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山东省胶州市吸食新型毒品暗娼梅毒螺旋体、Ⅱ型单纯疱疹病毒感染情况及相关行为学研究
目的 了解山东省胶州市吸食新型毒品暗娼(简称吸毒暗娼)梅毒螺旋体、Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)感染情况及相关行为学状况.方法 2013年10-12月,采用方便抽样法招募胶州市暗娼人群,通过匿名现场问卷收集调查对象一般人口学资料、新型毒品滥用及性行为相关信息等,收集静脉血进行梅毒螺旋体和HSV-2检测,并对调查对象采集尿样进行尿甲基苯丙胺检测.对吸毒暗娼与不吸毒暗娼的人口学特征差异、性行为特征以及梅毒螺旋体、HSV-2感染情况等差异进行t检验、x2检验等统计学分析.结果 在460名暗娼中,105名暗娼承认吸食过新型毒品;收集研究对象尿样341份,尿样检测阳性者中有3名自我报告未曾吸食过新型毒品.新型毒品吸食率为23.5％(108/460).71.4％(75/105)的吸毒暗娼第1次吸毒年龄小于25岁,吸食新型毒品的原因主要有客人要求(24名,占22.9％)、挣钱多(23名,占21.9％)和同伴诱使(22名,占21.0％);41.9％(44/105)的吸毒暗娼平常和4～5人一起吸毒,32.4％(34/105)在吸毒后与2～3人发生性行为.吸毒暗娼近1次商业性行为安全套使用率为60.2％(65/108),而仅有7.4％(8/108)的吸毒暗娼在近1个月商业性行为中每次均使用安全套.与不吸毒暗娼相比,吸毒暗娼未婚比例更高[73.2％(79/108),63.6％(224/352),x2=8.64,P＜0.05],多来自于中高档场所[78.7％ (85/108),65.1％(229/352)](x2=13.09,P＜0.01),近1个月安全套的使用率较低[7.4％ (8/108),22.7％(80/352)] (x2=12.53,P＜0.01),近6个月的怀孕率明显高于不吸毒的暗娼[24.1％ (26/108),8.8％ (31/352)](x2=17.74,P＜0.01).吸毒暗娼中梅毒螺旋体感染率为12.0％(13/108),HSV-2感染率为55.6％(60/108);并有33名暗娼自述在近1年中曾被诊断患有STD (30.6％).吸毒暗娼梅毒螺旋体感染率[12.0％ (13/108),4.0％ (14/352)](x2=9.72,P＜ 0.01)、HSV-2感染率[55.6％ (60/108),39.2％ (138/352)](x2=9.01,P＜0.01)和近1年被诊断患有STD的比例[30.6％ (33/108),17.9％ (63/352)](x2=8.02,P＜0.01)均高于不吸毒暗娼.结论 山东省胶州市暗娼新型毒品吸食率较高,高危性行为普遍,梅毒螺旋体、HSV-2感染率明显高于不吸毒暗娼,并且她们对于新型毒品危害认识不足.
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单纯疱疹病毒2型潜伏感染激活模型的建立及潜伏相关转录子开放读码框架抑制后对潜伏相关转录子基因表达的影响
目的 研究单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏感染激活中潜伏相关转录子(LAT)开放读码框架(ORF)抑制后对LAT基因表达的影响。方法 建立HSV-2潜伏感染复发的神经细胞(SHSY5Y)模型。运用相差显微镜观察HSV-2潜伏及激活后SH-SY5Y细胞形态的变化。对病毒在细胞中的潜伏及激发进行PCR验证并测序。设计3对siRNA，激活诱导后转染SH-SYSY细胞，相差显微镜观察细胞形态变化，RT-PCR半定量检测转染前后LAT ORF表达的改变。结果在存在60 μmol/L阿昔洛韦(ACV)的环境，HSV-2在SH-SY5Y细胞中建立潜伏状态。病毒在SH-SY5Y细胞中长可潜伏14d。43℃ 1.5 h诱导病毒潜伏激发，而相差显微镜观察发现，病毒激发后细胞病变从24h到72 h，细胞变性、坏死的程度、数量随感染时间延长而增加。HSV-2 LAT、糖蛋白G(gG)基因PCR扩增及电泳结果证实病毒在细胞中的潜伏及激活。LAT ORF-siRNA转染细胞后，LAT ORF mRNA的表达水平在转染后24、36和48 h分别减少了39％、51％和60％。结论 抑制LAT ORF后能够抑制HSV-2 LAT基因的表达，为进一步研究LAT ORF在病毒潜伏感染复发中的作用提供了依据。
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siRNA对单纯疱疹病毒2型ICP4基因抑制作用的研究
目的 探讨RNA干扰对单纯疱疹病毒2型(HSV2)ICP4基因表达和HSV2 DNA复制的抑制作用.方法 化学合成靶向作用于HSV2 ICP4的四对siRNA和阴性对照siRNA,分别命名为siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3,siRNA-4及siRNA-N,转染Vero细胞,过夜后用HSV2 HG52标准毒株感染上述Veto细胞,1、2、3、4d和5d收集Vero细胞和上清液,荧光定量RT-PCR检测ICP4 mRNA的表达水平,荧光定量PCR检测HSV2 DNA拷贝数,Western-Blot检测ICP4蛋白表达水平.结果 与阴性对照相比,四对siRNA对HSV2 ICP4 mRNA和蛋白均有不同程度的抑制作用,以siRNA-2抑制作用强,并且均可显著降低HSV2 DNA拷贝数.结论 靶向作用于HSV2 ICP4的siRNA可显著抑制ICP4mRNA及蛋白表达和HSV2 DNA拷贝数,提示siRNA可通过抑制HSV2 ICP4基因表达而抑制HSV2的复制.
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人乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒2型及巨细胞病毒协同感染与子宫颈病变的关系
目的 调查分析育龄妇女子宫颈上皮人乳头瘤病毒(HPV)感染情况,以及单纯疱疹病毒2型(HSV-2)、人巨细胞病毒(CMV)和HPV协同感染与宫颈癌前病变发展的关系.方法 本研究为前瞻性研究,将2010年1月至2011年3月期间,昆明市健康体检的育龄妇女2128名按年龄分组为18 ～ 24岁、25 ～ 34岁、35 ～ 49岁组,采用实时荧光定量PCR技术埘其宫颈标本HPV、HSV-2、CMVDNA检测感染情况及宫颈细胞学检查,采用SPSS 13.0软件进行统计分析.结果 18 ～49岁育龄妇女生殖道高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)、HSV-2、CMV感染率分别为11.04％ (235/2128)、3.52％(75/2128)和5.26％(112/2128)；不同宫颈病变HR-HPV的感染率:未出现异常细胞(NILM)为4.29％ (82/1912),不明意义的不典型鳞状细胞(ASCUS)为55.93％ (66/118),鳞状上皮内低度病变(LSIL)为84.62％(44/52),鳞状上皮内高度病变(HSIL)为93.19％ (41/44),鳞状细胞癌(SCC)为2/2,感染率随宫颈癌前病变到宫颈癌发展而增加(r=0.644,P=0.000).各年龄组间HR-HPV、HSV-2感染率差异无统计学意义(x2 =2.979,P=0.226；x2=0.798,P=0.671)；18 ～24岁组的CMV感染率(7.62％)高,且感染率随着年龄增加而下降.HSV-2、HR-HPV双重感染率在细胞学异常组(3.24％,7/216)与细胞学正常组(2.41％,46/1912)之间差异无统计学意义(x2=0.557,P=0.455),HSV-2与HR-HPV感染无明显相关性(OR=0.56,95％CI:0.17 ～ 1.82),CMV感染与HR-HPV感染存在显著相关性(OR=3.14,95％CI:1.25～7.86).结论 HR-HPV感染是宫颈癌发生的重要原因；在妇女宫颈癌前病变过程中,CMV与HR-HPV协同感染与宫颈癌前病变的发展相关,常规HPV和CMV-DNA检测在宫颈癌筛查中有重要价值.
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性病门诊单纯疱疹病毒2型特异性抗体血清学调查
目的 了解性病门诊患者单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)感染情况.方法 用ELISA法检测我院性病门诊1215例患者HSV-2型特异性抗体,并对不同性别和不同年龄组的HSV-2 Ig gG抗体阳性情况进行对比研究.结果 1215例患者中,HSV-2 Ig gG抗体阳性者共291例,阳性率为23.95％,男性阳性率为21.34％(197/923),女性阳性率为32.19％(94/292),女性阳性率高于男性,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05).年龄以31～40岁多,为119例(男性81例,女性38例);其次为21～30岁,为85例(男性54例,女性31例).结论 HSV-2型特异性抗体检测率存在男女差异,女性高于男性.生殖器疱疹易发于21～40岁性活跃人群.HSV-2型特异性抗体血清学检测具有快速、简便、灵敏度高等优点,适用于临床检测.
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儿童单纯疱疹病毒性脑炎22例临床特征和随访研究
目的 分析儿童单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)的临床特征,探讨其诊断依据及影响预后的因素. 方法 对22例经脑脊液病毒病原学确诊的HSE患儿的临床特征进行分析,并对治疗效果进行观察和随访. 结果发热22例(100%),意识障碍18例(81%),其中昏迷12例[采用Glasgow Coma Scale(GCS)评分、GCS ≤4分3例、5～7分5例、8～9分4例],嗜睡6例.惊厥16例(72%),呕吐13例(59%),头痛10例(45%),精神症状8例(36%).合并颅神经麻痹10例(45%),肢体瘫痪7例(31%).应用酶联免疫吸附方法 测定脑脊液(CSF )HSV-IgM阳性者13例、特异性IgG抗体局部产生指数:血清/CSF比值≤20者7例、双份CSF标本恢复期特异性HSV-IgG 4倍以上升高者4例; 或采用聚合酶链反应(PCR)技术测定脑脊液HSV-DNA阳性者3例.头颅CT 和(或)MRI提示异常者19例,病变部位以额、颞叶为主12例,7例伴颅内出血.对15例患儿进行6个月～6年的随访,完全康复5例,轻度残疾3例,中度残疾5例,重度残疾2例,合并癫者7例. 结论 HSE临床可分轻重两型,早期意识障碍及精神症状是本病特征.脑脊液病毒学检测阳性为确诊依据.起始治疗时的病程、意识状态、及脑内病变程度是影响预后的重要因素.
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新型溶瘤病毒oHSV2hGM-CSF的构建及其抗肿瘤作用
目的 构建表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)的2型溶瘤单纯疱疹病毒(oHSV2hGM-CSF),初步验证其体外溶瘤效果及其对小鼠B16R黑色素瘤模型的体内疗效.方法 采用PCR、分子克隆及同源重组技术,从HG52野生病毒株的基因组中剔除ICP34.5和ICP47基因,并插入hGM-CSF表达序列,构建oHSV2hGM-CSF.将HeLa、Eca-109和PG等16种肿瘤细胞分别接种到24孔板,用1型溶瘤单纯疱疹病毒(oHSV1 hGM-CSF)或oHSV2hGM-CSF(感染复数=1)感染24、48 h后,显微镜下观察细胞病变.以表达HSV感染受体的C57 BL/6小鼠黑色素瘤细胞B16R为动物模型,当肿瘤生长至7～8 mm3时,瘤内分别注射2.3×106 PFU的oHSV1hGM-GSF和oHSV2hGM-CSF,共3次,每次间隔3d,同时测量肿瘤大小,并观察生存期.结果 PCR检测和DNA序列分析结果证实,各目的基因已被剔除,hGM-CSF表达盒插入到ICP34.5的基因位点.oHSV1hGM-CSF和oHSV2hGM-CSF感染肿瘤细胞24h后,即能观察到细胞病变,目溶瘤谱较广,oHSV2hGM-CSF感染的肿瘤细胞合胞体现象多于oHSV1hGM-CSF感染者；感染48 h后,oHSV2hGM-CSF对HeLa、HepG2、SK-Mel-28、B16R、U87-MG细胞的溶瘤效果优于oHSV1hGM-CSF.动物实验显示,肿瘤接种后第15天,PBS组、oHSV1 hGM-CSF治疗组和oHSV2hGM-CSF治疗组小鼠的肿瘤体积分别为( 374.7±128.24) mm3、( 128.23±45.32) mm3和( 10.06±5.10) mm3,oHSV2hGM-CSF明显延缓了荷瘤小鼠肿瘤的生长.PBS组小鼠在接种B16R细胞22 d后全部死亡；oHSV1 hGM-CSF治疗组和oHSV2hGM-CSF治疗组小鼠在接种B16R细胞110 d时,存活率分别为60％和80％(P＞0.05).与PBS组相比,oHSV1 hGM-CSF治疗组和oHSV2hGM-CSF治疗组小鼠的生存期明显延长(P＜0.01).结论 oHSV2hGM-C-SF对人肿瘤细胞溶瘤谱较广,对荷B16R黑色素瘤瘤内注射有较好的抗肿瘤效应,具有较好的开发前景.
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检测单纯疱疹病毒2型的实时荧光定量聚合酶链反应方法的建立
目的 建立实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法,检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2).方法 根据基因库信息,以HSV-2的gG基因区为靶基因,设计合成引物和荧光探针.采用重组质粒构建标准品,优化反应体系进行方法学评价,同时对350例临床诊断HSV-2感染者和50例健康体检者的分泌物进行检测.结果 成功建立了TaqMan技术的real-time PCR方法.通过反应体系优化重复性良好,批内变异系数CV=2.56％,批间CV=5.15％.特异性高,对乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒及解脲支原体、沙眼衣原体阳性标本进行检测无特异性扩增,灵敏度达到500拷贝.从350例临床诊断HSV-2感染者的分泌物中,检出HSV-2 DNA 288例,检出率82.29％;50例健康体检者分泌物中未检出HSV-2 DNA.结论 real-time PCR方法能够快速、准确地检出HSV-2DNA,其特异性强、灵敏度高,可用于临床诊断HSV-2感染.
关键词： 实时荧光定量聚合酶链反应 生殖器疱疹 疱疹病毒2型 -
针对HSV-2 LAT ORF的siRNA在病毒潜伏激活中的作用
目的 观察疱疹病毒2型潜伏相关转录子开放阅读框架(HSV-2 LAT ORF)在病毒潜伏感染激活中的作用.方法 体外建立HSV-2潜伏感染及复发的神经细胞模型,对病毒在细胞中的潜伏和激发进行PCR验证及测序;设计针对LAT ORF的siRNA,激活诱导后转染SH-SY5Y细胞,检测转染前后LAT ORF的表达改变;制备HSV-2基因表达谱芯片,利用芯片分析抑制LAT ORF后病毒基因表达的改变.结果 在人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y上成功建立了HSV-2潜伏感染及激活的细胞模型,LAT、gG基因PCR扩增及电泳结果证实了病毒在细胞中的潜伏及激活;LAT ORF-siRNA转染细胞24、36、48h后,LAT ORF mRNA的表达水平分别降低了39％、51％和60％.基因芯片分析干扰后病毒基因表达,共有28个基因出现差异表达,其中24个基因下调,4个基因上调.结论 LAT ORF在HSV-2潜伏感染激活中发挥了重要作用,为下一步分析LAT在病毒潜伏激活中的调控机制奠定了基础.
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DNA测序对Ⅱ型单纯疱疹病毒进行分型鉴定的方法研究
目的 建立一种能够对标本中的Ⅱ型单纯疱疹病毒进行准确鉴定分型的方法.方法 从生殖器疱疹(GH)患者病变部位采集标本,将标本接种Vero细胞,待出现细胞病变后收获病毒感染物;提取病毒感染物的基因组.根据HSV-1和HSV-2的gD基因序列,设计合成了一对能够同时扩增两个型的病毒引物,PCR扩增感染物中病毒的序列,PCR产物克隆到pMD18-T载体,然后进行序列测定,测定序列与数据库比对,根据比对结果确定HSV的型.结果 用PCR成功扩增出200bp大小的片段;测定序列与数据库的比对结果显示,该序列与HSV-2的gD基因同源性高,表明在标本中有HSV-2病毒.测定的gD序列与国外分离株的序列存在一定的差异.结论 通过PCR扩增和产物的克隆测序,能够实现对临床上难以区分的HSV-1和HSV-2的分型鉴定.
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单纯疱疹病毒Ⅱ型在Vero细胞中培养与增殖特性的研究
目的 研究单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)在非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)中培养及增殖的合适条件.方法 把HSV-2接种于Vero细胞中培养和传代,于不同时间收获病毒液并测毒力,进行不同培养条件的摸索.结果 pH值、残留牛血清是HSV-2在Vero细胞培养的影响因素,佳收毒时间为36～12h.在Vero细胞上培养病毒3～5代,病毒毒力较高.结论 建立了单纯疱疹病毒Ⅱ型在Vero细胞上培养增殖的初步方法,为下一步建立HSV-2的潜伏与激发细胞模型打下基础.
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子痫前期与巨细胞病毒、肺炎衣原体及单纯疱疹病毒2型感染关系的探讨
目的 探讨子痫前期与炎症反应及巨细胞病毒(CMV)、肺炎衣原体(CP)、单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的关系.方法 选择2011年6至11月于首都医科大学附属北京妇产医院住院的妊娠晚期子痫前期患者52例和正常孕妇34名为研究对象.所有病例均为单胎妊娠并排除发动宫缩、胎膜早破、有症状的感染性疾病、糖尿病、慢性高血压、肾病、近期使用抗生素或激素者.采用酶联免疫吸附测定法检测孕妇血清中病原体( CMV、CP、HSV-2 )IgM和IgG抗体的水平,以及超敏C-反应蛋白(hs-CRP)和白细胞介素(IL)-6的浓度.结果 (1)子痫前期组CMV和HSV-2的IgM抗体阳性者各1例,对照组分别为2例及3例,两组CP均为阴性.子痫前期组CMV、CP、HSV-2的IgG抗体阳性率分别为94.2％ (49/52)、53.8％(28/52)及3.8％ (2/52)；对照组分别为100.0％ (34/34)、55.9％(19/34)及5.9％ (2/34),差异无统计学意义(P＞0.05).(2)子痫前期组IL-6及hs-CRP的浓度分别为(7.2±2.1)ng/L及(6.8±5.6) mg/L;对照组分别为(6.2±1.8)ng/L及(4.6±3.0)mg/L,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 子痫前期患者存在过度炎症反应,但在血清学上并未发现子痫前期与病原体(CMV、CP、HSV-2)存在相关性.
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2型单纯疱疹病毒感染与血脂紊乱相关
目的探讨2型单纯疱疹病毒(HSV-2)感染与血脂紊乱的关系. 方法连续收集1 244例住院患者,其中血脂紊乱患者408例,无血脂紊乱个体836例作为对照,采用ELISA方法检测外周血中特异性HSV-2型IgG抗体,进行单因素和多因素Logistic回归分析. 结果血脂紊乱组,HSV-2 IgG阳性率(38.2%)高于对照组(30.6%, P=0.007),体重指数也较高(24.9±6.6),对照组(23.9±7.6,P=0.001).血脂紊乱组糖尿病及高血压的患病率均显著高于对照组(分别为15.2%,10.3%,P=0.012;45.1%,36.4%, P=0.003).多因素Logistic 回归分析显示,HSV-2 IgG阳性与血脂紊乱显著相关,调整后的危险度优势比(OR值)和95%可信区间为1.34(1.04～1.72,P=0.025).其他与血脂紊乱独立相关的危险因素还有体重指数1.03(1.01～1.05),P=0.002;高血压1.39(1.09～1.79),P=0.008;糖尿病1.50(1.05～2.15),P=0.028. 结论 HSV-2感染是血脂紊乱的独立危险因素,增加了患者血脂紊乱的危险性.
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142例亚临床型生殖器疱疹患者病毒脱排特点分析
目的：分析亚临床型生殖器疱疹（GH）患者的病毒脱排特点，为临床治疗提供依据。方法选取2014年6月—2016年6月间我院收治的亚临床型GH患者142例，荧光定量PCR法检测患者单纯疱疹病毒（HSV）-DNA脱排情况，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测患者血清IgG抗体类型。分析年龄、性别、抗体类型及病程长短、发病频率对病毒脱排阳性率的影响。结果142例患者中HSV-DNA阳性率为49.3%，女性的病毒脱排阳性率高于男性（P<0.05）。血清HSV-ⅠIgG++HSV-ⅡIgG+与单纯HSV-ⅡIgG+患者病毒脱排阳性率差异无统计学意义，但二者均高于单纯HSV-ⅠIgG+患者。病程≤6年的患者病毒脱排阳性率高于＞6年者，频发患者（复发≥6次/年）高于少发患者（复发<6次/年，均P<0.05）。病程≤6年的患者中，频发患者高于少发患者，而病程＞6年的患者中，频发与少发患者病毒脱排阳性率差异无统计学意义（P>0.05）。同时女性患者HSV-Ⅱ感染率高于男性（P<0.05）。结论亚临床型GH患者的病毒脱排阳性率与性别、血清抗体类型、病程及发病频率等因素密切相关。
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HSV-2糖蛋白D在昆虫-杆状病毒表达系统中的表达及免疫原性分析
目的:在昆虫细胞中表达2型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)胞外区基因,检测其免疫原性.方法:以HSV-2病毒基因组为模板,PCR扩增得到gD2片段,构建至杆状病毒质粒Bacmind中,转染sf9细胞,包装重组杆状病毒,收集后连续感染sf9细胞,收获第4代重组杆状病毒(P4),通过Western blotting法鉴定蛋白表达情况,采用空斑实验检测重组病毒滴度,将P4代重组病毒作为种子大量感染sf9细胞,上清经镍柱亲和层析进行纯化,将纯化后的蛋白在第0、2和4周免疫BALB/c小鼠(gD2组),以PBS作为阴性对照(PBS组),ELISA检测小鼠血清中gD2特异性IgG滴度.结果:PCR鉴定和DNA测序,重组表达质粒gD2-Bacmind构建正确,空斑实验检测重组病毒滴度为2.0×109 pfu·mL-1,纯化的gD2重组蛋白在相对分子质量37 000处出现目标条带,纯度达90%以上.第6周gD2组小鼠免疫血清中gD2特异性IgG抗体滴度Log10平均值达到4.34,与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:利用昆虫-杆状病毒表达系统表达的gD2胞外区蛋白具有良好的免疫原性,可作为HSV-2疫苗的候选.
关键词： 生殖器疱疹 疱疹病毒2型 人 糖蛋白D 昆虫-杆状病毒表达系统 -
性病门诊黏液脓性宫颈炎患者的病原体检测及临床意义
目的:探讨在性病门诊就诊的拟诊黏液脓性宫颈炎(MPC)患者中各种性病病原体的感染状况及临床意义.方法:采用培养和PCR检测方法,对419例MPC患者和106例正常对照者进行沙眼衣原体(Ct)、解脲支原体(Uu)、人型支原体(Mh)、生殖支原体(Mg)、淋病奈瑟菌(Ng)、加特纳菌(Gv)、阴道毛滴虫(Tv)、疱疹病毒(HSV-2)和人乳头瘤病毒(HPV)培养或检测.结果:在419例MPC患者的黏液脓性分泌物中,检出病原体372例,检出率为88.8%.以Uu检出率为高.其次为Ct和Ng,Mg、Tv、Gv、HSV-2和HPV也有一定的检出率,同时有2种或2种以上病原体混合感染,以2种病原体混合感染为多见,其中Uu+Ct为多见,检出3种病原体混合感染者3例.在106例对照者中,检出病原体41例,检出率为38.7%,其中uu检出率为高.MPC组总病原体、Ct、Ng、Mg、HSV-2、HPV、Tv、Gv及混合感染率均高于对照组,两组比较差异均有显著性(P<0.05).Mh和Uu检出率与对照组比较差异无显著性(P>0.05).结论:MPC发病可能与Ct、Ng、Mg、HSV-2和HPV感染有关,MPC患者中存在有2种或2种以上病原体的混合感染,Uu及Mh感染可能与MPC无关.
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单纯疱疹病毒2型表面糖蛋白D亚单位疫苗免疫佐剂的筛选及免疫方案优化
目的 筛选单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)表面糖蛋白(glycoprotein)D2 (gD2)亚单位疫苗的免疫佐剂,对免疫剂量、免疫次数等免疫方案进行优化.方法 使用Alum佐剂、Poly I:C佐剂及Alum+ PolyI:C混合佐剂,分别配伍不同剂量(2、5、10 μg)的gD2蛋白,共制成9种注射制剂,经后腿肌肉注射免疫9组雌性BALB/c小鼠,分别于初次免疫后第28和42天各加强免疫1次,于初次免疫后28 d及第2、3次免疫后14 d,经眼眶静脉窦取血,分离血清,ELISA法检测特异性抗gD2抗体效价;脱颈椎处死小鼠,分离研磨脾脏后,获得脾细胞,加入gD2抗原刺激培养71 h后,收集细胞上清,应用CBA试剂盒测定细胞因子(IL-2 、IFNγ 、TNF-α)浓度;确定佳免疫方案.结果 初次免疫后28 d,各组总抗体效价偏低,混合佐剂(Alum+ Poly I:C)配伍10 μg抗原组小鼠血清抗体效价高,但动物个体差异大.第2次免疫后14 d,各组小鼠血清抗体效价较第1次免疫显著增高;佐剂及抗原剂量对抗体效价影响显著,其中Poly I:C佐剂配伍10 μg抗原组小鼠抗体效价及细胞因子分泌水平综合高.末次免疫后14 d,小鼠血清中抗体效价较第2次免疫再次升高,动物个体间效价差异缩小,混合佐剂组效价高;各组细胞因子分泌水平较第2次免疫略有增高,混合佐剂配伍2 μg抗原组分泌高水平的IL-2、IFNγ、TNF-α.结论 小鼠免疫模型中,使用Alum+ Poly I:C混合佐剂较使用任一单独佐剂可产生佳免疫效果,佳免疫组为混合佐剂配伍2 μg抗原组,佳免疫次数为3次,第1和2次免疫间隔28 d,第2和第3次免疫间隔14d,佳免疫剂量为2 μg/只小鼠.
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生殖器疱疹及其疫苗的研究进展
生殖器疱疹由单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)感染所致,在世界范围内广泛流行.HSV可在宿主体内建立终身潜伏感染,并引起严重的复发性疾病.此外,HSV感染还能明显增加HIV感染的机率.虽然目前抗HSV药物有一定作用,但是不能防止潜伏HSV复活.因此,亟需研制有效的疫苗来控制HSV感染、限制疾病传播和复发.此文对生殖器疱疹的病原学、流行病学及疫苗的研究进展做一综述.
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不同人群感染单纯疱疹病毒2型的流行病学特点
此文概述了单纯疱疹病毒2型（herpes simplex virus 2，HSV‐2）感染的传播方式和机制，着重介绍了HSV‐2感染的流行病学特点。作者利用已经发表的国内外流行病学资料，从性别比例、年龄分布、文化程度等方面，对HSV‐2感染的人群进行分析。结果表明，全球范围内 HSV‐2的感染率逐渐增加，女性的感染率和发病率高于男性。在中国，从年龄分布上来看，以21～40岁年龄段感染人数多；从文化程度上来看，初中学历者感染率高。
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Ⅱ型单纯疱疹病毒／人类免疫缺陷病毒-1共感染者肾功能损伤危险因素的分析
目的：揭示Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV‐2）／HIV‐1共感染对 HIV‐1感染者肾功能的影响，分析肾损伤相关危险因素。方法收集2011年10月至2014年2月广州市第八人民医院就诊的H IV‐1阳性者302例，分为 HIV阳性 HSV‐2阳性组和 HIV阳性 HSV‐2阴性组，选取同期 HIV阴性 HSV‐2阳性者作为对照组。比较3组患者肾功能指标的差异，Pearson相关分析 HSV‐2 DNA定量与肾功能受损程度的相关性，多因素Logistic回归筛选肾损伤相关危险因素。结果 HIV‐1阳性 HSV‐2阳性组128例，HIV‐1阳性HSV‐2阴性组174例，HIV‐1阴性HSV‐2阳性组143例。与HIV‐1阴性HSV‐2阳性组相比，HIV‐1阳性HSV‐2阳性组和HIV‐1阳性 HSV‐2阴性组血肌酐（F＝14．37，P＜0．01）、BUN （ F＝12．54，P＜0．01）、24 h尿蛋白定量（ F＝16．58，P＜0．01）和尿蛋白／肌酐比值（ F＝6．37，P＝0．018）均显著升高，而肾小球滤过率（eGFR）显著下降（F＝11．96，P＜0．01）。同时，与 HIV‐1阳性 HSV‐2阴性组相比，HIV‐1阳性 HSV‐2阳性组 HIV‐1 RNA定量水平（t＝5．876，P＜0．01）、血肌酐（t＝2．315， P＝0．012）、24 h尿蛋白定量（t＝3．648，P＝0．004）和尿蛋白／肌酐比值（t＝2．312，P＝0．012）均升高，而CD4＋ T淋巴细胞计数（t＝4．903，P＜0．01），eGFR（t＝2．275，P＝0．016）则降低，差异均有统计学意义。HSV‐2 DNA与HIV‐1 RNA定量水平（r＝0．626，P＝0．002）、血肌酐（r＝0．798，P＜0．01）、24 h尿蛋白定量（ r＝0．702，P＜0．01）、尿蛋白／肌酐比值（ r＝0．686，P＜0．01）呈正相关，而与CD4＋ T 淋巴细胞计数（r＝－0．796，P＜0．01）、eGFR（r＝－0．656，P＜0．01）呈负相关。 HSV‐2 DNA定量（OR＝1．166， P＝0．021）、HIV‐1 RNA定量（OR＝1．581，P＜0．01）、CD4＋ T 淋巴细胞计数＜200／μL（OR＝1．762， P＜0．01）、年龄（OR＝1．472，P＜0．01）、≥1项并发症（OR＝1．062，P＝0．032）、糖化血红蛋白（OR＝1．124，P＝0．015）是患者肾损伤的独立危险因素。结论 HSV‐2／HIV‐1共感染可能加重 HIV‐1感染者肾损伤，且HSV‐2 DNA定量是肾损伤潜在危险因素之一。
关键词： 人类免疫缺陷病毒-1 疱疹病毒2型 人 肾功能不全 艾滋病相关性肾病
