首页 > 文献资料
-
我国狂犬病病毒及其传播流行规律
狂犬病病毒为单股不分节段的负链RNA病毒,病毒基因组由11928-11932个核苷酸组成,依次排列着N、P、M、G和L5个狂犬病病毒的结构基因,其长度分别为1 424、991、805、1675、6475个核苷酸,分别编码核蛋白(NP)、磷蛋白(NSP)、基质蛋白(MP)、糖蛋白(GP)和转录酶大蛋白(LP).
-
登革疫苗研发新进展与面临的问题
登革病毒(Dengue virus,DENV)是一种通过伊蚊传播的单股正链RNA病毒,属于黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus).DENV有4种血清型:DENV1、DENV2、DENV3和DENV4,无论感染了哪一型,出现的症状多为发热、头痛、关节疼痛等,大多数人初次感染会自然痊愈,但若再次受到不同型DENV的感染,很容易引发严重的登革出血热(dengue hemorrhagic fever,DHF)或是登革休克综合征(dengue shock syndrome,DSS)[1].
-
滚环复制技术的建立及在RNA病毒基因检测中的初步应用
滚环复制是噬菌体繁殖所采取的一种基因复制方式,这种方式可使单链的环形分子在聚合酶和引物的作用下进行体外自我扩增.本文中用可特异性连接环化的寡核苷酸链作为探针,分别进行了1份细胞培养的禽流感病毒H5N1亚型样品、1份细胞培养的SARS病毒样品和4份丙型肝炎病毒阳性血清样品的检测.检测原理是探针与靶序列杂交后便可在T4DNA连接酶的作用下形成滚环复制中的环化单链分子,该分子在同温下可被特异性引物滚动复制和支链扩增.本文还利用按禽流感病毒NA1基因区序列合成的模拟DNA分子对该检测方法的灵敏度进行了测试.结果显示:利用固相RCA技术成功检测到三种RNA病毒的基因,该方法的灵敏度可达到能检测103拷贝模式DNA分子的水平.与传统的PCR方法敏感性的比较尚待进一步研究.
-
基于多重置换扩增技术的RNA病毒基因组扩增方法研究
为了便于新发或罕见病毒性传染病的筛查检测,本研究利用多重置换扩增技术,以负链RNA病毒一发热伴血小板减少综合征病毒和正链RNA病毒一登革病毒为模拟样本探索临床样本中RNA病毒基因组非特异性扩增方法.研究中通过梯度稀释的RNA病毒模拟样本中可能存在的不同丰度的病原体,样本核酸依次加工成单链cDNA、双链cDNA、T4 DNA连接酶处理后的双链cDNA以及添加外源辅助RNA后合成并连接的双链cDNA形式,然后进行Phi29 DNA聚合酶等温扩增,使用荧光定量PCR方法比较各种方法对RNA病毒核酸扩增的影响.结果显示,对于不同类型的RNA病毒模拟标本,多重置换扩增对于单链及双链cDNA的扩增效果有限,而双链cDNA经DNA连接酶处理后的扩增能达到6×103倍；在cDNA合成过程中加入外源辅助RNA,模拟样本中病毒基因组的扩增可达2×105倍,尤其是对含有低丰度病原体的模拟样本扩增效果的改善更为明显.本研究摸索建立了基于多重置换扩增技术的RNA病毒基因组扩增方法,能够对样本中低丰度RNA病毒基因组实现有效扩增,可满足开展多种病原体筛查检测的需求.
关键词： 多重置换扩增 Phi29 DNA聚合酶 RNA病毒 -
RNA病毒表达调控研究中的RNA结构分析技术
RNA病毒的多个生命过程如基因组复制、蛋白翻译等均需要特定RNA元件的调控,RNA结构是其发挥调控作用的分子基础,研究这些RNA元件结构及其在调控过程中的动态变化,将有助于深度解析相应过程的调控机制.RNA结构分析技术可以解析RNA元件的结构(二级结构和三级结构).目前,RNA结构体分析技术主要有以下几种:Rnase酶法、In-line probing技术、SHAPE技术(Selective 2'-hydroxyl acylation analyzed by primer extension)、核磁共振技术、RNA结晶以及体内分析技术.本文将对RNA结构分析技术的发展历程、具体技术原理和操作细节、未来发展进行叙述,为相关科研工作提供技术参考.
-
RNA病毒阻断RIG-I样受体识别dsRNA机制研究进展
RIG-I样受体(RIG-I-like receptors,RLRs)是一类重要的模式识别受体,其在机体抵抗病毒感染过程中发挥着至关重要的作用.RLRs通过级联放大效应,诱导Ⅰ型干扰素的表达,激活干扰素通路,终发挥抗病毒效应.而病毒为了自身长期的生存和繁殖,在长期的进化和演化过程中,不断的与机体免疫系统进行着抗衡和斗争,由此演化出了一系列的拮抗策略.RLRs主要识别5'端带有三磷酸基团的RNA(包括单链和双链RNA)和双链RNA,其在启动免疫应答过程中可以通过与病毒RNA结合而得以激活,然后招募下游分子,激活整个通路的信号转导.病毒为了阻断RLRs对病毒RNA的识别,拮抗RLRs通路的激活,进化出了非常精细的对抗策略,主要分为:躲避、伪装和攻击三种策略.了解清楚病毒拮抗RLRs抗病毒的分子机制对于研制新的抗病毒药物及发展新的抗病毒策略具有深远意义.本文主要对RNA病毒阻断RLRs识别dsRNA机制的研究进展进行综述.希望为研究不同RNA病毒拮抗RLRs分子机制提供一定的参考和依据.
-
正黏病毒科索戈托病毒研究进展
索戈托病毒属于正黏病毒家族,是一种由蜱传播给人或动物的虫媒病毒,其基因结构特征、复制及转录、编码产物的功能等与流感病毒有诸多相似之处,对流感病毒保守位点的探究具有重要意义,而且索戈托病毒属病毒的动物模型有望作为人感染高致病性流感病毒的一个替代模型.不过迄今为止全球对索戈托病毒的研究尚少,尚未引起足够的重视.本文主要对索戈托病毒的分类、基因组成及各基因编码产物、进化特点等进行了介绍,重点总结了其第六个基因片段编码的基质蛋白M和ML蛋白在病毒复制周期中所发挥的作用以及病毒与宿主间的相互作用机制等方面的研究进展.
-
4种有囊膜RNA病毒形态发生的比较观察
目的 从形态结构及形态发生角度准确区分和确认流感病毒、犬冠状病毒、狂犬病毒和新城疫病毒.方法 将感染4种RNA病毒的体外培养细胞用戊二醛、锇酸固定,制成超薄切片,透射电镜观察.结果 4种病毒子代病毒的核衣壳或完整病毒粒子的装配都在胞浆中进行,子代病毒装配的前体物质的形态结构不同.4种病毒子代病毒的完整病毒粒子装配的形式不同,其中流感病毒和新城疫病毒只在细胞膜以向胞外出芽的方式装配成完整病毒粒子;狂犬病毒在细胞浆膜相结构和细胞膜表面以出芽方式装配成完整病毒粒子;冠状病毒在细胞浆膜相结构以出芽方式装配成完整病毒粒子.流感病毒子代病毒装配完即离开细胞膜;新城疫病毒的子代病毒不易离开细胞膜.多数狂犬病毒和冠状病毒的子代病毒要待细胞破碎后才能释放到细胞外.结论 利用病毒培养物的超薄切片进行电镜观察,可根据其形态发生准确区分4种RNA病毒.
-
新型蚊媒RNA病毒检测方法的建立
目的 建立一种不使用特异引物的新型蚊媒RNA病毒检测方法,以期用于蚊媒病毒的检测.方法 利用白纹伊蚊C6/36细胞对蚊虫RNA病毒进行培养,提取病毒RNA后反转录成cDNA,经酶切、接头连接、产物扩增、测序、序列比对,确定病毒种类.结果 用建立的蚊媒RNA病毒检测方法可检出实验室培养的乙型脑炎病毒、黄热病毒和登革热病毒,其PCR产物序列与GenBank中相应的已知序列比较,同源性分别＞99％、＞99％和＞95％.结论 该方法能够有效、准确地检出蚊虫体内的RNA病毒,可用于蚊媒RNA病毒的检测.
-
siRNA对单纯疱疹病毒2型ICP4基因抑制作用的研究
目的 探讨RNA干扰对单纯疱疹病毒2型(HSV2)ICP4基因表达和HSV2 DNA复制的抑制作用.方法 化学合成靶向作用于HSV2 ICP4的四对siRNA和阴性对照siRNA,分别命名为siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3,siRNA-4及siRNA-N,转染Vero细胞,过夜后用HSV2 HG52标准毒株感染上述Veto细胞,1、2、3、4d和5d收集Vero细胞和上清液,荧光定量RT-PCR检测ICP4 mRNA的表达水平,荧光定量PCR检测HSV2 DNA拷贝数,Western-Blot检测ICP4蛋白表达水平.结果 与阴性对照相比,四对siRNA对HSV2 ICP4 mRNA和蛋白均有不同程度的抑制作用,以siRNA-2抑制作用强,并且均可显著降低HSV2 DNA拷贝数.结论 靶向作用于HSV2 ICP4的siRNA可显著抑制ICP4mRNA及蛋白表达和HSV2 DNA拷贝数,提示siRNA可通过抑制HSV2 ICP4基因表达而抑制HSV2的复制.
-
乙型肝炎病毒准种特点与抗病毒治疗应答不良研究进展
准种的概念是由Eigen[1]在研究RNA病毒分子复制机制时首先提出的,2005年中国《慢性乙型肝炎防治指南》将乙型肝炎病毒(HBV)感染者体内形成的以一个优势株为主的相关突变株病毒群称为HBV准种[2].HBV准种的动态变化与抗病毒治疗效果有着密切联系,为此研究HBV准种特点能为临床提供抗病毒治疗的选择有着指导意义,亦为研发新的抗病毒药物提出挑战.
-
基于狂犬病病毒载体的基因工程疫苗研究进展
对HIV-1和HCV等重大传染性疾病传统疫苗研制的失败,让科学家们把目光转向开发新型疫苗研制策略.其中之一就是用减毒的重组病毒载体表达外源抗原来免疫,可以保护个体免受相应病原体的暴露威胁.一种新的手段就是从cDNA克隆拯救单股负链RNA病毒,这一技术为弹状病毒科成员用于疫苗载体和生物医学工具打开了一扇窗.
-
丙型肝炎病毒细胞培养系统的研究进展
丙型肝炎病毒HCV是非甲非乙型肝炎的主要病因,为单股正链RNA病毒,属黄病毒家族.
-
2009年甲型H1N1流感病毒HA区参照序列的建立及变异分析
2009年3月开始全球暴发了新型H1N1流感,这是继1918年、1977-1978年之后国际上第3次H1N1流感暴发,甲型H1N1流感病毒属于RNA病毒,极易发生基因变异,当变异较大时出现抗原漂移或抗原转变,不同患者来源的病毒株基因序列也具有差异性.
-
肠道病毒核酸与抗体联合检测在手足口病病原早期诊断中的应用
目的：探讨肠道病毒核酸与特异性抗体联合检测在手足口病实验室早期诊断中的应用价值，为手足口病患儿实验室诊断提供新参考。方法病例对照研究。收集杭州市儿童医院2014年1至6月1066例临床诊断手足口病的住院患儿，其中普通病例401例，重症病例665例。对上述住院患儿同时采集咽拭子和血清样本进行肠道病毒核酸EV71／CA16／EV通用型实时荧光定量RT-PCR与EV71／CA16-IgM抗体联合检测。采用SPSS16.0软件进行组间χ2检验或McNemarχ2检验统计分析。结果1066例手足口病临床诊断病例中肠道病毒核酸EV71／CA16／EV通用型实时荧光定量RT-PCR检测总阳性率为75.52％（805／1066）（95％CI：72.80％～78.05％）；肠道病毒核酸联合EV71／CA16-IgM抗体检测总阳性率为91.46％（975／1066）（95％CI：89.58％～93.04％），总阳性率比较差异有统计学意义（χ2＝98.338，P＝0.000）。单纯肠道病毒核酸检测EV71型检出率为49.25％（525／1066）（95％CI：46.21％～52.29％），联合检测 EV71型检出率为64.63％（689／1066）（95％CI：61.67％～67.49％），EV71阳性检出率比较差异有统计学意义（χ2＝51.453， P＝0.000）。665例临床诊断为重症手足口病病例中，肠道病毒核酸抗体联合检测总阳性率为96.69％（643／665）（95％CI：94.95％～97.87％），与单纯肠道病毒核酸检测总阳性率79.25％（527／665）（95％CI：75.92％～82.22％）比较差异有统计学意义（χ2＝95.607， P＝0.000）；重症病例中，联合检测EV71阳性率为87.52％（582／665）（95％CI：84.71％～89.89％），单纯核酸检测为68.57％（456／665）（95％CI：64.87％～72.06％），EV71阳性率提高了18.95％（126／665），两者比较差异有统计学意义（χ2＝69.665， P＝0.000）。结论肠道病毒核酸与特异性抗体联合检测可以显著提高手足口病实验室诊断检出率，尤其对于重症手足口病患儿，联合检测总阳性率与EV71阳性率显著提高，具有较高的临床诊断应用价值，有望成为手足口病实验室诊断的新方案。（中华检验医学杂志，2015，38：397-401）
-
H9N2亚型禽流感病毒血凝素抗体乳胶凝集检测方法的建立
禽流感病毒(avian influenza vires,AIV)是一种RNA病毒,属于正黏病毒科(orthomyxoviridae)A型流感病毒属.A型流感病毒根据其表面血凝索(hemagglutinin,HA)与神经胺酸酶(neuraminidase,NA)抗原性的不同可分为若干亚型,目前已发现的A型流感病毒的血凝素有16个亚型(H1～16),神经氨酸酶有9个亚型(N1～9)[1].1997年中国香港暴发H5N1亚型高致病性禽流感,导致18人感染,6人死亡,这引起了人们的疑虑:H9N2亚型禽流感病毒能否跨越种间障碍从而导致人群的感染?1998-1999年,广东省以及香港地区暴发了H9N2亚型禽流感,直接导致多人感染[2-3].2003年11月,香港地区又发生了H9N2亚型禽流感病毒感染人的事件[4].
-
环媒恒温扩增技术在病毒感染检测中的应用
环媒恒温扩增法(loop mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型的恒温核酸扩增技术,它利用了2对特异引物和一种有链取代活性的DNA聚合酶,通过使扩增产物形成单链环结构实现核酸的恒温扩增.LAMP自身的一系列特性使其可以达到对特定核酸片段高效、特异的扩增.由于反应结果可以通过测定反应副产物--焦磷酸镁沉淀引起的浊度来判断,因此使其成为一种十分有效的分子检测手段.
-
非洲籍输入性基孔肯雅热一例的实验室诊断
基孔肯雅热是由基孔肯雅病毒引起,经伊蚊叮咬传播,以发热、关节疼痛、皮疹和轻度出血为主要特征的病毒性急性传染病.基孔肯雅病毒是单股RNA病毒,属于披膜病毒科甲病毒属.1952年研究人员发现基孔肯雅热在坦桑尼亚流行,并从严重关节炎患者血液中分离出基孔肯雅病毒.1956年,Ross[1]从急性期患者的血液及野外捕获的埃及伊蚊体内分离出基孔肯雅病毒.近年来,本病在东非海岸、印度洋岛屿、印度及东南亚地区流行,导致超过200 万人感染发病,且流行地区不断扩大,发病人数不断上升[2].
-
6种核酸提取试剂盒对甲型H1N1流感病毒核酸提取效果的比较
目的 研究5种国产病毒RNA提取试剂盒对甲型H1N1流感病毒检测的相对效率、耗时和成本,为各级实验室甲型H1N1流感病毒核酸提取检测提供技术参考.方法 对滴度为105 pfu/ml的甲型H1N1流感病毒参考株悬液作10-1～10-4 系列稀释,采用德国Qiagen公司的QIAamp Viral RNA Mini Kits和5种国产试剂盒对上述样本进行核酸提取,用复合探针实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 对其提取效率进行平行检测,分析5种国产试剂盒与QIAamp Viral RNA Mini Kits提取效率的差异,同时对试剂盒提取时间及价格进行比较.结果 对不同稀释度流感病毒样本的提取检测,各试剂盒存在显著差异,均以QIAamp Viral RNA Mini Kits提取效率高.综合提取效率、耗时及成本等因素考虑,B试剂盒性价比高.结论 不同核酸提取试剂盒对病毒核酸的提取,可影响RT-PCR的检测效果,各实验室应根据自身条件及试验目的,合理选择性价比较高的试剂盒对临床样本进行核酸提取.
-
3C和3CL蛋白酶及广谱抑制剂的研究进展
小RNA病毒和冠状病毒属于单正链RNA病毒，其家族中的病原体易导致手足口病、心肌炎、普通感冒以及严重的呼吸道和肠道疾病。3C和3CL蛋白酶都属于半胱氨酸蛋白酶，底物结合位点高度保守且具有相似的催化机制，是催化单正链RNA病毒前体蛋白裂解的关键蛋白酶，对病毒的复制有重要作用。人体中没有与其相似的蛋白酶，是目前广谱抗单正链RNA病毒研究的重要靶点。利用3C和3CL蛋白酶结构的相同点，成功发现了具有广谱作用的蛋白酶抑制剂。本文简要概述3C和3CL蛋白酶的结构、功能和广谱抑制剂的研究进展，并简要阐释抑制剂的作用机制，对该类酶的广谱抑制剂研究和相关病毒的治疗具有指导意义。
