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EB病毒早期基因BHRF1-Bcl-2的病毒性同源基因
BHRF1是近年来得到确认的EBV新的致癌基因,在结构上和功能上与细胞原癌基因Bcl-2相似,属Bcl-2家族成员.由于其抑制细胞凋亡和细胞转化作用而受到广泛关注,本文就BHRF1的作用特点、与bcl-2的关系以及应用前景作一综述.
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人乳头瘤病毒E7蛋白生物活性研究进展
人乳头瘤病毒(HPV)是一种小分子DNA病毒,其早期基因E7编码具有多种生物活性的E7蛋白.E7蛋白与腺病毒EIA及多瘤病毒SV40蛋白有相似的结构,可与pRB、P53反应,改变宿主细胞G1/S期的转化.E7蛋白还能同多种细胞因子发生反应,影响宿主细胞代谢,直接导致宿主细胞中心体的变化.E7蛋白在HPV的致病性方面发挥重要作用.
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人乳头瘤病毒诱导肿瘤发生的研究进展
人乳头瘤病毒可导致多种疾病,且发现它的感染与多种恶性肿瘤发生密切相关,其早期基因E5,E6,E7在其致瘤过程中发挥关键作用.研究E5,E6,E7的结构和功能有助于揭开人乳头瘤病毒的致病机制,为控制该病毒所致的疾病提供依据.
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真菌菌丝体提取物抑制人巨细胞病毒基因转录水平的研究
目的 研究真菌菌丝体提取物对人巨细胞病毒基因转录的抑制作用,探讨其抗HCMV效果及其机制. 方法 建立抗HCMV细胞模型,用半定量PCR检测细胞感染后不同时间UL122、UL123、UL44、UL57、UL86 mRNA表达量的变化. 结果 UL122、UL123 mRNA的表达高峰为HCMV感染细胞后24 h,UL44、UL57 mRNA的表达高峰为感染后96 h,UL86 mRNA的表达高峰为感染后120 h.真菌菌丝体提取物与HCMV作用后接种细胞及HCMV接种细胞后加入真菌菌丝体提取物24h检测UL122、UL123 mRNA的表达量均显著降低.而病毒完成穿入过程后加入50 μg/ml真菌菌丝体提取物与加入5μg/ml组相比UL122、UL123 mRNA表达量更少.HCMV进入细胞6h后加入真菌菌丝体提取物再培养96 h,UL44、UL57 mRNA的表达量无显著变化.HCMV进入细胞24 h后加入真菌菌丝体提取物再培养120 h,UL86 mRNA的表达表达量无显著变化. 结论 真菌菌丝体提取物可显著抑制HCMV AD169毒株IE基因(UL122、UL123)的转录,导致其mRNA表达显著降低,且抑制作用存在量效关系;但对E基因(UL44、UL57)和L基因(UL86)转录水平抑制作用不明显,表明真菌菌丝体提取物抗HCMV的重要作用机制是通过抑制HCMV IE基因的转录和翻译,进而抑制病毒的复制增殖.
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E4orf4蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究与应用
腺病毒早期基因编码产物在病毒感染宿主细胞后,广泛参与对宿主细胞周期的调控,以利于病毒自身的复制及释放.
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EB病毒相关胃癌细胞凋亡与Bcl-2的表达
目的:探讨EBV相关胃癌(EBV associated gastric carcinoma,EBVaGC)病毒基因表达、Bcl-2蛋白表达与细胞凋亡的相互关系,明确其在EBVaGC发生发展中的作用.方法:选取EBVaGC和相应癌旁组织13例,与之匹配的EBVnGC 45例,采用TUNEL法及免疫组化技术检测其细胞凋亡指数(AI)和bcl-2蛋白的表达;RT-PCR-Southern杂交技术检测EBV相关基因表达.结果:EBVaGC、EBVnGC及EBVaGC癌旁组织中AI分别为0.97±0.4l,2.03±0.60和3.25±0.46,统计学分析表明:EBVaGC和EBVnGC以及EBVaGC癌组织和相应癌旁组织细胞凋亡指数均有显著性差异(t=5.9795,P=0;f=13.2 229,P=0).EBVaGC组和EBVnGC组Bcl-2阳性率分别为53.8%和48.9%,两组间无显著性差异(x2=0.0991,P=0.7 529).EBVaGC 13例EBNAl mRNA均阳性,而EBNA2和LMPlmRNA均阴性;EBV早期基因BARFl表达阳性6例,BHRFl表达阳性2例.结论:EBVaGC癌组织Bcl-2表达与EBV感染无明显相关性,EBV感染抑制细胞凋亡不是上调Bcl-2表达而实现,EBV早期基因BARFl和BHRFl可通过抑制细胞凋亡和细胞转化作用参与EBVaGC的发生.
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宫颈癌及宫颈癌前病变组织HPV16/18E6E7基因突变分析
人乳头瘤病毒16/18型(human papillomavirustype 16/18,HPV16/18)感染与宫颈癌发病密切相关,病毒的癌基因为病毒早期基因E6/E7.研究表明E6/E7基因的存在和表达对保持转化细胞以及癌细胞的表现型起决定性作用[1-5].分子病毒学研究表明宫颈癌组织中肿瘤病毒基因存在变异,此种变异具有地域和种系发生的特点[6].
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c-fos、c-myc蛋白产物在糖尿病足患者血管平滑肌组织的表达
糖尿病足部出现溃疡或组织坏死时,90%以上存在血管病变[1].早期基因c-myc和直接早期癌基因c-fos都是编码核蛋白的癌基因,它们的产物具有转录调节作用[2].我们应用免疫组织化学方法对9例糖尿病足患者血管平滑肌及6例正常血管平滑肌组织中c-fos、c-myc蛋白表达进行检测,探讨其在糖尿病足发生、发展中的作用.
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肝再生机制研究现况
肝再生是指肝脏损伤时剩余肝组织的代偿性增生,使肝脏恢复原有体积,以满足机体的正常代谢。肝再生包括肝实质细胞的再生和肝组织结构的重新构建,其中肝细胞的再生为主要。肝再生是一个多基因、多信号通路参与和多步骤协同的复杂过程,主要通过肝损伤的动物模型进行研究,其中肝部分切除模型具代表性。肝部分切除后,大量在静息肝组织中休眠状态的早期基因被转录因子激活。这些大量基因的激活可导致 DNA 合成,细胞复制,细胞体积增大,同时也使肝脏在再生过程中保持其基本代谢功能。肝再生过程包括3个阶段:启动,增殖和终止,涉及大量的细胞因子,有些调控肝再生的启动,有些可以促进肝脏的再生,有些则可以适时终止肝脏的再生过程,从而调控再生肝脏的大小。
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结直肠癌缺陷基因201密码子点突变与大肠癌生物学特性研究
目的探讨结直肠癌缺陷(deleted in colorectal carcinoma, DCC)基因201密码子(codon 201)点突变与大肠癌生物学特性的关系.方法采用等位基因特异性(allele-specific)PCR扩增技术结合限制性片段长度多肽性(restricted fragment lenght polymorphism, RFLP)检测40例正常人大肠粘膜、35例大肠癌组织及相应癌旁正常粘膜的201密码子突变情况.结果大肠癌组织及癌旁正常粘膜201密码子突变率分别为71%(25/35)和60%(21/35),两者差异无显著意义.但与正常对照组33%(13/40)相比,显著增高(χ2=5.6963,P<0.025).伴淋巴结转移组和Ducks C、D群明显高于无淋巴结转移组和Dukes A、B期,而与患者性别、年龄、癌的分级、分型等因素无关.结论 DCC基因201密码子突变是大肠癌发生中的早期基因事件,且与其转移能力的加强密切相关.
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Dicer干预对HPV18 E6/E7基因表达的影响
目的:探讨Dicer干预对高危型HPV18 E6、E7基因表达的影响.方法:设计并合成三条Dicer 基因的siRNA,采用定量PCR分析siRNA在不同浓度(40 nmol/L、60 nmol/L及80 nmol/L)、不同时间(24 h、48 h及72 h)干预效果的基础上,通过定量PCR分析Dicer被干预后对HPV18 E6、E7及miR-16基因表达的影响.结果:本研究建立的定量PCR能特异地检测Dicer、HPV18 E6、E7及miR-16基因的表达.设计的三种siRNA均明显下调Dicer基因表达,40 nmol/L的siRNA干预24 h即可获得明显效果.在此基础上分析对miR-16及高危型HPV18 E6、E7表达的影响,结果显示,40 nmol/L的Dicer siRNA干预可明显下调HPV18 E6、E7及miR-16基因表达(P<0.05).生物信息学分析提示,HPV18 E6、E7基因编码区存在miR-16的结合位点.结论:Dicer siRNA干预能明显下调高危型HPV18E6、E7基因表达,miR-16可能参与HPV18E6、E7基因表达调控.
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5-ALA-P DT 法在 HP V11. HaCaT 细胞模型中的应用
目的::确定光动力疗法(5-ALA-PDT)对携带 HPV11全基因组的 HaCaT 细胞( HPV11. HaCaT)模型的影响。方法: HPV11.HaCaT细胞培养传代后分别用不同浓度5-ALA(0.375、0.75、1.5、3 mM),或不同剂量红光(10、20、40 J/cm2),或不同浓度5-ALA结合不同剂量红光处理。用MTT法检测细胞增殖,实时荧光定量PCR测定HPV11早期基因E5、E6和E7 mRNA的表达。结果:0.75 mM以上浓度的5-ALA联合20或40 J/cm2红光,细胞存活率均在50%以下( P<0.01)。0.375 mM 5-ALA联合20 J/cm2红光能明显降低HPV11 E6和E7 mRNA表达,相对表达量为0.28和0.26(P<0.01),而0.75 mM 5-ALA联合20 J/cm2红光处理对HPV11 E6和E7 mRNA表达影响不明显,相对表达量为0.85和1.46( P>0.05),但以上两种处理条件对HPV11 E5 mRNA的表达均无明显影响。结论:5-ALA-PDT法应用于HPV11.HaCaT细胞模型能抑制HPV11.HaCaT细胞增殖,并能降低该细胞中HPV11 E6、E7mRNA的表达。
关键词: HPV11.HaCaT 尖锐湿疣 光动力疗法 细胞增殖 早期基因 -
人乳头瘤病毒18型E6/E7基因在宫颈脱落细胞中的表达研究
目的 研究人乳头瘤病毒HPV 18型早期基因E6/E7在不同宫颈上皮病变患者脱落细胞中mRNA表达分布与基因突变特征.方法 收集单纯感染HPV 18型不同阶段宫颈上皮病变组织脱落细胞并提取总DNA.特异性引物针对20例官颈癌患者E6、E7基因进行PCR扩增检测,所得产物进行Sanger测序分析.以支链DNA(b-DNA)技术检测HPV18型E6/E7mRNA阳性率,与临床病理CIN结果进行比较分析.结果 基因测序发现20例发生E6基因突变,199位点突变率高,达55.0%(11/20);再次是201位点突变率45.0%(9/20).15例发生E7基因突变,其中125位点突变率60.0%(9/15),199位点突变率33.3%(5/15).在不同宫颈上皮病变患者脱落细胞标本中,E6/E7mRNA阳性率呈现差异性(P<0.01).E6/E7mRNA阳性率在慢性宫颈炎、CIN Ⅰ+Ⅱ级、CIN Ⅲ级和宫颈癌组织中阳性率分别为23.4%、35.7%、81.1%和95.1%.E6/E7mRNA阳性率与临床CIN分级诊断呈正向线性相关.结论 HPV 18型基因突变较为突出.HPV 18型早期蛋白E6、E7表达量的变化与宫颈组织病变程度高度相关.
关键词: 人乳头次瘤病毒18型 宫颈癌 脱落细胞 早期基因 突变 -
铜绿假单胞菌噬菌体PaP3全基因组在感染宿主菌PA3过程中的分时期表达研究
目的 明确铜绿假单胞菌噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后其全基因组的分时期表达模式.方法 利用基因芯片检测噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后不同时间(5 min,10min,20min,30 min,80 min)其全基因组(含71个预测的ORF)在转录水平的表达谱变化,并进行非临督层次聚类(hierarchical clustering)分析.利用蛋白质合成抑制剂氯霉素(Cm)和DNA复制抑制剂磷酸乙酸(PAA)实验确定PaP3全基因组的分时期表达情况.结果 根据时间表达模式的不同,PaP3全基因组可分为3大类:15个早期基因(ORF 71-57)、35个中期基因(ORF 56-22)及21个晚期基因(ORF 21-1).在PaP3基因组结构中,这3类基因各自串联分布且可能受不同的操纵子调控.结论 PaP3感染过程中其早期、中期及晚期基因随时间有序表达,为深入了解噬菌体基因表达模式及生命复制周期奠定基础,并为了解噬菌体与宿主及机体免疫系统的的相互作用提供了基础.
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大肠癌早期基因诊断研究的现状与展望
近年来结肠癌的发病率不断上升,已由恶性肿瘤的第4位上升到第3位,发达国家如美国估计大肠癌死亡人数56290人,占全年癌症死亡总数的9.9%,仅次于肺而位居第2位.
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食管癌发生早期相关基因研究进展
食管癌是世界上常见的恶性肿瘤之一,全世界每年约30万人死于食管癌,我国是食管癌高发地区,每年因食管癌死亡者约15万人,占癌症患者死亡率近四分之一,居第二位.
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高危型人乳头瘤病毒E6/E7质控品的建立
目的:建立高危型人乳头瘤病毒(HPV) E6/E7质控品,用于评价高危型HPV E6/E7 mRNA检测试剂盒的性能.方法:根据高危型HPV 16和HPV 18的E6/E7基因序列设计引物,从感染HPV 16和HPV 18宫颈上皮细胞中提取DNA作为模板,通过PCR扩增获得带有目的基因的产物.采用限制性内切酶对带有目的基因的PCR产物和表达载体分别进行酶切,将目的基因与表达载体连接,然后转化DHSα感受态细胞,筛选出阳性菌落进行测序.然后将阳性菌液进行超声诱导,制备假病毒溶液.采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对假病毒溶液提取的RNA进行鉴定.结果:通过序列测定和荧光定量RT-PCR法检测,结果表明成功建立了高危型HPV E6/E7假病毒质控品.结论:本研究建立了HPV E6/E7质控品的方法,可为高危型HPV E6/E7 mRNA检测试剂的质量控制提供质控品.