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泉州市2002-2003年急性弛缓性麻痹监测系统评价
泉州市自1992年建立急性弛缓性麻痹(AFP)病例监测系统以来,敏感性、及时性、完整性逐年提高.随着消灭脊髓灰质炎(以下简称脊灰)各项措施的进一步实施和落实,泉州市已连续9年未发现脊灰野毒株病例.为维持无脊灰状态,进一步完善本市AFP监测系统,不断提高工作质量,现将2002-2003年该系统运转情况分析、评价如下.
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红河州1995-1999年急性弛缓性麻痹病例监测分析
我州自1994年建立急性弛缓性麻痹(AFP)病例监测系统以来,敏感性、及时性、完整性逐年提高.15岁以下儿童AFP病例报告发病率连续4年达到1/10万以上指标,并在加强常规免疫的同时,开展了7次14轮脊髓灰质炎疫苗强化免疫活动,有效地阻断了脊髓灰质炎野毒株的传播.随着消灭脊髓灰质炎各项措施的进一步实施,我州已连续8年未发现脊髓灰质炎野病毒病例.为进一步完善我州AFP病例监测系统,总结经验,找出薄弱环节,为消灭脊髓灰质炎证实工作提供科学依据,现将我州1995-1999年AFP病例监测情况分析如下.
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全球对脊髓灰质炎病毒2型野毒株传播采取的阻断措施
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狂犬病毒的分子生物学研究
狂犬病毒(rabies virus)是狂犬病的病原体,是一种包膜病毒,在分类学上属于弹状病毒科狂犬病病毒属.根据血清学和抗原性的关系,狂犬病毒分为4个血清型[1].血清Ⅰ型由经典的狂犬病毒组成,包括野毒株和固定株,血清Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型统称为狂犬病相关病毒.近年来,随着分子生物学技术的发展,在狂犬病毒的基因组结构、基因组复制、转录和调控等方面积累了丰富的资料,笔者就狂犬病毒分子生物学方面的研究进展进行了综述.
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2014年吉林省水痘-带状疱疹病毒基因特征分析
目的 分析吉林省水痘-带状疱疹病毒(VZV)野毒株的基因型别,区分疫苗株与野毒株.方法 选择2014年1-12月在吉林省收集的13份疑似水痘患者的疱疹液或咽拭子样本.提取样本DNA,采用DNA PCR扩增病毒基因组的15个开放阅读框(ORF),结合单核苷酸多态性(SNP)法确定病毒株的基因型别;用PCR-限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)方法区分野毒株与VZV减毒活疫苗(v-Oka疫苗株).整理序列资料,从GenBank数据库下载VZV各基因型参考株的序列资料,采用MEGA5软件进行基因序列对比分析.结果 13份疑似水痘患者的疱疹液或咽拭子样本中,5份来自男性,8份来自女性,患者年龄为(16.69±5.48)岁,范围为11~27岁,出疹后采样日期为0~3 d.13份疑似样本中,8份为VZV阳性.SNP分析显示,8份阳性样本均来自Clade 2遗传支;与v-Oka疫苗株相比,8份样本在SNP 18082位点上均发生了T>C的同义突变.PCR-RFLP方法区分野毒株与疫苗株结果显示,8份临床样本均为野毒株(Pst Ⅰ +BgⅡ+SmaⅠ-),无疫苗相关病例.结论 吉林省流行的水痘-带状疱疹病毒均属Clade 2遗传支,且均为野毒株.
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青海省1994~1999年急性弛缓性麻痹病例流行病学分析
1994~1999年共报告脊髓灰质炎急性弛缓性麻痹病例113例,其中年龄小的5个月,大的13岁,年龄不详者2例。4岁以下儿童 92例,占病例总数的82.9%;5~9岁12例,占病例数的10.8%;10~14岁7例,占病例数的6.3%。男性65例,女性48例,男女之比为1∶0.74。病例分布在全省30个县(区),占全省总县(区)数的63.83%。大通县14例,乐都县14例,平安县9例,互助县8例,湟中县7例,循化县6例。以地(市)为单位,病例相对集中在西宁市(26.55%)及海东地区(46.02%)。 1994~1999年报告病例数分别为4、21、21、22、22、23例,共113例,报告发病率(1/10万)分别为0.27、1.38、1.33、1.33、1.31、1.35,总报告发病率为1.17/10万。 除1994年外,1995~1999年共采集粪便标本109份,合格粪便采集率为74.3%。共分离出19株病毒,阳性率为17.43%,其中脊髓灰质炎病毒6株,13株为其他肠道病毒。经国家实验室复核鉴定Ⅱ型、Ⅲ型为疫苗相关株,Ⅰ型为非本土野毒株。 我省虽然经过了4次强化免疫和常年的基础免疫,在这113例急性弛缓性麻痹病例中仍有14例从未进行过脊髓灰质炎疫苗的免疫。尽管我省在急性弛缓性麻痹病例监测系统的敏感性、及时性和完整性方面取得了一定的成绩,但在后的证实阶段出现了1名脊髓灰质炎野毒株(非本土)病例。这告诫我们,我省的计划免疫工作,在全面提高并维持高质量监测的同时,必须以高危地区为重点,进一步加大工作力度。
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运用限制性片段长度多态性分析方法鉴别麻疹疫苗株和野毒株病毒
目的 应用和验证快速鉴别麻疹疫苗株与野毒株病毒的方法.方法 采用逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,RT-PCR-RFLP)方法,对四川省2009~2011年分离的麻疹疫苗株和野毒株病毒进行鉴定,同时与序列分析进行对比验证.结果 5株RT-PCR扩增阳性产物,经AflⅡ酶切后,1株麻疹疫苗株病毒被切成两个片段,分别为287碱基对(Base Pair,bp)和151bp;4株麻疹野毒株病毒均不能被Afl Ⅱ酶切,仍呈单一条带.结论 RT-PCR-RFLP是一种快速、简便的鉴别麻疹疫苗株与野毒株病毒的方法.
关键词: 麻疹病毒 疫苗株 野毒株 逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析 鉴别 -
中国麻疹病毒疫苗株与野毒株鉴别方法的建立
目的 研究建立一种简便快速的鉴别中国麻疹病毒疫苗株与野病毒的方法.方法 在血凝素(Hemagglutinin)蛋白基因(H基因)上,寻找能将中国麻疹病毒疫苗株区别于野毒株的限制性内切酶酶切位点,并在包含此酶切位点的基因片段上设计逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)引物,同时对所建立的RT-PCR方法进行敏感性和特异性实验证明,对RT-PCR产物利用限制性片段长度多态性分析方法(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)进行酶切鉴定.结果 该一步法RT-PCR方法比较敏感,至少能够检测4.64 TCID50(50%组织培养感染剂量,Median Tissue Culture Infective Dose)麻疹病毒.而非麻疹病毒RT-PCR结果均未见阳性条带,说明RT-PCR方法特异.PCR产物经Afl Ⅱ酶切作用后,中国麻疹病毒疫苗株沪191与长47PCR产物均能被切成两个片段,分别为287bp和151bp,2株麻疹野病毒代表株均不能被Afl Ⅱ酶切.结论 新建立的RT-PCR-RFLP是一种快速、简便的鉴别中国麻疹病毒疫苗株与野毒株的方法.
关键词: 麻疹病毒 疫苗株 野毒株 逆转录-聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 -
杭州市水痘-带状疱疹病毒流行株基因型特征分析
目的 了解杭州市水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)流行株基因型别特征.方法 采集2012-2017年临床诊断水痘患者疱疹液,提取样本DNA,PCR扩增ORF 22、38、54、62基因片段.用单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)方法分析ORF 22基因片段,确定病毒基因型别;用限制性片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)技术分析ORF 38、54、62基因片段,区分野毒株和疫苗株.结果 23例临床诊断水痘患者的疱疹液中21例样本VZV核酸阳性.SNP分析结果显示,21例阳性VZV的基因型均属于clade 2.RFLP分析结果显示,21例阳性VZV均为野毒株(PstI+ BglI+ SmaI-).结论 杭州市VZV流行株基因型别主要是clade 2,未发现疫苗株感染.
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乙脑病毒野毒株SA14感染性克隆的构建及病毒拯救
目的 构建乙脑病毒野毒株SA14感染性克隆并进行病毒拯救. 方法 分节段合成乙脑病毒野毒株SA14全长cDNA序列,采用分段连接方式构建SA14全长cDNA质粒,以其为模板体外转录RNA并电转染导入BHK21细胞进行病毒拯救,用噬斑试验和间接免疫荧光法鉴定拯救病毒;绘病毒生长曲线,测定拯救病毒对小鼠的神经毒力. 结果 酶切鉴定质粒模板成功构建,用免疫荧光法检测到恢复病毒包膜蛋白表达,噬斑实验发现乙脑野毒株噬斑直径大于疫苗株;绘制病毒生长曲线,野毒株和疫苗株均在60 h达到高峰.用拯救病毒进行动物感染试验,野毒株对小鼠脑内神经毒力LD50为10-1.07,皮下神经毒力LD50为100.33. 结论 成功建立乙脑野毒株SA14感染性克隆并拯救病毒,为进一步研究乙脑病毒的致病机制等奠定了基础.
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PCR-RFLP方法快速鉴别水痘-带状疱疹病毒野病毒与疫苗株
目的 PCR-RFLP的方法快速鉴别2010-2015在江西省采集的水痘-带状疱疹标本中的野病毒与疫苗株.方法 选取2010-2015年在江西省南昌市采集的的水痘-带状疱疹感染临床诊断病例的疱疹液和咽拭子标本共112份,分别使用特定引物对水痘-带状疱疹病毒(VZV) ORF62区、ORF38区和ORF54区进行扩增,对阳性扩增产物分别使用限制性内切酶Sma Ⅰ、Pst Ⅰ及Bgl Ⅰ进行酶切,对酶切产物进行片段长度多态性分析.结果 112份标本中,39份标本的病毒核酸经特定区域的PCR扩增后,对产物进行酶切结果为Sma Ⅰ-、Pst Ⅰ+及Bgl Ⅰ+,而疫苗株酶切的结果为Sma Ⅰ+、PstⅠ-及Bgl Ⅰ+.结论 PCR-RFLP方法可以快速鉴定VZV的野毒株与疫苗株,江西省2010-2015年采集的水痘-带状疱疹标本中的VZV均为野病毒.
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乙型脑炎病毒高株部分基因序列分析
乙型脑炎病毒(JEV)高顺生株(高株)是我国学者于60年代从病人脑内分离到的乙脑病毒野毒株,其血凝活性的pH值较宽,与其他乙脑毒株不同,国内外对高株分子生物学研究尚未开展。我们对高株这两段基因保守区进行了DNA序列分析,以初步了解高株与其他乙脑野毒株基因序列的不同,为进一步阐明高株基因组结构与功能的关系奠定基础。 1 材料和方法 1.1 病毒的培养将中国预防医学科学院病毒学研究所虫媒病毒研究室冻存的感染高顺生野毒株的鼠脑在无菌状态下仔细研磨,离心取上清,10倍稀释后接种单层BHK细胞,数天后出现典型细胞病变(CPE)。
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水痘-带状疱疹病毒临床分离株基因型别分析以及与Oka疫苗株的区别
目的 运用分子生物学方法 对从水痘或带状疱疹患者皮肤疱疹液中分离得到的水痘-带状疱疹(VZV)株进行基闪型研究,并区分感染是南野牛株还是由Oka疫苗株引起的.方法 从水痘或带状疱疹患者的皮肤水疱液中分离VZV,然后利用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析对病毒株的ORF38、54、62和R5可变区基因进行分析.结果 在所分离的19株VZV中,存在PstⅠ+ Bgl Ⅰ+ R5A和Pst Ⅰ+ Bgl Ⅰ+RSB两种基因型,其中Pst Ⅰ+ Bgl Ⅰ+ R5A占52.7%,Pst Ⅰ+ Bgl Ⅰ+R5B占47.3%,没有发现与Oka疫苗株相同的基因型.结论 本研究中所分离的VZV毒株均系野生株,它们的基因型与欧洲、美国、日本的VZV分离株均不相同.利用病毒基因组中ORF38和ORF62区域的单一核苷酸多态性,能够区分疫苗株和野毒株.
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阿地福韦治疗慢性乙型肝炎新动向
1 前言阿地福韦(adefovir)是一种新的核苷类似物,化学结构为6-氨基嘌呤-9-乙氧基甲基膦酸,其亲脂性口服前体药物adefovir dipivoxil是阿地福韦的二特戊酰氧亚甲基酯,口服生物利用度较高;有广泛的抗HIV研究基础,具有抗乙型肝炎病毒活性;口服吸收好,细胞内半衰期长,只需每日1次给药,对HBV野毒株和YMDD变异株都有抑制作用[1,10],很有可能成为今后治疗慢性乙型肝炎新的抗病毒治疗手段.
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关注常见和突发感染性疾病对儿童健康的危害
全世界每年有1300万儿童因感染性疾病而死亡,其中1000万是5岁以下儿童,99%发生在经济落后的发展中国家,其死因的70%是由常见的感染性疾病引起,尽管可用疫苗预防的传染病的发病率有了极大的下降,成功的是消灭了天花,基本上消灭了脊髓灰质炎野毒株的感染,控制了麻风,但由于疫苗接种覆盖率的不稳定使近几年的麻疹、破伤风和结核病的病死率全球每年仍突破200万例.
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西峡县提前达到无脊髓灰质炎后的经济社会效益分析
按照WHO和国家消灭脊髓灰质炎(简称脊灰)标准,中国于2000年计划达到无脊灰标准,即没有脊髓灰质炎野毒株引起的脊髓灰质炎病例、急性弛缓性麻痹病例(AFP).监测质量保持在消灭脊髓灰质炎证实要求标准,本土脊髓灰质炎野病毒循环消灭至少3年.脊髓灰质炎(俗称小儿麻痹)是严重危害儿童健康的急性传染病,一旦感染常引起肢体瘫痪和不可逆的后遗症,给家庭和社会造成巨大的经济和精神负担.但是脊髓灰质炎病毒传播途径单一,储存宿主单一,病原体不易发生变异,当人群中脊髓灰质炎疫苗接种率达到并维持在90%以上时,人间脊髓灰质炎发病率将大幅度下降,并终消灭.我县根据全国消灭脊髓灰质炎规划,采用高水平的常规免疫接种率和高质量的强化免疫活动为主的综合措施,通过灵敏的AFP监测系统以及按照无脊髓灰质炎的证实标准分布,我县自1992~1995年已无脊髓灰质炎病例发生及无本土脊髓灰质炎野毒株循环,较国家规划提前5年达到无脊髓灰质炎证实标准,5年节省开支1322.7万元,其社会效益更大.
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水痘带状疱疹病毒野毒株和疫苗株区分方法研究
目的:建立水痘带状疱疹病毒野毒株和疫苗株的聚合酶链反应和限制性片段多态性(PCR-RFLP)区分方法.方法:对疫苗株和水痘临床患者疱疹液进行开放阅读框62(ORF62)区基因序列测定,确定可用于野毒株和疫苗株区分的单核苷酸的多态性(SNP)位点.PCR扩增含SmaⅠ、BssHⅡ和Nae Ⅰ酶切位点的基因(DNA)片段后进行限制性内切酶酶切,利用酶切图谱区分野毒株和疫苗株.结果:用PCR-RFLP分析疫苗株和疱疹液,疫苗株酶切图谱为SmaⅠ+BssHⅡ+Nae Ⅰ+,疱疹液酶切图谱为SmaⅠ-BssHⅡ-Nae Ⅰ-.结论:基于ORF62区的106262(SmaⅠ)、107136(BssHⅡ)、107252(NaeⅠ)的PCR-RFLP可有效区分野毒株和疫苗株.
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安全接种是保证免疫预防质量的关键措施
预防接种是广泛应用的有效、安全、经济的公共卫生干预措施之一.全球消灭天花是人类利用人工免疫的方法消灭的第一个传染病,是免疫预防、控制、消灭传染病的范例.为有效地控制、消灭危害儿童健康的传染病,1974年世界卫生组织(WHO)开始实施扩大免疫规划(EPI)活动.当时我国接受预防接种的儿童较少,存在大量免疫空白点,而今以乡镇为单位"四苗"(卡介苗、脊灰疫苗、百自破三联疫苗、麻疹疫苗)接种率已达85%的目标.严重危害儿童健康的传染病如白喉、麻疹等的发病率已大大下降,无野毒株脊髓灰质炎状态.
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乙型肝炎病毒基因型和基因变异与重型肝炎有关吗
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是一个遗传容量很小的DNA病毒.尽管如此,HBV的高复制活性以及复制过程中的逆转录机制都使HBV比其他DNA病毒更容易发生变异.在漫长的进化过程中,HBV形成了相对稳定的野毒株,在全球不同地区表现为不同的基因型.随着分子生物学的进步,乙肝病毒基因型和变异对肝炎患者临床结局的影响也有较多的研究报道.这些研究为阐明HBV的致病机制进行了有益的探索,同时也为我们的临床实践提供了许多参考数据.HBV相关的重型肝炎是临床实践实践过程中遇到的病程凶险、死亡率高的疾病.本文主要就HBV基因型和基因变异与乙型肝炎重型化研究的进展进行探讨.
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La细胞用于脊髓灰质炎病毒分离鉴定的研究
脊髓灰质炎(AFP)病毒,是一种人类肠道病毒,属于小RNA病毒科,可以分为三种稳定的血清型(即Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ型的野病毒和疫苗病毒),它们均可作用于人体中枢神经系统运动细胞而引起麻痹.然而,能够引起麻痹症的肠道病毒除脊灰病毒疫苗株及野毒株的3个型外,还有Cox,Echo病毒的某些型别[1].为了实现消灭脊灰的目标,必须建立完善的实验室检测设备,从而从所有可疑病例中分离出病毒来,以确定是否为脊灰病毒所致麻痹.目前,笔者主要使用的是WHO推荐的RD和Hep-2两种细胞株来做病毒的分离鉴定工作[2].由于RD和Hep-2不仅支持脊灰病毒的生长,而且还支持其它肠道病毒的生长,这给实验者带来了更大的工作量.于是,S.Koike教授建立了一种La细胞株,它对脊灰病毒有着良好的特异性和敏感性.