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甲病毒及其相关疾病研究进展
甲病毒为披膜病毒科中的一个属,迄今,已发现28种甲病毒,其中有13种可引起人、畜疾病.东方马脑炎、西方马脑炎、委内瑞拉马脑炎、基孔肯雅、阿尼昂尼昂、辛得毕斯、罗斯河和马雅罗病毒可引起人类严重疾病,临床上以发热、皮疹、关节炎或脑炎为特征,对人类健康构成严重威胁.本文就甲病毒的分类、生物学特性、主要疾病及其分布、宿主、媒介等方面的研究进展作一综述.
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蚊类携带甲病毒属病毒CODEHOP RT-PCR检测方法的建立
目的 建立蚊类感染甲病毒属病毒的CODEHOP RT-PCR检测方法.方法 依据甲病毒属病毒非结构蛋白氨基酸序列,设计1对CODEHOP引物,建立甲病毒属病毒一步RT-PCR检测方法,分析该引物在对不同种甲病毒基因序列上的结合位点及所能获得的产物序列大小;通过检测甲病毒属基孔肯亚病毒JC2012株,评价该方法的特异性和灵敏度;对JC2012扩增产物进行Blast同源性比对.结果 建立的CODEHOP RT-PCR方法可特异性扩增基孔肯亚病毒核酸,目的片段的大小与预期结果相符,核酸的小检出量为56.7 pg.经Blast比对,结果与Genebank公布的CHIKV JC2012序列结果一致.同时从GenBank获得的22种甲病毒均存在CODEHOP引物结合位点,扩增产物大小在510～550 bp之间.结论 建立的甲病毒CODEHOP RT-PCR检测方法敏感、特异,可用于蚊类甲病毒感染检测.
关键词： 甲病毒 一致一简并杂合寡核苷酸引物 检测 -
辽宁省部分地区2006年虫媒病毒分离鉴定
目的 调查辽宁省虫媒病毒的种类及分布.方法 2006年8月在辽宁省沈阳市、营口市、盘锦市、锦州市和丹东市采集蚊虫标本,利用组织细胞培养分离病毒,对病毒分离物进行血清学和分子生物学鉴定.结果 5个市共采集蚊虫标本5410只,分离到8株阳性分离物,经鉴定其中3株(LN0684、LN0688、LN0689)为版纳病毒,1株(LN0636)为甲病毒属盖塔病毒,另外4株尚在鉴定.新分离的版纳病毒与我国此前的分离株处于同一个进化簇,核苷酸同源性91.2%～94.7%.新分离的盖塔病毒与韩国分离株(swine)在一个进化枝上,核苷酸同源性为99.2%,与俄罗斯分离株、中国大陆分离株及台湾分离株的核苷酸同源性在95%～99%之间.结论 2006年在辽宁省分离到3株版纳病毒、1株盖塔病毒和4株未知虫媒病毒.版纳病毒、盖塔病毒为辽宁省首次分离;盖塔病毒核苷酸同源性和韩国分离株近.
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抗甲病毒化合物高通量筛选模型的建立与应用
建立抗甲病毒化合物高通量筛选模型可为筛选和分析抗甲病毒药靶提供技术基础.本研究以含有分泌型荧光素酶(Gaussia luciferase,GLUC)报告基因标记的重组辛德毕斯病毒Ⅺ160-GLUC为分子基础,建立了抗甲病毒化合物的高通量筛选模型,并对感染复数、检测时间等参数进行优化.经过优化,筛选模型的Z'因子值可达到0.71,表明我们所建立的筛选模型具有较好的稳定性.应用该筛选模型对8080个五合一样品进行筛选,终获得19个具有抗甲病毒活性的阳性化合物.本研究所建立的抗甲病毒化合物高通量筛选模型及抗甲病毒阳性化合物的发现为抗甲病毒靶标相关的研究提供了新的思路和信息.
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XJ-160病毒为辛德毕斯病毒新亚型
XJ-160病毒是我国首次分离的辛德毕斯病毒,在对其全基因组核苷酸序列测定的基础上,对病毒基因组序列、病毒同源性和病毒系统进化等进行了较为详细的分析,结果表明:XJ-160病毒具有典型的甲病毒属辛德毕斯病毒的序列特征.该病毒nsp3蛋白基因中有11处缺失及两处插入(4517～5485),涉及90个核苷酸.核苷酸序列的系统进化分析表明,XJ-160病毒属于辛德毕斯病毒欧洲/非洲亚组.病毒全基因组核苷酸序列进化分析显示,XJ-160病毒是一株新的甲病毒或辛德毕斯病毒的新亚型.
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我国首次分离的辛德毕斯病毒(XJ-160病毒株)全基因组核苷酸序列测定
对我国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160病毒株全基因组核苷酸序列进行测定,阐明该病毒基因组与国外株的差异,了解其分子致病机理.测序结果显示,XJ-160病毒全基因组除5′末端帽子结构和3′末端多聚腺苷酸尾外共11626个核苷酸,编码3731个氨基酸.非结构基因的编码区长7464核苷酸(60nt～7523nt),编码2486氨基酸,翻译成四种非结构蛋白(nonstructural protein,nsp1-4).结构基因长3738核苷酸(7568～11306),编码1245个氨基酸,翻译成三种结构蛋白和两个小分子肽(capsid,E1-3、6k).病毒基因组5′末端和3′末端及结构基因和非结构基因之间分别有59个核苷酸、45个核苷酸和323个核苷酸的非编码区.核苷酸序列分析表明,XJ-160病毒具备典型的甲病毒属辛德毕斯病毒基因组特征,与标准辛德毕斯病毒AR339病毒株相比,核苷酸序列存在18%差异,氨基酸差异为8%.这是我国完成的第一株辛德毕斯病毒全基因组序列测定,序列已输入国际基因库(GenBank AF103728).
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海南省虫媒病毒分离物的初步鉴定
目的:鉴定海南省虫媒病毒分离物.方法:现场捕蚊,分离与鉴定虫媒病毒,主要方法为逆转录-聚合酶链反应等.结果:1995年从海南省琼中县大丰农场、三亚市立才农场、万宁县兴隆农场、乐东县尖峰林场及西沙捕获的4种蚊虫中分离到14株虫媒病毒,均可在C6/36细胞、Vero-E6细胞组织培养中增殖,并产生明显的病变;对酸、乙醚敏感,抵抗5-碘脱氧尿苷,属RNA病毒.结论:经血清学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)初步鉴定,有8株为黄病毒科病毒,6株为披膜病毒科甲病毒.
关键词： 黄病毒 甲病毒 逆转录-聚合酶链反应 -
我国从节肢动物中新分离的虫媒病毒
20世纪80年代以来在我国不同地区先后分离到14种虫媒病毒,其中甲病毒6种(辛德毕斯、基孔肯雅、盖塔、西方马脑炎、东方马脑炎和罗斯河病毒)、黄病毒3种(流行性乙型脑炎、登革热和蜱传脑炎病毒)、布尼安病毒3种(克里米亚一刚果出血热、巴泰和阿卡斑病毒)和呼肠孤病毒2种(东南亚十二节段RNA病毒和环状病毒),并有数十株病毒未确定种类.现就我国近几年新分离的虫媒病毒及其分布、媒介等方面的研究进展进行综述.
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甲病毒检测细胞株的构建及其功能鉴定
目的 构建和鉴定可用于甲病毒快速检测的工程细胞株.方法 以辛德毕斯病毒缺陷型复制子载体系统pVaXJ-EGFP-△NSP4为基础,利用慢病毒表达载体pCDH系统,获得含有绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因的慢病毒表达质粒pCDH-XJ-EGFP.使用脂质体转染法将质粒pCDH-XJ-EGFP和包装质粒pPACKHl Mix共转染HEK293T细胞,48 h、72 h收集慢病毒颗粒用于感染BHK-21细胞,经嘌呤霉素筛选获得用于蚊媒甲病毒检测的细胞系BHK-Alphavirus.结果 BHK-Alphavirus感染辛德毕斯病毒48 h后,可检测到EGFP的表达,表明BHK-Alphavirus能够用于外源甲病毒的检测.BHK-Alphavirus细胞感染甲病毒属中的辛德毕斯病毒(XJ-160和YN87448)、基孔肯雅病毒(SD08Pan)及盖塔病毒(HB0234)均可以检测到特异的绿色荧光,而被黄病毒属的乙脑病毒(P3)、4型登革病毒(P4)和布尼亚病毒属的塔希纳病毒(XJ0625)等其他正链RNA病毒感染后则检测不到绿色荧光.结论 BHK-Alphavirus细胞可用于蚊媒甲病毒的快速检测,且该检测方法特异性良好.
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非洲籍输入性基孔肯雅热一例的实验室诊断
基孔肯雅热是由基孔肯雅病毒引起,经伊蚊叮咬传播,以发热、关节疼痛、皮疹和轻度出血为主要特征的病毒性急性传染病.基孔肯雅病毒是单股RNA病毒,属于披膜病毒科甲病毒属.1952年研究人员发现基孔肯雅热在坦桑尼亚流行,并从严重关节炎患者血液中分离出基孔肯雅病毒.1956年,Ross[1]从急性期患者的血液及野外捕获的埃及伊蚊体内分离出基孔肯雅病毒.近年来,本病在东非海岸、印度洋岛屿、印度及东南亚地区流行,导致超过200 万人感染发病,且流行地区不断扩大,发病人数不断上升[2].
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海南岛不明发热病人血虫媒病毒分离鉴定及抗体检测
目的从海南岛不明发热病人血中分离和鉴定虫媒病毒,并在当地人群进行抗体检测,以了解南方地区虫媒病毒的感染情况. 方法采用微量法细胞培养对205份发热原因不明患者血标本进行病毒分离,应用生物学性状检测、间接免疫荧光试验(IFA)和血凝抑制试验(HI)等技术对分离病毒进行鉴定.采用IFA检测从当地人群血清中分离出的病毒的抗体水平.结果从发热早期患者血标本中分离出2株病毒,鉴定为甲病毒,命名为HF 7和HC 6.这2株病毒与8种甲病毒免疫腹水中的SIN的免疫腹水呈现高的血凝抑制滴度(分别为1∶160和1∶320),与SIN免疫腹水的交叉荧光效价高(分别为1∶320和1∶640),但HF 7和HC 6病毒的免疫腹水与8种甲病毒的血凝抑制试验和交叉免疫荧光试验无反应,表明HF 7和HC 6病毒虽与SIN病毒的免疫腹水血抑效价及荧光效价高,但HF 7和HC 6的免疫腹水与SIN病毒无抑制效价和免疫荧光效价.当地人群对这两株病毒感染的抗体阳性率分别为3.3%(15/451)和8.4%(38/451).结论 HF7和HC6为甲病毒的一个新种.海南岛人群存在甲病毒感染.
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云南省澜沧江下游地区人及动物血清虫媒病毒抗体调查
目的:对澜沧江下游地区的思茅和西双版纳两地州进行虫媒病毒抗体调查,了解当地虫媒病毒的流行情况.方法:采集人及动物血清,用ELISA和血凝抑制试验检测抗体.结果:发热病人血清中,乙型脑炎(JE)、登革3型(DEN3)、DEN4、基孔肯雅(CHIK)、辛德毕斯(SIN)、贝巴鲁(BEB)、雪鞋野兔(SSH)和巴泰(BAT)病毒抗体的阳性率依次为7.50%、5.00%、1.67%、3.33%、2.50%、1.67%、5.00%和4.17%;未查到DEN1、DEN2和寨卡(Zika)病毒抗体.正常人血清JE、墨累山谷脑炎(MVE)、库京(KUN)、DEN、圣路易脑炎(SLE)、科萨努尔森林病(KFD)、森林脑炎(RSSE)、兰加特(LAG)、波瓦生(POW)、马雅罗(MAY)、CHIK、SIN、委内瑞拉马脑炎(VEE)、西门利克森林病(SFD)和格塔(GET)病毒抗体阳性率依次为34.88%、、35.03%、20.81%、9.25%、1.78%、12.46%、4.76%、2.85%、2.49%、21.71%、11.03%、1.93%、2.49%、2.49%、3.20%.从恒河猴血清中检出DEN、KUN、RSSE、KFD、POW、LAG、CHIK和GET病毒抗体,阳性率以DEN4、KUN和RSSE为高.棕果蝠血清中查到JE、DEN4、RSSE、POW和LAG病毒抗体,JE的阳性率高.猪血清中查到JE、DEN和CHIK抗体.黄胸鼠血清检出JE、KFD、CHIK和SIN病毒抗体,JE的阳性率较高.结论:证实该地区不仅广泛存在着JE、DEN、CHIK、SIN和BAT病毒,还可能存在有其它甲病毒、蚊媒和蜱媒黄病毒以及布尼安病毒.
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甲病毒载体研究进展
甲病毒是一类能在宿主细胞的胞质内大量复制的RNA病毒.用外源基因替换结构蛋白基因的甲病毒载体,仍具有甲病毒的宿主感染谱广泛、能够自我复制、诱导被转染细胞发生凋亡等众多生物学特性,同时能够大量表达外源基因,激发机体产生高效的免疫反应,并不易与宿主基因组整合.甲病毒载体已被用于基因治疗和分子生物学领域的研究.
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从海南省人血清中检出甲属虫媒病毒HYM1抗体
1995年,从海南省立才蚊虫标本中分离到1株病毒,编号为HYM1.经理化、生物学性状及血清学鉴定表明HYM1与MAY病毒抗原性相近.应用间接免疫荧光法对海南省部分地区人血清标本共426份,进行了抗体检测.其中当地人血清标本226份,阳性17份,阳性率为7.08%.驻海南省部队人血清标本200份,阳性1份,阳性率为0.5%.
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两种甲病毒基因组序列的一步RT-PCR检测
目的通过对不同扩增条件的优化,建立两种马脑炎病毒的快速RT-PCR检测方法.方法根据东部马脑炎病毒和西部马脑炎病毒基因组相应序列设计引物,然后采用两步法及两种一步法分别对其基因组序列进行RT-PCR扩增,并用琼脂糖凝胶电泳进行观察.结果与结论三种方法均可从两种马脑炎病毒感染的乳鼠脑和细胞上清中扩增出单一的DNA片段,其大小与预期的相一致.与其他两种方法相比,本研究所建立的一步法更为简便快速、价格低廉,为进一步组装这些病毒的检测试剂盒奠定了基础.
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盖塔病毒研究状况
盖塔病毒(Getah virus,简称GETV)在分类上属于披膜病毒科甲病毒属成员,能在各种脊椎动物和节肢动物体内增殖[1].已证实该病毒可引起家畜的疾病,人群中也存在该病毒感染.根据血清动物流行病学研究,GETV在欧亚大陆至东南亚,远到东亚,太平洋岛屿和澳大利亚等地区都有分布[2].近年来在我国部分省区蚊虫中分离到GETV,表明该病毒在我国分布较为广泛.为掌握GETV的研究现状,我们收集相关文献资料,对该病毒的分子生物学特性、地理分布、宿主媒介及其临床特点等方面的研究进展作出综述.
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基孔肯雅热
1病原学基孔肯雅热的病原体是CHIKV,CHIKV属于披膜病毒科(Togaviridae)的甲病毒属西门利克森林病毒复合群(Semliki Forest Virus complex,SFV 复合群).
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硫酸肝素与甲病毒感染
硫酸肝素存在于细胞膜表面、基底膜及细胞外基质,是一种高度硫酸化的、带负电荷的多糖结构.研究表明辛德毕斯病毒等甲病毒可通过与细胞表面的硫酸肝素结合进入宿主细胞,完成对细胞的感染.提示细胞表面的硫酸肝素是甲病毒感染细胞的受体或共受体.
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两株甲病毒快速检测方法的建立
目的：建立一种快速检测甲病毒的通用方法。方法：在甲病毒3’非编码区(3-NTR)设计了一对引物，并运用RT-PCR技术对两株甲病毒进行了检测。结果：鹭山病毒(SAG)和辛德毕斯病毒(SIN)都扩增出约1.4kb片段。结论：初步建立了甲病毒的通用方法。
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RT-PCR法快速鉴定几种甲病毒感染
目的简单、快速地鉴定几种临床症状相似的甲病毒及黄病毒感染,并将它们加以简单的区分.方法从病毒培养细胞上清提取病毒总RNA,并用甲病毒特异性引物进行RT-PCR扩增,把扩增产物进行凝胶电泳.结果通过凝胶电泳,观察到甲病毒科的辛德毕斯病毒扩增片段大小为1 420bp,孔肯雅病毒为1630bp,罗斯河病毒病为1 650 bp,而属于黄病毒的西尼罗病毒和登革病毒无条带出现.结论RT-PCR法可简单、快速地初步鉴定及区分这几株临床症状相似的病毒感染.
