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HCMV pp65的基础及应用研究
HCMV被膜磷蛋白pp65(phosphoprotein 65,ppUL83)作为GCNV的主要结构蛋白,在病毒感染及诱导机体免疫反应中起重要作用,对其深入研究将有利于进一步明确HCMV的致病机理,探讨HCMV的免疫预防与治疗的新途径.本文对HCMV pp65的结构、功能及有关的免疫研究基础与应用进行了综述.
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我国狂犬病病毒及其传播流行规律
狂犬病病毒为单股不分节段的负链RNA病毒,病毒基因组由11928-11932个核苷酸组成,依次排列着N、P、M、G和L5个狂犬病病毒的结构基因,其长度分别为1 424、991、805、1675、6475个核苷酸,分别编码核蛋白(NP)、磷蛋白(NSP)、基质蛋白(MP)、糖蛋白(GP)和转录酶大蛋白(LP).
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中国西藏小反刍兽疫病毒China/Tib/Gei/07-30磷蛋白基因的分子特征及其编码蛋白特性分析
对我国西藏小反刍兽疫病毒野生株China/Tib/Gej/07-30进行磷蛋白基因序列测定,并进行分子生物学特征分析.首先应用逆转录聚合酶链式反应扩增出病毒磷蛋白基因片段,对聚合酶链式反应产物进行直接测序,然后对测定的核苷酸和推测的氨基酸序列进行比较分析.小反刍兽疫病毒china/Tib/Gej/07-30磷蛋白基因由1 655个核苷酸组成,编码2个相互交叠的开放阅读框(0RF).第一个ORF长度为1530个核苷酸.编码的P蛋白长度为509个氨基酸.第二个ORF长度为534个核苷酸,编码的C蛋白长度为177个氨基酸.第一个ORF通过基因编辑在751位插入1个G核苷酸,转录生成第二个mRNA,长度为897个核苷酸,编码的V蛋白长度为298个氨基酸.小反刍兽疫病毒China/Tib/Gej/07-30的P蛋白与其他分离株氨基酸序列同源性为86.1%~97.3%,C蛋白氨基酸序列相似性为84.3%~94.9%,V蛋白为82.9%~96.3%.China/Tm/Gej/07-30的P蛋白第315~387位氨基酸是一段高度保守的七肽重复序列.
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HCMV pp65和gB联合核酸疫苗表达载体的构建及其体内生物学活性研究
人巨细胞病毒(HCMV)主要被膜磷蛋白pp65(phosphoprotein 65)及糖蛋白gB(glycoprotein B)在病毒感染及诱发机体免疫反应中起重要作用,近年来有不少学者对HCMV pp65和gB这两种抗原进行动物和临床试验研究,虽取得了一定效果,但仍存在免疫原性弱、免疫范围局限等缺点.本研究利用分子生物学方法将HCMV两种保护性免疫原性基因pp65和gB构建在一起,制备HCMV核酸疫苗,并研究其在小鼠体内的免疫活性.
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戊型肝炎病毒 ORF1研究进展
戊型肝炎病毒(hepatitus E virus,HEV)是急性病毒性戊型肝炎的病原体[1],近年来研究发现免疫力低下或器官移植患者感染 HEV 后形成 HEV 的持续性感染,发展成为慢性戊型肝炎[2]。公认的 HEV包括4个基因型,其中基因1、2型只感染人,而基因3、4型既感染人也感染猪[3]。除人、猪 HEV 外,还发现了兔、禽、鹿、鼠等 HEV[4]。HEV 是肝炎病毒科戊型肝炎病毒属的唯一成员,为无包膜、正义、单链RNA 病毒,病毒基因组全长约7.2 kb,包括5ˊ非编码区、3个开放阅读框(ORFs)和3ˊ非编码区;ORF1编码与病毒复制相关的酶等非结构蛋白,ORF2编码660 aa 的病毒衣壳蛋白,ORF3编码小分子的磷蛋白[5]。ORF2蛋白是公认的病毒抗原,是病毒的主要结构蛋白[6],ORF3蛋白是病毒多功能蛋白,参与多种调节及病毒释放[7];ORF1在明确其与病毒复制相关功能后研究较少,近年来,对 ORF1的研究报道增多,发现其新的特征,以下综述 ORF1的研究进展。
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成纤维细胞生长因子23及其基因表达与磷代谢性疾病的关系
成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)作为一种分泌性蛋白质,主要由骨细胞产生,其主要通过远距离调节肾脏对磷的重吸收而有效地保持血磷稳态.FGF23还可通过作用于肾小管上皮细胞膜上特定受体而影响维生素D3的活化,亦可直接影响磷蛋白的表达而实现对血磷调节作用.已有研究证实磷稳态的调节是FGF23的系统效应之一;同时骨骼的矿化和软骨细胞分化则表现为FGF23不依赖于磷稳态的效应[1].研究表明,FGF23产生的过多或过少将破坏血磷的稳定,从而引发多种疾病的发生,如低磷性佝偻病、过早衰老、瘤样钙质沉着、继发性甲状旁腺功能亢进(SHP)等,本文就上述有关研究进展进行总结分析.
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人巨细胞病毒被膜磷蛋白65检测的临床意义
肾移植受者中人巨细胞病毒(HCMV)感染较为常见,其中10%~30%为术后有症状的HCMV感染[1].HCMV被膜磷蛋白65(HCMV-pp65)是HCMV DNA复制时即出现的一种抗原,在出现临床症状数日或1周前可检出HCMV-pp65阳性标本.我们采用间接免疫荧光染色法(IFA),检测肾移植术后病人外周血多形核细胞(PMNLs)中HCMV-pp65,以辅助临床对HCMV进行早期诊断与治疗.
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急性髓系白血病中异柠檬酸脱氢酶基因突变的研究进展
急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一组异质性疾病.长期以来,细胞遗传学异常被认为是影响AML发生发展及预后的独立因素,研究发现40% ~ 50%的AML患者为正常核型[1].近年来研究表明,基因突变在正常核型AML患者预后判断方面具有重要意义,WHO已将核磷蛋白(NPMl)基因突变、FLT样酪氨酸激酶3基因串联重复突变(FLT3-ITD)等作为AML预后的重要标志[2].
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呼吸道合胞病毒感染及反义基因治疗的研究进展
一、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染及治疗现状1.RSV基因结构与蛋白功能:RSV属于副黏病毒科,肺炎病毒属,为非节段性单股负链RNA病毒,含有大约15 000个核苷酸,其基因顺序依次为:3'NS1-NS2-N-P-M-SH-G-F-M2-(M2-1/M2-2)-L-5',共编码11个病毒蛋白[1,2],分别为:核衣壳蛋白N、磷蛋白P、多聚酶亚单位L、转录延长因子M2-1、黏附蛋白G、融合蛋白F、小疏水蛋白SH、非结构蛋白NS1和NS2、基质蛋白M和M2-2.
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猪骨磷蛋白直接盖髓的实验研究
目的:观察猪骨磷蛋白对修复性牙本质形成的作用。方法用猪骨磷蛋白作盖髓剂,对小型猪健康牙行盖髓术实验,对照采用氢氧化钙盖髓,盖髓2、4、12周后,通过组织病理学观察牙本质桥形成情况。结果猪骨磷蛋白盖髓2周有团块状的修复性牙本质形成,团块周围有整齐排列的方形或矮柱状的类成牙本质细胞;4周可见大量修复性牙本质团块,呈桥形分布,修复性牙本质周围有整齐排列的柱状的类成牙本质细胞,穿髓孔未完全封闭;12周有完整的修复性牙本质桥形成,将穿髓孔封闭,牙本质结构致密,部分为管状牙本质,牙本质桥下方可见排列整齐的的成牙本质细胞。氢氧化钙盖髓2周穿髓孔下方可见薄层坏死组织;4周有修复性牙本质形成,较猪骨磷蛋白盖髓形成的修复性牙本质薄;12周有完整的修复性牙本质桥形成,牙本质结构致密,部分为管状牙本质,其厚度略低于猪骨磷蛋白盖髓。结论猪骨磷蛋白有良好的生物相容性,用其盖髓,能诱导修复性牙本质形成。
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牙本质磷蛋白诱导矿化作用的研究
目的探讨牙本质磷蛋白(dentin phosphoprotein,DPP)诱导矿化的作用.方法在体外矿化系统中利用人DPP与EAH-Sepharose 4B凝胶颗粒结合进行诱导矿化实验,通过扫描电镜观察生成物的形貌变化,X线衍射及等离子发射光谱分析生成物的组分和结构.结果结合有人DPP的凝胶颗粒表面有矿化物形成,该矿化物钙磷比约为1.33,其X线衍射结果与羟基磷灰石更为相似.结论人DPP与一定的支持物紧密结合后具有诱导矿化的作用.
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核磷蛋白与肿瘤的发生
核磷蛋白(NPM,也称作B23、NO38或Numatrin)是主要的核仁磷酸化蛋白,它参与核糖体的生物合成,控制中心体复制,具有分子伴侣作用,并可通过多种信号通路调节细胞增殖和凋亡,参与多种肿瘤的发生[1].NPM在肿瘤细胞和生长期细胞中含量明显高于静止期细胞,而在分化和凋亡细胞中其表达水平下调.现就NPM的结构和功能以及其在肿瘤发生中的作用综述如下.
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胰淀素与胰岛素抵抗
胰淀素是胰岛β细胞分泌的一种37个氨基酸的多肽,在体内有糖基化和非糖基化胰淀素两种存在形式.胰淀素可调节胰岛素分泌,降低胰岛素敏感性.研究表明,胰淀素可能通过升高游离脂肪酸,改变磷蛋白的磷酸化位点,以及降低胰岛素受体激酶活性等多种途径诱导胰岛素抵抗的发生.
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核磷蛋白与恶性血液病
核磷蛋白(nucleophosmin,NPM)又名B23、NO38、Numatrin,是一种多功能的核仁磷酸化蛋白,广泛表达于各组织细胞,穿梭于胞核与胞质参与核糖体的装配、前rRNA的加工剪切、DNA复制、中心体复制、细胞分裂等生命活动.近年来,对于其生物学功能的研究颇受关注.自从Stein首先报道了NPM-ALK基因是CD30+(ki-1)间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)的典型特征后,NPM作为分子遗传标志物与疾病诊断、预后的关系越来越引起研究者的关注.1994年,Morris和Shiota克隆出NPM-ALK融合基因后,人们发现NPM变异对于肿瘤尤其是恶性血液病的发生、发展和预后起着重要的作用.
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颌面部肿瘤引起低磷抗D骨软化症的围术期护理
磷是人体含量多的元素之一.正常人体内含磷400 g~800 g,占体重的0.8%~1.2%,体内磷的85%存在于骨和牙,其余散在分布于横纹肌膜、肌组织、皮肤、神经组织以及其他脏器.磷的需要量为钙的1.5倍,成人需0.8 g/d~1.5 g/d.磷以磷蛋白、磷脂或无机磷形式广泛分布于食物内,如牛奶、乳制品、鱼肉类、小麦和谷类均含有丰富的磷.
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SSB/La分子结构表位识别和抗体应答
SSB/La是磷蛋白,相对分子质量为48 000,定位于细胞核/细胞浆中,SSB/La抗体存在于系统性红斑狼疮(SLE)和干燥综合征(SS)等病人血清中,是SS诊断标记性抗体,SSB/La抗体阳性病人97%表现为干燥综合征.SSA包括相对分子质量为60 000和52 000两条多肽链,SSA抗体阳性多见于SLE合并继发性干燥综合征病人[1,2].
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骨桥蛋白及基因在风湿免疫性疾病中的研究进展
风湿免疫性疾病是一类累及多系统、多器官,临床表现复杂、病程迁延反复的自身免疫性疾病.其病因、发病机制尚未完全明了,一般认为是环境因素作用于一定遗传背景的机体而形成自身免疫损伤的结果.骨桥蛋白(osteopontin,OPN)又称为分泌性磷蛋白1、早期T淋巴细胞活化因子、骨调素,它是一种由多种细胞产生的细胞外基质蛋白,在细胞表面与其受体结合诱导细胞信号转导,促进细胞的黏附和迁移,在细胞免疫过程中发挥重要调节作用[1].研究证实:OPN基因突变和OPN表达的增加同一些自身免疫性疾病的发病直接相关[2].本文就近年来有关OPN及基因与风湿免疫性疾病的研究进展作一综述.
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博尔纳病病毒磷蛋白细胞模型的构建与鉴定
目的 建立博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白的细胞模型,并对所建模型进行鉴定.方法 重新扩增和鉴定已有的BDV 磷蛋白(GFP-P24)质粒,使用转染试剂将该质粒转入PC12细胞,并用荧光定量PCR和ELISA的方法对所构建的细胞模型进行鉴定.结果 重新扩增的质粒PCR鉴定阳性,其浓度符合转染的需要,测序后未发现核苷酸的突变;转染PC12细胞的效率高,荧光定量PCR和ELISA检测均为阳性.结论 成功构建了BDV磷蛋白的细胞模型,为研究BDV感染过程中磷蛋白所起的作用奠定了基础.
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结核患者外周血单个核细胞培养液及外周血骨桥蛋白水平检测及其临床意义
国内外许多研究表明结核感染的发生与机体细胞免疫功能失衡有关,体内细胞因子及Th1/Th2应答平衡对结核病的进展、预后发挥重要影响作用.近年来国外研究发现一种与骨代谢密切相关的分泌型细胞外基质磷蛋白Ⅰ,又称骨桥蛋白Osteopontin,OPN)与结核病的发病有一定的关系[1].我们对44例结核患者外周血骨桥蛋白、IL-l8及IL-4水平进行检测,并与20例健康者进行对照,同时检测外周血单个核细胞经卡介苗刺激后培养上清液中OPN、IL-18、IL-4水平变化,以了解骨桥蛋白在结核发病中的作用.
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狂犬病病毒磷蛋白重组人5型腺病毒的构建及鉴定
目的 构建表达狂犬病病毒(rabies virus, RABV)BD06株磷蛋白(phosphoprotein,P)的重组人5型腺病毒,并进行鉴定.方法 质粒pMD 18-T-BD06P经双酶切后,获得完整的P蛋白基因,将其克隆至腺病毒表达系统穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA,构建重组穿梭质粒pacAd5CMV-BD06P,与骨架质粒pacAd5 9.2-100经Pac Ⅰ酶切线性化后,共转染HEK293AD细胞,经同源重组,获得表达RABV P蛋白的重组人5型腺病毒rAd5-BP.采用Kaber法计算rAd5-BP滴度,RT-PCR、Western blot、直接免疫荧光方法(direct immunofluorescence assay,dFA)检测P蛋白基因在HEK-293AD细胞的转录及表达水平.以107 TCID50 rAd5-BP肌肉注射免疫昆明小鼠,14 d后,经尾静脉采血,分离血清,IFA法检测抗RABVP蛋白抗体及其反应活性.结果 经酶切及测序鉴定证明重组穿梭质粒pacAd5CMV-P构建正确;重组腺病毒rAd5-BP滴度可达108 TCID50/ml,能够介导P蛋白在HEK293AD细胞中的转录及表达,接种小鼠后可刺激机体产生针对RABVP蛋白抗体,且与RABV具有良好的反应活性.结论 成功构建了RABVBD06株P蛋白重组人5型腺病毒,该病毒能够介导P蛋白在小鼠体内有效表达,刺激机体产生针对RABVP蛋白抗体,且与RABV具有良好的反应活性,为进一步研究RABV P蛋白在病毒感染过程中的作用奠定了基础.