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云南省狂犬病病毒糖蛋白全编码区序列特征研究
目的 测定云南省狂犬病病毒糖蛋白全编码区基因序列,阐明它们的分子生物学特征.方法 用直接免疫荧光法进行病毒抗原检测,对阳性标本提取病毒RNA,用逆转录聚合酶链式反应对病毒糖蛋白基因进行全序扩增,并对目的基因核苷酸和氨基酸进行同源性和进化树分析以及氨基酸位点分析.结果 在云南省获得18株狂犬病病毒糖蛋白全编码区基因序列,它们的核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性分别为98.2％ ～99.9％和97.3％ ～99.8％,与国内外参考株核苷酸序列和推导氨基酸序列的同源性分别为85.7％ ～ 99.9％和93.1％ ～99.8％.进化分析表明,云南流行株分别与我国南方及东南亚流行株亲缘关系较近,但云南株间进化关系较为复杂,可分为六个进化亚群.它们的主要抗原性、致病性、毒力及糖基化等功能位点均未发生明显改变.结论 云南狂犬病病毒流行株具有多样性特点,与省内外、境内外及省内不同地区间犬类流动并传播该病毒相关.云南株狂犬病病毒糖蛋白重要功能位点未发生变异,仍然保持其特有的抗原性和毒力等特征.
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金湖县1999～2003年狂犬病疫苗免疫效果分析
目的了解人群接种狂犬病疫苗后机体血清学免疫效果.方法对金湖县1999-2003年狂犬病病毒抗体检测结果进行统计分析.结果狂犬病病毒抗体总阳性率为94.16%,各年间血清学免疫效果不同;注射浓缩苗的阳性率低于注射精制苗的标本;不同季节阳性率不同,春夏季低于秋冬季;不同性别之间血清学免疫效果差异无显著性;各年龄组血清学免疫效果不同,小于10岁年龄组阳性率高,70岁以上年龄组阳性率低;青少年组、中年组、老年组三者中,中年组阳性率低.结论国产狂犬病疫苗质量比较稳定,免疫效果可靠,而且精制苗的保护作用更为明显.
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桂林市2002年27例狂犬病流行病学调查分析
狂犬病是一种人畜共患的急性传染病,人被带有狂犬病病毒的犬、猫等肉食动物咬伤而得病.目前缺乏特效治疗方法,病死率极高几乎达100.00%.对人类健康构成了严重威胁.桂林市2002年发生狂犬病27例,全部死亡,占全市因传染病死亡人数(46例)的58.70%.为了控制本病在我市的流行,本文对27例狂犬病在我市的流行特征进行分析,并提出控制策略和措施.
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中国狂犬病病毒的分群和进化特征
目的 为全面掌握我国狂犬病病毒的遗传进化特征和分群特点.方法 对GenBank上具有明确时间、地域及宿主信息的中国街毒株G基因全序进行汇总,并结合本实验室获得的中国流行株G序列,利用BEAST软件,进行系统的时间进化分析.结果 中国狂犬病流行株G基因的时间进化分析显示,我国流行株明显分为6群:ChinaⅠ群是我国的绝对优势群,数量占总数的80％以上,分布于19个省(自治区、直辖市)；ChinaⅡ群,包括来自7个省(自治区、直辖市)的49个流行株；ChinaⅢ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ群数量较少,分布地域也较为局限.中国流行株的近共同祖先(TMRCA)可追溯至392年前.结论 ChinaⅠ群是我国目前优势毒株群,同时应注意防范ChinaⅡ群和ChinaⅣ群野生动物来源的狂犬病流行.
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2012-2015年云南省狂犬病病毒糖蛋白基因进化特征分析
目的 了解云南省2012-2015年35株狂犬病病毒(RABV)糖蛋白(G)基因的进化特征及流行病学特点.方法在云南省狂犬病流行区采集可疑犬脑组织以及狂犬病患者脑组织和唾液标本,用直接免疫荧光法进行病毒抗原检测,阳性标本提取病毒核酸,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增RABV的G基因序列,用MEGA 5.0软件邻接法(NJ)进行系统进化树分析.结果 经RT-PCR和序列测定获得2012-2015年云南省35株RABV的G基因序列,并与2006-2011年获得的云南省11株RABV及邻省和东南亚地区的15株RABV的G基因序列进行系统进化分析.结果 表明,云南省46株RABV中,除2006年的Tc06株属于China-Ⅵ进化群外,其他45株均属于China-Ⅰ进化群.云南省China-Ⅰ进化群流行株在2006-2015年间每年均有分布,其中,2006-2011年10株,2012-2015年35株,分布于云南省10个州(市)并与来自四川、贵州和湖南省的China-Ⅰ进化群病毒株的进化关系为接近.China-Ⅵ(Tc06)则与缅甸、老挝和越南的东南亚进化群病毒株亲缘关系近.结论2012-2015年,RABV China-Ⅰ进化群在云南省狂犬病流行区广泛分布,属云南省主要进化群并具较强的传播速率,期间云南省未再发现China-Ⅱ、China-Ⅲ和China-Ⅵ等进化群病毒株的流行.
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浙江省台州市两株狂犬病病毒流行株的基因序列分析
目的 分析浙江省台州市2株狂犬病病毒核蛋白及糖蛋白的基因序列,了解狂犬病病毒野毒株与人用及兽用狂犬病疫苗株间的差异.方法 以免疫荧光法检测2008年采自台州市的144只犬脑标本,以RT-(nested)PCR法扩增病毒核蛋白及糖蛋白全基因,克隆测序后以生物信息学软件进行遗传特征分析.结果 检测到2株狂犬病病毒阳性样品,序列分析表明两样品所携病毒均为基因1型狂犬病病毒,所携病毒的N基因核苷酸及氨基酸同源性均为100%,G基因核苷酸和氨基酸同源性分别为99.8%和99.4%.所携病毒与CTN疫苗株核苷酸同源性较高,N基因与G基因分别为88.8%和85.9%～86.1%,两样品所携病毒与Hep-Flury疫苗株的核蛋白氨基酸同源性高,为97.6%,CTN次之,为97.1%,与CTN糖蛋白氨基酸同源性较高,为92.3%～92.5%.与诸基因1型狂犬病病毒参考株相比,两样品所携病毒与浙江温州Wz0(H)、衢州株ZJ-QZ及印度尼丙亚株病毒同源性高.系统发育分析表明XY20及JJ22与浙江温州Wz0(H)、衢州株ZJ-QZ以及印度尼西亚株、疫苗株CTN,以及泰国与马来西亚株进化关系近,而与疫苗株aG、PV、ERA,及标准攻击毒CVS株等进化关系较远.结论 两份阳性犬脑所携狂犬病病毒是基因1型狂犬病病毒,但无论是N基因还是G基因的核苷酸序列,以及推导出来的氨基酸序列与已知的1型狂犬病病毒株及疫卣株存在差异.
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湖南省疑似狂犬病病例皮肤组织标本首次检出狂犬病病毒
目的 对疑似狂犬病病例标本进行狂犬病病毒抗原检测,为临床病例诊断提供实验室依据.方法 对疑似病例组织标本(皮肤、角膜、脑组织等)运用直接免疫荧光实验法检测狂犬病病毒抗原.结果 在送检的皮肤、角膜、脑组织中,皮肤、脑组织狂犬病病毒抗原阳性,角膜阴性.结论 在疑似狂犬病病例的背部皮肤毛囊组织中首次检出狂犬病病毒,填补了湖南省疑似狂犬病病例皮肤标本实验室诊断的空白,为狂犬病疑似病例的早期实验室诊断提供了经验和依据.
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浙江省丽水山区134份犬脑组织狂犬病病毒抗原检测
目的 对浙江省丽水市山区犬脑组织标本进行狂犬病病毒抗原检测,了解犬狂犬病毒感染状况.方法 收集丽水市山区狂犬病和疑似狂犬病犬以及外观健康犬脑组织标本134份,用直接免疫荧光试验(DFA)检测狂犬病病毒抗原,确定阳性标本.结果 134份犬脑组织标本印片DFA检测9份为阳性,占所检标本的6.72%(9/134),其中外观异常并攻击人/犬导致人或犬间疫情的犬脑组织标本8份,均阳性;外观正常犬脑组织标本共126份,1份阳性,阳性率0.79%(1/126).结论 在丽水市首次用免疫学方法进行狂犬病病毒的实验室检测,狂犬病病毒在丽水山区狂犬病疫区的犬间相互传播,犬狂犬病疫情存在扩散的现象.
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狂犬病宣传要点
卫生部确定今年狂犬病日的宣传主题是"动员全社会,共同关注狂犬病".World Rabies Day 2009:Awareness is the Best Defense against Rabies一、狂犬病一般知识狂犬病俗称"疯犬病",是由狂犬病病毒引起的人兽共患的中枢神经系统传染病,多见于犬、猫等动物.人多因被病兽咬伤而感染,以恐水、畏光、吞咽困难、狂躁等临床表现为主要特征,病死率高达100%.根据<中华人民共和国传染病防治法>规定,狂犬病在我国为乙类传染病.
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我国狂犬病病毒及其传播流行规律
狂犬病病毒为单股不分节段的负链RNA病毒,病毒基因组由11928-11932个核苷酸组成,依次排列着N、P、M、G和L5个狂犬病病毒的结构基因,其长度分别为1 424、991、805、1675、6475个核苷酸,分别编码核蛋白(NP)、磷蛋白(NSP)、基质蛋白(MP)、糖蛋白(GP)和转录酶大蛋白(LP).
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犬咬伤患者的心理分析及护理
狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒引起的-种人畜共患的中枢神经系统的急性传染病,也是一种自然疫源性或动物源性传染病,人主要通过病兽或带病毒动物咬伤、抓伤和舔舐黏膜而感染,目前尚无治疗药物,一旦发病,几乎无救,死亡率100%,且发病时极为痛苦.先后接诊千余例犬咬伤患者,在护理观察中发现,许多被犬咬伤的患者除了肉体上的痛苦外,心理变化也十分复杂,有些人对预防接种人用狂犬疫苗产生种种顾虑或不以为然,在此情况下,运用心理分析及心理护理方法,有效地消除顾虑,使其愉快地接受疫苗接种,从而有效地预防狂犬病.
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狂犬病病毒及分子流行病学研究进展
狂犬病病毒可引起的人和动物急性致死性中枢神经系统感染.目前,狂犬病病毒属可分为7个基因型:基因1型,RABV;2型,LBV;3型,MOKV;4型,DUVV;5型,欧洲蝙蝠狂犬病病毒1(EBLV-1);6型,欧洲蝙蝠狂犬病病毒2(EBLV-2);7型,澳大利亚蝙蝠狂犬病病毒(ABLV).引起人类狂犬病的病原主要是基因1型,其他基因型为狂犬病相关病毒.本文就狂犬病病毒的基因结构、血清型和基因型、致病性、分子流行病学等方面的研究进展作一综述.
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狂犬病毒的分子生物学研究
狂犬病毒(rabies virus)是狂犬病的病原体,是一种包膜病毒,在分类学上属于弹状病毒科狂犬病病毒属.根据血清学和抗原性的关系,狂犬病毒分为4个血清型[1].血清Ⅰ型由经典的狂犬病毒组成,包括野毒株和固定株,血清Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型统称为狂犬病相关病毒.近年来,随着分子生物学技术的发展,在狂犬病毒的基因组结构、基因组复制、转录和调控等方面积累了丰富的资料,笔者就狂犬病毒分子生物学方面的研究进展进行了综述.
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浙江省狂犬病新发疫源地调查及其流行特征
狂犬病是一种人畜共患的急性传染病.人被带有狂犬病病毒的犬、猫等肉食动物咬伤而得病,病死率极高,几乎达100%.2000年12月9日温州市泰顺县发生首例狂犬病病人,至2001年底全市共发生狂犬病病人10例,全部死亡.
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暴露前接种维尔博狂犬病疫苗的免疫原性及安全性观察
人暴露狂犬病病毒后理想的处置原则是:伤口处理+注射抗狂犬病血清+接种狂犬病疫苗.但面对如此严重的致死性疾病,暴露后接种比暴露前免疫显得被动,因此,采取暴露前免疫既主动,也非常必要.暴露前接种狂犬病疫苗的预防效果国外已有相关报道,我们通过对接触狂犬病病毒有高度风险的人群实施暴露前接种狂犬病疫苗,用小鼠中和试验(MNT)方法测定其血清抗体滴度和观察接种后反应,评估维尔博狂犬病疫苗的免疫原性和安全性.
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中国不同地区狂犬病病毒种群分布的差异
目的 明确我国不同地区流行的狂犬病病毒种群类别及其流行特征.方法 汇总GenBank数据库所有中国狂犬病流行株的N、G和全基因组序列以及国家狂犬病实验室新测定毒株序列,分别构建N基因和G基因种系发生树,明确每个毒株的种群归属.统计各地区流行株的种群类别及不同种群的毒株数量.结果 全国共流行6个毒株群(China Ⅰ ～Ⅵ),云南和湖南是我国大陆种群丰富省份,均有多达4个群流行;河南、福建等6省份均有3个毒株群流行;上海、江西等8省份皆流行2个病毒种群;北京、天津等14省份目前只监测到1个毒株群流行.优势毒株群China Ⅰ已蔓延至我国东北部和西部地区,共计覆盖25个省份;ChinaⅢ群近年在内蒙古、新疆地区的野生动物中流行且溢出至家畜中;ChinaⅣ是青海、西藏地区的流行种群,同时流行于内蒙古、黑龙江地区的野生动物中.结论 我国不同地区狂犬病病毒种群类别和数量差异明显.
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浙江省不同宿主来源狂犬病病毒N基因分子特征分析
目的 测定浙江省不同宿主(人、鼬獾、犬)来源的狂犬病病毒街毒株N基因序列,分析病毒遗传变异特征及其与流行的关系.方法 采用直接免疫荧光试验和反转录聚合酶链式反应检测狂犬病病毒阳性标本N基因核苷酸序列,利用生物信息学软件分析基因序列和编码蛋白.结果 共获得浙江省2个人源、5个鼬獾源和11个犬源狂犬病病毒街毒株N基因核苷酸序列,18个核苷酸和氨基酸序列同源性在89.7％～ 100.0％和98.4％～ 100.0％,N蛋白一级结构上绝大部分为稳定区域,编码基因的核苷酸变异多为无义突变,系统发育分析显示18个街毒株均属于传统的基因1型.结论 浙江省不同宿主来源狂犬病病毒的流行具有地域性特征,同类宿主动物病毒株或来自同一县域/相邻县域的毒株在地理位置上为近缘,但人源株病毒更具有复杂性.浙江省狂犬病病毒街毒株的流行具有通过犬向鼬獾和人传播,并在犬、鼬獾中跨区域循环传播的特点.
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狂犬病病毒浙江街毒株糖蛋白基因序列分析
目的 测定狂犬病病毒浙江株(鼬獾源和犬源)糖蛋白(GP)基因组全序列,从分子水平比较狂犬病病毒浙江株与其他地区代表性街毒株和疫苗株GP之间的差异.方法 乳鼠接种分离狂犬病病毒,RT-PCR反应测定狂犬病病毒浙江株GP基因核苷酸序列,并进行序列和编码蛋白的比较分析.结果测序获得浙江5株鼬獾源狂犬病病毒和9株犬源狂犬病病毒GP基因序列,全长1575个核苷酸,编码524个氨基酸.浙江病毒株与其他地区街毒株、疫苗株核苷酸和氨基酸序列相似性在82.3%～99.9%和85.1%～99.8%之间,种系分析显示浙汀株均为基因1型,GP编码蛋白无重组,主要抗原位点未出现较大的变异.结论 对GP基因一级结构综合分析表明,在某些区域存在优势抗原表位的可能性较大,可能出现潜在的蛋白质抗原决定簇,浙江株GP基因变异较小,与国内其他地区流行的代表性街毒株相似,但高于其他疫苗株,在基因结构及种系进化关系上存在一定的距离.
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HEP-Flury株病毒辅助质粒包装CTN株病毒基因组拯救狂犬病病毒
目的 以CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒(pCTN-GFP)和HEP-Flury株病毒N、P、L辅助质粒共转染拯救具有活性的CTN株重组狂犬病病毒(CTN-GFP).方法 将CTN株狂犬病病毒全长基因组分4段进行扩增,体外连接扩增片段并克隆入表达载体中,构建CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒,基因组ψ基因被标识基因GFP取代,通过与HEP-Flury株病毒N、P、L3个辅助质粒共转染BHK-21细胞,拯救能够稳定表达GFP的重组病毒CTN-GFP.结果 成功扩增全长基因组的4个基因片段,并将其克隆入表达载体,构建了CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒pCTN-GFP,经酶切鉴定和序列测定证明pCTN-GFP为正确克隆,可直接用于病毒拯救.将pCTN-GFP与HEP-Flury株病毒辅助质粒共转染BHK-21细胞4d后,成功拯救出CTN株重组狂犬病病毒,重组病毒能够表达标识基因GFP,荧光显微镜下可直接观察到标识基因GFP的表达,设计跨GFP和L基因的特性引物对重组病毒进行RT-PCR检测,结果证明此病毒是从克隆的质粒中拯救的重组病毒.结论 HEP-Flury株病毒的结构蛋白能够包装并转录CTN株病毒的基因组RNA.
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狂犬病病原学特点及分型研究
狂犬病病毒属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病病毒属(Lassavirus),能感染人类引起人的狂犬病,表现为急性、进行性、几乎不可逆转的脑脊髓炎,因其有恐水的临床特征,又称恐水症(hydrophobia).狂犬病病毒主要通过破损的皮肤或黏膜侵入人体,经神经末梢上行进入中枢神经系统导致致死性的感染.
