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尼古丁对脐静脉内皮细胞蛋白激酶C和Ras蛋白活性及胞浆钙浓度的影响
为研究尼古丁对血管内皮细胞胞内游离钙、蛋白激酶C(PKC)和Ras蛋白的作用,用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度的变化,用γ-32P-ATP掺入法检测PKC活性,用GST-RBD沉淀并纯化活化的Ras蛋白和Western印迹杂交法检测Ras蛋白含量.观察到(1～5)10-4mol/L尼古丁使人脐静脉内皮细胞[Ca2+]i迅速增加,峰值约超过基础值50%～200%,钙通道阻滞剂尼莫地平可拮抗尼古丁的此种效应;10-4mol/L尼古丁作用1～12h后胞浆PKC活性明显降低; 而胞膜PKC活性则升高.10-4～10-3mol/L尼古丁作用于人脐静脉内皮细胞10～30min可使活化的Ras蛋白含量增加.以上结果提示尼古丁可使人脐静脉内皮细胞[Ca2+]i增加和活化内皮细胞的PKC及Ras蛋白.
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阿托伐他汀抑制大鼠心肌成纤维细胞钙调神经磷酸酶的表达
目的 探讨钙调神经磷酸酶(CaN)在心肌纤维化中的作用及阿托伐他汀(Ato)抗心肌纤维化的机制.方法 采用体外新生SD大鼠心肌成纤维细胞(CFs)培养,以醛固酮(Ald)诱导其增殖和胶原合成,并加入Ato干预,应用RT-PCR和Western blot分别测定CaN mRNA和蛋白表达,并观察加入焦磷酸法尼酯(FPP)和焦磷酸牛儿基牛儿酯(GGPP)分别干预Ato对RAS和RHO蛋白的抑制作用.结果 Ald促进CFs增殖和增加羟脯氨酸含量,同时CaNmRNA和蛋白表达均升高,而Ato显著缓解上述变化.Ald+Ato+FPP组的CaNmRNA和蛋白表达均高于Ald+Ato组.结论 Ato可通过CaN依赖的信号通路抑制Ald诱导的心肌纤维化,其作用与Ato通过甲羟戊酸通路抑制RAS蛋白活性有关.
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Ras蛋白活化与肿瘤发生多药耐药的研究进展
Ras蛋白的异常激活或表达升高可能导致肿瘤的发生,近10年来人们在Ras活化与肿瘤发生多药耐药(MDR)关系的研究方面取得了明显进展.Ras活化诱发肿瘤MDR的机制主要集中在三个方面:(1)Ras诱发P-糖蛋白高表达;(2)Ras破坏细胞增殖与凋亡的稳态平衡;(3)Ras诱发谷胱甘肽S-转移酶高表达.
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以调控Ras信号传导为靶标的抗肿瘤药物研究进展
Ras信号转导途径与肿瘤发生和生长密切相关,针对此信号通路重要靶点的药物设计是当前抗肿瘤药物研究的热点.本文综述了Ras蛋白及与其上下游信号转导途径相关的靶点及其抑制剂的研究现状,为新型抗肿瘤药物的研究设计提供参考依据.
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抗肿瘤新药法尼基转移酶抑制剂的研究进展
肿瘤的发生与细胞信号转导系统异常密切相关,针地信号转导通路中的关键酶设计的抑制剂是当前抗肿瘤药物开发的热点.法尼基转移酶是细胞信号转导系统中Ras蛋白翻译后修饰的关键酶.综述了近年来法尼基转移酶抑制剂的研究状况,重点阐述了部分重要化合物的构效关系,指出了法尼基转移酶抑制剂的发展前景.
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Ras分子信号蛋白调控睾丸间质细胞Cox7a2蛋白表达及共定位影响研究
目的:研究Cox7a2与Ras分子蛋白的共定位特点,探讨迟发性性腺功能障碍(late onset hypogonadism,LOH)的分子信号调控机制.方法:构建Cox7a2及Ras正义及点突变体荧光表达载体,鉴定后转染细胞,荧光显微镜观察Cox7a2及Ras蛋白的共定位特点.结果:Cox7 a2的线粒体定位能被Wt-Ras所干扰,N17-Ras突变体转染细胞,Cox7a2恢复线粒体定位,提示Cox7a2和N17-Ras之间可能存在相互作用.结论:Cox7a2对睾酮合成的调控可能与Ras相关信号通路有关,Ras可能是调控靶点之一.
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K-ras基因与大肠癌关系的研究进展
Ras基因的突变在大肠细胞癌变过程中起启动作用并是一个早期事件,突变产生具有致癌活性的p21蛋白,通过Ras信号转导通路,激活下游信号分子,持续刺激细胞生长、发育、增殖,引起细胞恶变.可以检测大肠癌手术标本,血清等K-ras基因的突变.
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法呢基转移酶抑制剂抗癌机理及筛选方法的研究进展
综述了法呢基转移酶抑制剂的抗癌机理、筛选方法和开发前景.法呢基转移酶抑制剂通过抑制癌细胞中功能异常的ras蛋白的法呢基化发挥作用.
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K-ras基因与结直肠腺癌关系研究进展
肿瘤的发生涉及癌基因的激活及抑癌基因的失活,K-ras基因是与肿瘤形成关系较为密切的一种癌基因,其功能异常能够影响细胞的生长、增殖、分化和凋亡等.研究已发现K-ras基因的突变激活是结直肠癌变过程中的重要事件之一.本文拟对K-ras基因的生物学特性、对细胞信号转导的影响及在结直肠腺癌形成与治疗中的作用作一综述.
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法尼基转移酶抑制剂在恶性血液病中的应用及研究
Ras蛋白在细胞信号转导、增殖及恶性转化中均发挥着重要作用.Ras蛋白通过其C端的焦磷酸法尼醋经法尼基化结合在细胞膜胞质面,在其发挥生物活性中起着至关重要的作用.Ras原癌基因与很多实体瘤及白血病存在密切联系,但现存的化疗方法却对其作用有限.法尼酰基转移酶抑制剂作为一种新的抑制原癌基因激活的药物,有可能在抑制Ras突变肿瘤的治疗中起到作用.
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RAS蛋白的信号转导途径
细胞信号转导系统紊乱是肿瘤细胞生长的重要特征之一,ras基因及其编码的Ras蛋白参与体内多种细胞信号转导途径而发挥作用,本文着重介绍ras参与的几条信号转导途径及作用机制.
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Ras蛋白在地塞米松体外诱导大鼠胚胎垂体生长激素细胞分化过程中的作用
目的:探究Ras蛋白在地塞米松体外诱导大鼠胚胎垂体生长激素细胞分化过程中的作用.方法:本课题利用大鼠胚胎垂体细胞的无血清原代细胞培养技术,在地塞米松诱导生长激素细胞分化的过程中,加入蛋白Ras的抑制剂Manumycin,利用免疫荧光、western-blot、放射免疫分析和MTT等技术对Ras蛋白在糖皮质激素体外诱导生长激素细胞分化中的作用进行研究.结果:地塞米松能够显著提高生长激素阳性细胞百分比和生长激素的含量(P＜0.01).加入不同浓度的Manumycin后,地塞米松诱导的生长激素阳性细胞百分比显著降低(P＜0.01),生长激素的含量亦出现降低(P＜0.05).结论:Ras蛋白在地塞米松诱导垂体生长激素细胞分化过程中发挥重要作用.
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滋肾育胎丸对复发性流产小鼠调节因子表达的影响
目的 观察滋肾育胎丸(菟丝子、人参、续断,等)对复发性流产(RSA)小鼠的大鼠肉瘤蛋白(RAS)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sVEG-FR-1)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等因子的调节作用,探讨其作用机制.方法 分别选取CBA/J雌性小鼠和DBA/2雄性小鼠,CBA/J雌性小鼠与BALB/c雄性小鼠,按雌雄2:1比例合笼交配,以检出阴栓者计为妊娠第0天,分别建立得到RSA模型和正常妊娠模型CBA×BALB/c小鼠;取造模成功的CBA/J×DBA/2小鼠30只,随机分为模型对照组、滋肾育胎丸组和黄体酮胶囊组,10只CBA×BALB/c小鼠作为正常妊娠对照组.各给药组连续给药15 d后,检测并计算各组小鼠子宫胚胎丢失率,HE染色观察小鼠蜕膜组织病理变化,免疫组化和real-time PCR分别检测RAS、VEGF、VEGFR-2、sVEGFR-1、MAPK的蛋白和mRNA表达.结果 滋肾育胎丸能够显著降低RSA小鼠的胚胎丢失率,改善RSA小鼠蜕膜组织的病理改变,能够通过降低RAS、VEGF、VEGFR-2的水平和提高sVEGFR-1的表达,调节小鼠蜕膜组织的血管生成及重铸.结论 滋肾育胎丸能够通过调节RAS、VEGF、VEGFR-2及sVEGFR-1等因子的表达,改善RSA小鼠胚胎丢失率和蜕膜血管新生.
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免疫荧光双标对肝细胞癌及癌旁异型增生肝细胞Ki-67与AMACR和RAS表达的定位分析
目的 对肝细胞癌(hepato celluar carcinoma,HCC)及其癌旁异型增生肝细胞Ki-67与α-甲酰基-辅酶A消旋酶(alpha-methylacyl-coenzyme A racemase,AMACR)和RAS表达进行定位分析,探讨AMACR的表达在HCC发生中的意义.方法 90例人HCC、90例癌旁肝组织制作组织芯片,以20例正常肝组织对照.用免疫荧光双标法,通过激光共聚焦显微镜,分析AMACR在肝细胞癌和癌旁异型增生肝细胞的表达与Ki-67、癌基因蛋白RAS表达的原位定位关系.结果 HCC组织中AMACR的表达显著高于癌旁肝组织,而且在HCC组织中AMACR的表达多呈弥漫性分布;HCC组织中显示Ki-67标记指数比癌旁组织高.结论 AMACR可能参与RAS信号在肝细胞异型增生和HCC早期发生的信号机制.
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吉西他滨纳米磁靶向药囊对肺鳞癌移植瘤抑制作用及癌基因Ras表达的影响
目的 研究吉西他滨纳米磁靶向药囊对肺鳞癌A2细胞株体内移植瘤的抑制作用及对癌基因Ras mRNA及Ras蛋白表达的影响.方法 选择SPF级雄性裸鼠60只.取处于对数生长期的的肺鳞癌细胞株A2细胞,用含有EDTA的胰酶消化后,悬液接种于在裸鼠右股外侧制作鳞癌移植瘤模型.20 d后选取肿瘤体积约为72.5 mm3的裸鼠作为实验动物模型,并分为5组:(1) NiTi合金支气管支架+吉西他滨纳米磁靶向药囊组;(2) NiTi合金支气管支架+吉西他滨组;(3)吉西他滨纳米磁靶向药囊组;(4)吉西他滨组;(5)未干预组.NiTi合金支气管支架于肿瘤中手术植入,纳米磁靶向药囊或化疗药物通过尾静脉注入,其中吉西他滨纳米磁靶向药囊为本研究自行制备,吉西他滨有效剂量均按45 mg/kg给予.未干预组尾静脉注射同量的生理盐水处理.均连续给药10 d.比较各组处理后的肿瘤生长情况.利用Western Blot和RT-PCR法分别检测治疗后癌组织中Ras蛋白及Ras mRNA的相对表达水平.结果 与未干预组相比,NiTi合金支气管支架+吉西他滨纳米磁靶向药囊组、NiTi支架+吉西他滨组、吉西他滨纳米磁靶向药囊组、吉西他滨组的瘤重和体积均明显减少(P＜0.05,P＜0.01),其抑瘤率分别为59.0％、38.0％、33.0％、28.0％.NiTi合金支气管支架+纳米磁靶向药囊组Ras蛋白、Ras mRNA相对表达水平低(P均＜0.01),与未干预组比较,NiTi合金支气管支架+化疗药物组、纳米磁靶向药囊组、化疗药物组Ras蛋白、Has mRNA相对表达水平均有所下降(P均＜0.05),但3组之间差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 纳米磁靶向药囊合并NiTi合金支气管支架可以显著抑制肺鳞癌A2细胞移植瘤的生长,下调癌基因Ras mRNA和Ras蛋白的表达,诱导肿瘤细胞凋亡.
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以ras信号通路为靶标的抗肿瘤治疗研究进展
研究发现大约30%的人类肿瘤存在ras基因突变,且多种肿瘤均检测到p21Ras过表达,表明ras基因突变和p21Ras过表达确实与恶性肿瘤的发生有关.因此,针对ras蛋白的肿瘤靶向治疗也成为肿瘤治疗学的研究热点.本文将以ras信号通路为靶标的抗肿瘤治疗研究综述如下.
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中耳胆脂瘤组织中的Ras蛋白的表达及病理意义
目的 观察Ras蛋白在继发性中耳胆脂瘤组织中的表达活性及其病理意义.方法 32例胆脂瘤上皮标本和12例正常面部表皮标本,免疫组织化学法(SP法)分别检测Ras蛋白表达水平,并应用HPIAL-2000高分辨图象分析系统进行半定量分析,比较不同组织中的Ras活性表达差异.结果 Ras蛋白的免疫阳性染色物呈棕黄色颗粒.在胆脂瘤上皮细胞,阳性反应物位于胞膜者28例(28/32),同时位于胞膜、胞浆者2例(2/32),仅存在于胞浆者2例(2/32).在正常表皮细胞,阳性反应物主要位于胞膜,以基底层细胞着色为主.两组的阳性反应物平均吸光度(A值)分别为0.826和0.438,组间差异具有统计学意义(P＜0.001).结论 继发性中耳胆脂瘤上皮组织中Ras蛋白的表达活性明显升高,提示胆脂瘤上皮具有高度的增殖活性.
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突变型Ras蛋白表达与食管癌复发的相关性分析
目的：分析突变型 Ras 蛋白表达与食管癌复发的相关性。方法采用免疫组化 S-P 法检测65例食管癌（复发组43例和未复发组22例）手术标本中突变型 Ras 蛋白的表达情况。结果复发组 Ras 蛋白阳性表达率是72.09%（31/43），未复发组是18.18%（4/22）（P <0.05），且其表达与分化程度有关。结论突变型 Ras 蛋白检测可作为预测食管癌术后是否复发的参考因素。
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Ras蛋白在脑胶质瘤组织中的表达及意义
目的 探讨Ras蛋白在脑胶质瘤组织中的表达及与脑胶质瘤发生发展的关系.方法 应用免疫组化法检测56例脑胶质瘤组织中Ras蛋白的表达情况,并以正常脑组织和胶质细胞反应性增生组织作对照.结果 Ras蛋白在脑胶质瘤组织中高表达,且在高级别的脑胶质瘤组织中表达更高,而在正常脑组织和反应性胶质细胞增生组织中不表达.结论 Ras蛋白可能在脑胶质瘤的发生发展过程中起促进作用.
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内镜下Lugol液染色联合ras蛋白检测对早期食管癌诊断的研究
目的 探讨内镜下卢戈氏(Lugol)液染色联合ras蛋白检测对早期食管癌的诊断价值.方法 将胃镜下有可疑食管病变的120例随机分为染色组和对照组,各60例.用复方碘溶液(Lugol)对染色组进行食管黏膜染色检查,并于不染色或淡染色区进行病理活检,行ras蛋白检测;对照组不行碘染色,仅根据临床经验进行病理活检.结果 染色组不染色或淡染色38例,活检发现早期食管癌10例(16.67%),中重度异型增生12例(20.00%);对照组发现早期食管癌5例(8.33%),中重度异型增生6例(10.00%),两组食管癌诊断率比较差异有统计学意义(P<0.05).在所有59例活检组织中,ras蛋白阳性18例(30.51%),其中中重度不典型增生和鳞癌组ras蛋白表达明显高于对照组(P<0.01).结论 通过染色内镜对高危易感人群进行筛检,对上述检查结果阳性患者行内镜下取活组织病理检查,同时进行ras蛋白分析,可以提高早期食管癌的诊断率.
