2±0.5)、(1.6±0.5)个,差异无统计学意义(t=0.215,P=0.588);肿瘤大径分别为(2.7±0.3)、(2.5±0.2) cm,差异无统计学意义(f=0.568,P=0.575).Cdc20loxp/+APCmin/+villin-cre+/-小鼠肠道肿瘤为腺癌,APCmin/+小鼠肠道肿瘤为管状腺瘤.结论 Cdc20基因突变可加快APCmin/+小鼠肠道肿瘤恶变,促进肠道肿瘤发展,但不影响肿瘤数目和大小.
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PLK1与CDC20在乳腺癌中的表达及其临床意义
目的 探讨PLK1和CDC20在乳腺癌组织中的表达情况,并分析两者表达与临床病理特征及预后的关系.方法 基于cBioPortal数据库和癌症基因图谱(TCGA)数据库中1092例乳腺癌患者的临床资料和mRNA芯片数据,分析PLK1和CDC20的表达情况.采用Kaplan-Meier法和Cox风险比例回归模型分析PLK1和CDC20的表达水平与乳腺癌患者预后的关系.采用卡方检验分析PLK1和CDC20的表达与患者年龄、性别及ER、PR、HER-2基因表达之间的关系.结果 PLK1与CDC20在乳腺癌中的表达呈正相关(r=0.88,P＜0.001),并且两者表达均与乳腺癌患者的无病生存期(DFS)有关(P均＜0.05),PLK1与CDC20同时高表达与同时低表达的患者相比,DFS显著缩短(P=0.007).同时PLK1和CDC20在ER、PR阴性患者肿瘤组织中的表达水平均显著高于ER、PR阳性患者(P均＜0.001).结论 PLK1和CDC20在乳腺癌中可能起到促进肿瘤转移的作用,可以作为预测肿瘤转移的潜在生物标志物及个体化治疗靶点.
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CDC20、TOP2A、NEK2在食管鳞癌中的表达及其与临床病理特征及预后的相关性
目的 探讨CDC20、TOP2A、NEK2在食管鳞癌中表达及其与食管鳞癌临床病理特征及预后的相关性.方法 选取实施根治性手术的食管鳞癌患者70例,均术中做病理取材标本,A组(癌组织)、B组(癌旁组织)、C组(正常组织),采用免疫组化法、半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CDC20、TOP2A、NEK2表达情况.结果 A组CDC20、TOP2A、NEK2表达水平高,与B、C组差异明显(P＜0.05);B组CDC20、TOP2A、NEK2表达水平高于C组,差异明显(P＜0.05).食管鳞癌患者性别、年龄、瘤体大小、位置等因素与CDC20、TOP2A、NEK2表达无相关性(P＞0.05);TNM分期、淋巴转移及浸润因素与CDC20、TOP2A、NEK2呈正相关性(P＜0.05);肿瘤分化与CDC20、TOP2A、NEK2阳性表达率呈负相关.TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴转移、静脉浸润及CDC20、TOP2A、NEK2阳性表达均是影响食管鳞癌患者预后存活的危险因素.结论 CDC20、TOP2A、NEK2高表达与食管鳞癌转移、复发、预后均有密切相关,三项指标联检可准确评估食管癌病理状态,为患者预后判定提供参考.
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RNA干扰对肝癌细胞CDC20表达的影响
目的 观察RNA干扰(RNAi)对肝癌细胞株Hepal-6中CDC20表达的抑制作用.方法 设计针对小鼠肝癌细胞Hepal-6 CDC20 mRNA的小干扰RNA(siRNA),以阳离子脂质体包埋后转染鼠肝癌细胞Hepal-6,转染48 h后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法 检测Hepal-6细胞CDC20 mRNA及蛋白质表达的变化.结果 siRNA各组与正常对照组和阴性对照组比较,CDC20 mRNA的表达均受明显抑制,并呈剂量依赖性(在100、50、25 nmol/L浓度下,Mixed siRNA组与正常对照组mRNA表达比较:0.370±0.058比0.840±0.044,0.480±0.081比0.900±0.068,0.830±0.062比1.010±0.054,各组P＜0.01);CDC20蛋白质的表达亦均受抑制(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及Mixed组与N-Cont或Blank组蛋白质表达比较:0.482±0.035/0.402±0.003/0.479±0.026/0.446±0.017比0.826±0.03l或0.835±0.024,各组P均＜0.01).结论 CDC20 siRNA可显著抑制小鼠肝癌细胞Hepal-6中CDC20 mRNA和蛋白质的表达.
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葡萄籽提取物对人骨肉瘤U2OS细胞抑制作用及机制的研究
目的：探讨葡萄籽提取物（GSE）对人骨肉瘤U2OS细胞的抑制作用及其作用机制。方法选用不同浓度的GSE作用于骨肉瘤U2OS细胞，MTT法检测其生长抑制作用；流式细胞仪检测细胞凋亡率；Transwell迁移实验检测细胞迁移能力；实时RT-PCR和Westernblot检测CDC20mRNA和蛋白的表达水平。结果MTT结果显示GSE对人骨肉瘤U2OS细胞的生长抑制作用呈浓度依赖性；流式细胞术显示GSE具有诱导U2OS细胞凋亡的作用；Transwell实验显示GSE可以抑制U2OS细胞的迁移作用；RT-PCR和Westernblot结果显示GSE可以下调CDC20mRNA和蛋白的表达水平。结论GSE具有抑制骨肉瘤U2OS细胞生长及迁移、诱导细胞凋亡的作用。GSE对骨肉瘤细胞的抑制作用可能与下调CDC20表达有关。
关键词： 葡萄籽提取物 人骨肉瘤U2OS细胞 Cdc20 -
RNA联合干扰对肝癌细胞CDC20和HPSE表达的影响
目的 探讨RNA联合干扰(RNAico)对肝癌细胞株Hepa1-6中丝裂原调控子20(CDC20)和乙酰肝素酶(HPSE)表达的抑制作用.方法 设计针对小鼠肝癌细胞Hepa1-6 CDC20和HPSE mRNA的小干扰RNA,以阳离子脂质体包埋后转染鼠肝癌细胞Hepa1-6,即RNAico;转染48 h后,采用RT-PCR和Re-a1-Time PCR测定CDC20、HPSE mRNA表达的变化.结果 联合干扰组CDC20和HPSE mRNA表达明显抑制,与其他各组相比,在统计学上有显著性差异(P＜0.05).结论 RNAico可同时显著抑制小鼠肝癌细胞Hepa1-6中CDC20和HPSE mRNA的表达.
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丝裂原调控子CDC20在EGR1基因敲出鼠模型中诱导表达的研究
目的确认肝再生过程中参与调控肝细胞有丝分裂的EGR1靶向基因CDC20, 并对其作用进行评价.方法通过cDNA微阵列分析,比较切肝后48 h野生鼠和EGR1基因敲出鼠的肝组织基因表达.使用RT-PCR法测定再生肝组织中野生鼠和EGR1基因敲出鼠的CDC20基因表达谱,并将其切肝后48h的结果与同一时间点的EGR1蛋白质表达水平进行比较.结果切肝后前12h肝组织CDC20基因的表达水平无变化,但于36h开始上升并于48h达到顶峰,这个表达曲线恰好与肝再生过程中EGR1蛋白质的表达特点一致.此外,与EGR1基因敲出鼠相比,野生鼠切肝后48h的CDC20基因表达水平明显升高(P<0.02).结论 EGR1基因敲出鼠的肝细胞有丝分裂进程受损与肝再生过程中CDC20基因表达水平降低有关;提示:受EGR1调控的CDC20基因的表达在肝再生过程中肝细胞有丝分裂进程中起重要作用.
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细胞周期类分子在人无精子症睾丸中的表达
目的:评价细胞周期类基因在人无精子症及正常睾丸组织中的表达及意义.方法:应用包含有人CDC10等细胞周期类基因在内的cDNA微矩阵芯片对人正常睾丸及无精子症睾丸组织中差异表达基因进行了研究:通过PCR方法获得两种组织mRNA, 再分别用Cy5-dUTP及Cy3-dUTP标记制备cDNA探针.两种探针混合后与人cDNA微矩阵芯片杂交, 经扫描、计算机处理分析比较杂交结果;利用原位杂交技术对芯片杂交结果进行了验证研究.结果:部分细胞周期类基因可能与无精子症相关, 其中CDC7L1 与CDC10基因表达上调, CDK9、 CDC20 以及CLK3基因表达下调.原位杂交证实CDC10在正常睾丸组织生精细胞中表达强于无精子症睾丸组织.结论:细胞周期类分子CDC10、 CDC7L1 、 CDK9、 CDC20及CLK3可能在无精子症的发生与进展过程中起一定的作用.
