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神经干细胞与胶原蛋白-硫酸肝素生物支架生物相容性研究
目的:评价神经干细胞与胶原蛋白-硫酸肝素支架的生物相容性,探讨胶原蛋白-硫酸肝素支架作为中枢神经组织工程载体材料的可行性.方法:以冷冻干燥法制备胶原蛋白-硫酸肝素支架,体外培养新生小鼠海马神经干细胞.将神经干细胞与生物支架共培养,通过倒置相差显微镜、扫描电镜观察胶原蛋白-硫酸肝素支架内部结构和细胞生长状况.结果:制备的胶原蛋白-硫酸肝素支架材料具有纵行的、平行排列的微管结构.神经干细胞在支架上生长良好.结论:胶原蛋白-硫酸肝素支架与神经干细胞具有良好的生物相容性,有望作为中枢神经组织工程载体材料.
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嗅鞘细胞在硫酸肝素-胶原蛋白支架材料中复合的研究
目的:观察硫酸肝素-胶原蛋白支架材料与嗅鞘细胞的相容性.方法:以冷冻干燥的方法制备硫酸肝素-胶原蛋白支架材料.培养、纯化并鉴定嗅鞘细胞后,将Hoechst荧光标记的嗅鞘细胞复合于硫酸肝素-胶原支架材料中,荧光显微镜、扫描电镜及光镜下观察其在材料内部的空间排列形式.以MTT法检测嗅鞘细胞与硫酸肝素-胶原蛋白共培养时的生物活性.结果:以硫酸肝素复合胶原蛋白结合冷冻干燥技术制备的支架材料具有纵行的、平行排列的微管结构,嗅鞘细胞在支架材料微管内成线性平行排列,MTT法证明嗅鞘细胞与硫酸肝素-胶原蛋白材料共培养时保有高度的生物活性.结论:硫酸肝素复合胶原蛋白结合特定条件下冷冻干燥技术可以制备在组分和内部空间结构上高度仿生的新型神经组织工程支架材料,其与嗅鞘细胞有良好的相容性.
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蛋白质转导的研究进展
生物膜的脂质双分子层对极性强的蛋白质、DNA及高分子复合物是一个有力的屏障,使用具有临床应用价值的蛋白质等都必须克服这个障碍.研究发现,一些蛋白质上具有蛋白质转导区(PTD)的小片段,能够有效地通过生物膜,几乎进入所有细胞.以PTD为载体,通过非共价或共价结合,已成功地携带多种物质进入细胞或进入机体的组织器官.其机制可能与细胞膜上带负电荷的硫酸肝素有关.蛋白质转导在运送蛋白质、寡核苷酸或其他物质治疗病毒感染、特异性杀伤肿瘤细胞、神经退行性疾病等方面具有巨大的潜力.
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卡拉胶寡糖与 bFGF 的结合活性及其对乙酰肝素酶活性的抑制作用
为探讨卡拉胶寡糖作为硫酸肝素类似物的抗肿瘤和抗血管新生机制,以宫颈肿瘤细胞 HeLa 和人脐静脉内皮细胞 HUVEC 为研究对象,考察几种不同聚合范围的寡糖结合 bFGF 及抑制乙酰肝素酶活性的作用.发现卡拉胶寡糖对正常细胞和肿瘤细胞均表现出低毒特征.在低浓度下,具有结合 bFGF 并能抑制 bFGF 引起的细胞增殖能力,其中λ-卡拉胶寡糖(聚合度2～8)效果明显,在质量浓度为 20μg·mL-1 时,可达30%的抑制率.几种寡糖对乙酰肝素酶活性有不同趋势的抑制作用,在 HeLa 细胞中,λ-卡拉胶寡糖的抑制活性高;在 HUVEC 细胞中,聚合度在9～17的k-卡拉胶寡糖活性高.结果表明,卡拉胶寡糖的类硫酸肝素生物活性与其分子量大小、硫酸取代量有明显的关系,低分子量、高硫酸基取代是其高活性的关键.
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胶原蛋白-硫酸肝素生物支架植入猪脑内生物相容性研究
中枢神经损伤后的再生与修复一直是科学界的难题,目前的研究并没有取得具有临床意义的突破[1].随着成体神经干细胞的发现、材料技术和细胞培养技术的发展,组织工程学方法为神经损伤治疗带来了希望[2-3].组织工程的细胞支架材料首先必须具有良好的生物相容性.本实验探索胶原蛋白-硫酸肝素生物支架植入猪脑内的生物相容性.
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川芎嗪对骨髓移植小鼠骨髓中硫酸肝素表达水平的影响
我们通过观测小鼠同基因骨髓移植(BMT)后骨髓中硫酸肝素(HS)表达水平的变化，探讨HS在骨髓重建造血过程中的作用。我们曾观察到川芎嗪有促进小鼠骨髓造血重建的作用［1］，故以川芎嗪介入骨髓造血重建过程，探讨川芎嗪在此过程中对骨髓HS表达水平的影响，为寻找促进骨髓移植后骨髓重建造血的治疗方法提供科学依据。
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胶原蛋白-硫酸肝素神经生物支架材料的制备
背景:有报道胶原-氨基聚糖材料基体植入周围神经组织节段性损伤处,可以促进神经轴突修复再生.硫酸肝素是细胞外基质的重要组成部分.目的:制备胶原蛋白-硫酸肝素神经组织工程生物支架,观察其生物相容性并用于神经损伤的修复.方法:将胶原蛋白-硫酸肝素悬浊液冷冻干燥,通过显微物镜、扫描电镜观察内部孔隙结构,测量孔的大小.选取SD大鼠12只制备5 mm坐骨神经神经缺损模型,随机分为3组.硫酸肝素复合胶原支架移植桥接组、空白对照组(旷置)、正常对照组(自体神经移植).移植术后经神经功能学观形态学检测其修复疗效.结果与结论:胶原蛋白复合硫酸肝素支架材料具有纵行的、平行排列的微管结构,高度仿生神经的内部空间三维结构.组织学染色、电镜观察证实再生神经纤维成功地长入组织工程材料内.部分大鼠运动功能恢复良好.结果提示,胶原蛋白复合硫酸肝素材料组织相容性良好,可以促进神经的再生并可用于神经损伤的修复.
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胶原蛋白-硫酸肝素生物支架在猪脑内的生物相容性分析
背景:胶原蛋白-硫酸肝素支架与人体神经内部结构十分相似.目的:探讨胶原蛋白-硫酸肝素支架的体内生物相容性.方法:将40只小猪随机均分为两组,以距离前囟中线旁开1.0 cm为穿刺点,利用骨穿针进行纵向穿刺,至脑蛛网膜下腔,感到落空感后,将骨穿针缓慢拔除,观察组植入胶原蛋白-硫酸肝素支架,对照组不予处置.术后1,3,7,14,30 d对两组脑组织进行透射电镜观察、细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达检测.结果与结论:早期电镜观察发现,观察组支架周边有个别脑组织神经元受损情况,并出现髓神经纤维脱髓鞘变化,支架与脑组织交界处及支架内部存在阳性Caspase-3蛋白,但在远离支架周边脑组织则无阳性蛋白表达.从术后1 d开始,观察组支架周边脑组织出现个别脑细胞凋亡情况,至术后30 d无明显凋亡细胞,对照组也表现出相似的变化,观察组术后1,3,7,14 d细胞凋亡数量高于对照组(P< 0.05),两组术后 30 d细胞凋亡数量比较差异无显著性意义(P > 0.05).两组Caspase-3蛋白表达均处于较低状态,且观察组术后3, 7 d的Caspase-3蛋白表达高于对照组(P< 0.05),其余时间点比较差异无显著性意义.表明胶原蛋白-硫酸肝素支架在猪脑内具有良好的生物相容性.
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自体骨髓间充质干细胞外基质支架在软骨组织工程中的应用
1研究背景
1.1组织工程学的基本构成近年来，随着细胞生物学和生物材料科学的发展下红包，直接点就行组织工程学方法成为了修复软骨缺损的一种全新的治疗模式。
1.2细胞外基质材料的应用快速发展主要成分功能性和结构性蛋白，如胶原纤维、蛋白多糖、糖氨聚糖，有机的结合成超微结构供组织构建；细胞外基质表面的三肽精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸，及富含硫酸软骨素、硫酸肝素的；蛋白聚糖和CD44，在细胞黏附方面也有重要的作用；含有多种生长因子，如转化生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子等；具有良好的天然的生物降解性能(图1，2)。 -
硫酸肝素/胶原蛋白神经组织工程支架修复周围神经损伤
背景：神经组织工程支架材料必须具有轴向排列结构，才有利于再生轴突的定向生长，保证损伤神经获得有效修复和再生。目的：观察硫酸肝素/胶原蛋白神经组织工程支架修复周围神经损伤的效果。方法：制作硫酸肝素/胶原蛋白神经组织工程支架，观察支架内部结构，检测支架孔隙率；将许旺细胞接种于硫酸肝素/胶原蛋白神经组织工程支架上，观察细胞黏附性。切除32只大鼠左侧坐骨神经，随机分2组，每组16只，实验组于神经缺损处植入接种许旺细胞的硫酸肝素/胶原蛋白神经组织工程支架，对照组植入自体坐骨神经，植入后16周，进行有髓神经纤维直径、髓鞘厚度、有髓神经纤维密度及神经组织百分比及电生理检测。结果与结论：①神经组织工程支架由沿着轴向平行排列的微管组成，微管直径为180μm，支架孔隙率为91%；许旺细胞与硫酸肝素/胶原蛋白神经组织工程支架具有良好的生物相容性；②植入后16周，两组髓鞘厚度、有髓神经纤维密度、运动神经传导速度及潜伏期、感觉神经传导速度及潜伏期比较差异无显著性意义，实验组有髓神经纤维直径、神经组织百分比、运动神经与感觉神经波幅显著低于对照组(P <0.05)；③结果表明：硫酸肝素/胶原蛋白神经组织工程支架可有效修复周围神经损伤，但效果弱于自体神经修复。
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乙酰肝素酶蛋白表达与肝癌侵袭转移关系的研究
乙酰肝素酶（heparanase，HPSE）是一种葡糖苷酸内切酶，能特异性降解硫酸肝素多糖的硫酸肝素侧链，破坏细胞外基质和基底膜，乙酰肝素酶与肿瘤血管形成、侵袭转移密切相关。我们采用免疫组织化学法检测 HPSE 蛋白在肝细胞肝癌、癌旁肝组织及正常肝组织中的表达，探讨 HPSE 蛋白与肝癌临床病理特征的关系。
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遗传性多发性骨软骨瘤致病基因研究进展
遗传性多发性骨软骨瘤(hereditary multiple exotosis,HME)是一种常染色体显性遗传病,与EXT1和EXT2基因突变导致软骨生长异常有关.目前新突变位点的发现和相关研究进一步揭示了其遗传规律和特点.同时,分子学研究初步解释了其致病机制,提出了EXT基因突变导致硫酸肝素合成减少,终影响软骨细胞信号转导过程而致病的假说.此外,多项临床研究初步分析了表型-基因型的联系,为更完整的了解HME及指导临床实践提供了新的观点和思路.
关键词： 遗传性多发性骨软骨瘤 EXT基因 硫酸肝素 -
Syndecan-1和乙酰肝素酶在胃癌淋巴结转移中的相互作用
胃癌的侵袭和转移涉及多个步骤,其中穿越由细胞外基质和基底膜组成的屏障是必不可少的一步.该屏障主要由两种成分构成:一是结构蛋白,二是糖氨聚糖,后者的主要成分是硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG).乙酰肝素酶(HPA)基因编码的蛋白质是惟一降解HSPG硫酸肝素(HS)侧链的核苷内切酶[1].我们先前的研究显示,HPA mRNA表达与胃癌淋巴结转移有关,且可能通过与CD44v6和基质金属蛋白酶(MMP)-7的协同作用参与胃癌的侵袭转移[1].
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串珠素调节肿瘤血管生成的研究进展
串珠素(perlecan,PN)是细胞外基质(extracellularma-trix,ECM)中硫酸肝素类蛋白聚糖之一.由核心蛋白和4条硫酸肝素(heperin sulfate,HS)侧链组成,鼠类串珠素的分子量约为700 kD,其核心蛋白含5个功能区,分子量约390kD,串珠素核心蛋白的N端附着有3条长的HS侧链,核心蛋白功能区V上还有一个HS侧链的附着位点[1].
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硫酸肝素与甲病毒感染
硫酸肝素存在于细胞膜表面、基底膜及细胞外基质,是一种高度硫酸化的、带负电荷的多糖结构.研究表明辛德毕斯病毒等甲病毒可通过与细胞表面的硫酸肝素结合进入宿主细胞,完成对细胞的感染.提示细胞表面的硫酸肝素是甲病毒感染细胞的受体或共受体.
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恒定磁场与硫酸肝素对人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响
目的探讨恒定磁场与硫酸肝素对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制.方法体外观察硫酸肝素作用于人肝癌细胞系(HepG2)后的细胞增殖、凋亡效应和细胞ras基因表达的变化,并探讨其在恒定磁场作用下的相互关系.结果硫酸肝素能抑制细胞HepG2的增殖能力及其细胞ras基因蛋白的表达,并诱导其细胞凋亡率增加.同时,在恒定磁场作用下获得细胞增殖抑制与凋亡诱导的加强.结论硫酸肝素对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响与ras基因蛋白介导的信号传递作用有关;恒定磁场与硫酸肝素对人肝癌细胞增殖和凋亡具有协同作用.
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胶原蛋白-硫酸肝素生物支架植入猪脑内凋亡相关蛋白的表达及意义
目的 观察胶原蛋白-硫酸肝素生物支架植入猪脑内神经元凋亡及bax、bel-2表达水平,探讨胶原蛋白-硫酸肝素支架在猪脑内生物相容性.方法 清洁健康的体质量4～6 kg的小猪20头,分实验组和对照组,每组10头.实验组通过微创手术方法将生物支架植入猪脑组织内,对照组操作方法类似,但不予植入支架.术后1、3、7、14、30 d脑组织病理取材,TUNEL法检测凋亡细胞,SABC免疫组织化学方法检测bax、bel-2蛋白表达水平.结果 胶原蛋白-硫酸肝素支架成功植入猪脑内.术后1、3、7、14 d两组脑组织均出现少量凋亡细胞,bax、bcl-2蛋白低水平表达,而在30天均无明显表达.实验组与义寸照组比较,在3、7 d时期差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胶原蛋白-硫酸肝素支架与猪脑组织具有良好的生物相容性,可用于中枢神经组织工程.
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胶原蛋白-硫酸肝素生物支架生物相容性研究
目的 观察胶原蛋白-硫酸肝素生物支架的生物相容性,为其应用提供生物学依据.方法 以冷冻干燥法制备胶原蛋白-硫酸肝素生物支架,将支架埋植入大鼠体内,观察大鼠炎症、肝肾功能、免疫反应及支架体内降解情况.结果 实验组大鼠血清WBC、CRP、肝肾功能、体液免疫反应与对照组比较,差异无统计学意义;伤口愈合良好;支架在大鼠体内有所吸收.结论 胶原蛋白-硫酸肝素生物支架具有良好的生物相容性,可作为神经组织工程支架材料.
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硫酸软骨素、硫酸肝素对毛乳头细胞粘附及生长的影响
目的 探讨细胞外基质在毛囊生长发育中的作用，寻找毛乳头细胞（DPC）生长的调节因素。方法 用两步酶消化法分离培养DPC,并通过免疫组化α-平滑肌肌动蛋白（Actin）染色证实。测定硫酸软骨素A，硫酸软骨素C及硫酸肝素对DPC粘附及生长的影响。结果 两步酶消化法分离培养DPC效率高，纯度高，方法简单易行。硫酸软骨素A和硫酸肝素明显促进DPC粘附及生长，而硫酸软骨素C作用不明显。结论 某些细胞外基质可调节DPC的生长，从而影响毛囊的生长发育。
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Schwann细胞与硫酸肝素-胶原蛋白支架材料的复合
本研究目的是观测硫酸肝素-胶原蛋白支架材料对Schwann细胞的相容性,采用:(1)冷冻干燥法制备硫酸肝素-胶原蛋白支架材料,培养、纯化并鉴定Schwann细胞后,将Hoechst荧光标记的Schwann细胞复合于硫酸肝素-胶原支架材料中,荧光显微镜、扫描电镜及光镜下观察其在材料内部的空间排列形式;(2)以台盼蓝染色、MTF法检测Schwann细胞与硫酸肝素-胶原蛋白共培养时的生物活性.结果显示:作者制备的支架材料具有纵行的、平行排列的微管结构,Schwann细胞在支架材料微管内成线性平行排列,类似于神经基底膜与Schwann细胞形成的Bungner带;台盼蓝染色Schwann细胞死亡率仅6.47%,MTT法证明Schwann细胞与硫酸肝素-胶原蛋白材料共培养时保有高度的生物活性.本研究结果表明:以硫酸肝素复合胶原蛋白结合特定条件下冷冻干燥技术可以制备在组分和内部空间结构上高度仿生神经的新型神经组织工程支架材料,与Schwann细胞有良好的细胞相容性.
