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2003年横县多所学校发生流感暴发的调查报告
流感是一种危害人类健康的病毒性呼吸道传染病,我县每年均有不同程度的流行.2003年5月15日至6月5日,我县10所学校发生流感暴发流行,经临床诊断、流行病学调查、实验室病毒培养证实为流感暴发,现将结果报告如下.
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流感病毒感染实验室诊断进展
尽管流感疫苗应用已有很大进展,但流感仍对公共健康是一大威胁.历史上的流感多次大流行,以及每年季节性流感造成的严重感染和死亡备受关注.流感早期准确的实验室诊断对于尽早使用神经氨酸酶抑制剂药物治疗,以及控制感染至关重要.本文介绍的流感病毒实验室诊断技术包括病毒培养、抗原检测、核酸检测和血清学检测及进展.
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新布尼亚病毒在非洲绿猴肾细胞中的培养与分离鉴定
目的 应用非洲绿猴肾(Vero)细胞培养并分离鉴定新布尼亚病毒.方法 在2009-2011年河南省信阳地区发热伴血小板、白细胞减少综合征病例的血清标本中,筛选出新布尼亚病毒RT-PCR检测阳性且保存质量较好的164份标本,在Vero细胞系中培养,观察细胞致病变效应,进行实时荧光RT-PCR、间接免疫荧光检测和电镜观察.选取10份PCR阳性产物进行测序,测序结果与GenBank公布序列进行比对.结果 164份标本经Vero细胞培养,未观察到明显的特异性细胞病变；有67份实时荧光RT-PCR检测阳性,阳性率为40.85％.10份标本的核酸相似度在97.8％ ～ 100％之间,与新布尼亚病毒分离株(登录号HQ141600.1)相似度＞99％；67份实时荧光RT-PCR检测阳性标本中有58份间接免疫荧光检测可见特异性的荧光颗粒,对1份实时荧光RT-PCR和间接免疫荧光检测均为阳性的标本进行电镜观察,可见80～ 100 nm的球形病毒颗粒.结论 Vero细胞适用于新布尼亚病毒的培养、分离和鉴定.
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2009-2012年甘肃省流感监测病原学结果分析
目的 对2009-2012年甘肃省流感监测结果进行分析,为甘肃省的流感防控工作提供科学依据.方法 全省19家国家级流感监测哨点医院采集流感样病例的咽拭子,各地医疗机构送检流感样暴发疫情标本,以荧光定量PCR方法检测病毒核酸,用MDCK进行病毒分离培养,送中国疾病预防控制中心病毒病所进行复核及序列分析.结果 共采集流感样病例咽拭子36 892份,检测出流感核酸阳性8030例,检出率为21.77％,其中新甲型H1N1 4331份,季节性H3 1562份,季节性H196份,B型1651份,A未分型380份.对7073份标本进行病毒分离,分离到病毒1149株,其中新甲型H1N1 346株,季节性H3 183株,季节性H1 34株,B型Victorian系470株,Yamagata系116株.按年度分析,2009-2012年流感病毒检出率依次为32.71％、13.95％、7.80％和19.64％;按月分析,在10-12月份A型流感病毒阳性率及构成比均高于其他月份,阳性率平均为31.33％,构成比为97.61％;2-4月份B型流感病毒阳性率及构成比分别为16.51％和81.10％;5-9月份为流感病毒阳性率仅为5.03％(2009年不统计).按年龄组分析,＜1岁婴儿检出率低为7.21％,显著低于与其他年龄组;10～20岁高为34.26％.结论 甘肃省2009年以新甲型H1N1流感流行为主,2010-2011年流感活动很弱,仅为散发,2012年春季以B型为主,11月开始以甲型H1N1及季节性H3为主.流感流行每年均有一个高峰,病毒型别表现为交替流行的规律,甲型流感是冬季儿童常见的传染病.
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柯萨奇病毒A16型YY157株在Vero细胞中培养与增殖特性的研究
目的 探索柯萨奇病毒A16型(CVA16) YY157株在非洲绿猴肾(Vero)细胞中培养与增殖的合适条件.方法 把CVA16 YY157株接种于Vero细胞适应性传代,挑斑纯化后,在不同条件下培养并比较其对病毒滴度的影响.结果 CVA16 YY157株在Vero细胞中培养能导致细胞病变(CPE),可形成蚀斑.将此CVA16病毒以0.01 ～0.1MOI接种于Vero细胞,并在低于2％牛血清浓度的培养基,35℃培养60 h,CPE可达90％以上;此条件下收获培养液上清,可得到较高滴度的病毒.结论 初步建立了CVA16 YY157株在Vero细胞中培养与增殖的方法,为其下一步的大规模培养及疫苗制备奠定了基础.
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福建省HIV-1感染者病毒的分离
目的对HIV-1感染者进行病毒分离.方法采集福建艾滋病病毒感染者肝素抗凝血10份,分离外周血单核细胞(PBMC),用共培养方法分离HIV,用P24抗原ELISA试剂盒做检测.结果分离到9株HIV-1,分离率达90%,将其中的4株感染MT4细胞,均可引起细胞融合.3株表现为一过性感染MT4细胞,属慢/低病毒,1株为持续性感染MT4细胞,已传至15代,属快/高病毒.结论成功分离到HIV-1病毒.
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中国人感染H5N1亚型高致病性禽流感病例病毒分离培养探讨
目的 分析中国大陆人感染H5N1高致病性禽流感病例标本采集和病毒分离培养之间的关系.方法 对2005年10月至2009年3月中国大陆人感染H5N1高致病性禽流感病例标本进行病毒分离培养.结果 标本采集时间主要集中在发病后的0～14 d,其中0～7 d采样的标本阳性率分布相对集中,病毒分离的效果要更加显著;标本采集类型主要为呼吸道标本,其中下呼吸道标本的病毒分离阳性率分布较集中,病毒分离效果也更明显.结论 人禽流感病例标本采集时间及标本的采集类型对病毒分离有一定的影响,应在发病的急性期侧重于采集下呼吸道标本,这样利于提高病毒分离的阳性率.
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2013-2015年度甘肃省流感病毒病原学特征分析
目的 分析甘肃省2013-2015年流行性感冒(流感)的流行特征,为今后的流感防控工作提供科学依据.方法 采集全省19家国家级流感监测哨点医院门诊流感样病例(influenza-like illness,ILI)的咽拭子,以荧光定量PCR方法检测病毒核酸,核酸检测阳性标本用犬肾细胞(MDCK)进行病毒分离培养鉴定.结果 对37 332份ILI咽拭子进行流感病毒核酸检测,阳性5 928份,阳性率为15.88％;2013年第14周-2016年第1 3周三个监测年度流感病毒核酸阳性率依次为14.52％、12.36％和20.15％.按年龄组分析,＜5岁婴幼儿阳性率低为12.78％,显著低于其他年龄组;15-24岁阳性率高为24.75％.对6 285份标本进行了流感病毒分离,分离到流感病毒1 630株,检出率为25.93％,其中395株甲型H1N1、524株季节性H3N2、342株乙型Victorian系、367株乙型Yamagata系.结论 甘肃省流感病毒型别表现为交替流行规律,应积极采取综合性防控措施.
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2005-2011年徐州市流感病原学监测结果分析
目的 了解徐州市2005-2011年度流感流行状况、流感病毒流行株构成,为流感预防控制工作提供科学的依据.方法 对2005-2011年国家级流感样病例监测哨点医院采集的流感样病例咽拭子标本,按照《全国流感监测方案》和《流行性感冒病毒及其实验技术》要求,进行流感病毒分离及初步鉴定后,上送国家流感中心进行复核.结果 2005年10月至2011年12月共采集流感样病例标本9561份,分离流感毒株1152株,总分离率为12.0％.其中A型708株(61.5％)、B型444株(38.5％)；分离流感病毒各亚型构成比A1(HlNI)为14.2％(164株)、A3(H3 N2)为40.5％(466株)、新HINI 6.8％(78株)；BV(Victoia) 31.4％(362株)、BY(Yamagate) 7.1％(82株).2007年检出率高为25.9％(214/826),其次是2009年为17.4％(471/2708),2011年检出率低为2.3％(38/1681).2005-2006年冬春季,以A1(H1N1)亚型为主要流行株；2006年冬季,转为以BV为优势株；2007-2009年夏季,一直以A3 (H3N2)为流行优势株,期间的2008年A1(H1N1)、A3(H3N2)、BV、BY四种亚型并存流行；2009年冬季以新H1N1亚型和BV为优势株；2010-2011年,以BV为流行优势株.A3(H3N2)感染在全年均有发生,但在冬季和夏季有两个显著的感染高峰,BV亚型在冬春夏季均有检出,主要感染高峰在冬春季.流感病毒分离率高为1月份(34.4％),分离率低为7月份(2.2％).各年龄组人群均分离出流感病毒,其中5 ～年龄组分离率(24.0％)高,25～年龄组分离低.结论 徐州市2005-2011年以来,先后以流感病毒A1(H1N1)、A3(H3N2)、新H1N1、BV 亚型交替为主要流行优势株,其中BV亚型在人群中的流行显示逐年增强.
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流感病毒H3N2小鼠适应株的建立及分子机制探究
目的 建立季节性甲型流感病毒influenza A virus[(A/Hong Kong/1968 (H3N2)]毒株的鼠肺适应株,并对其适应过程的分子机理进行初步探究.方法 以滴鼻的方式使小鼠感染H3N2流感病毒,并在小鼠肺部进行连续传代,通过对小鼠的临床观察、病毒载量及病毒滴度测定、肺部病理改变、细胞因子检测等方面的观察和检测,来获得季节性流感病毒influenza A virus[A/Hong Kong/1968(H3N2)]毒株的鼠肺适应株.结果 人季节性甲型流感病毒influenza A virus[A/Hong Kong/1968 (H3N2)]毒株,经过小鼠肺中连续7次传代以后,病毒毒力逐渐增强,鼠肺中病毒载量提高了4个数量级,病毒滴度上升了2.5lgCCID50,对流感病毒HA、NA两个节段的测序,发现这两个节段上均有一个有义突变.结论 在自然状态下并不感染小鼠的野生季节性流感病毒H3N2毒株可以通过在小鼠肺部中连续传代,得到毒力较高的鼠肺适应株,HA节段中248位的Ile突变为Val,NA节段中444位的Val突变为Ile,这两个突变位点可能与流感病毒毒力相关.
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半套式逆转录聚合酶链反应技术诊断中枢神经系统肠道病毒感染
肠道病毒(EV)感染常见，所致疾病轻重不一，可表现为无症状感染或严重的脑膜炎、脑炎和心肌炎等。长期以来缺乏有效的病原学诊断方法。组织培养分离病毒费时，阳性率低，且病合1至2周得到结果时已无益于临床诊断和治疗。聚合酶链反应(PCR)方法能快速、特异地检测出脑膜炎病人脑脊液(CSF)中EV RNA，但感染初期及回顾性研究的临床标本中病毒滴度较低，扩增结果多为阴性，病毒培养也常常失败。我们采用二步扩增半套式PCR方法检测无菌性脑膜炎病人脑脊液(CSF)和血清标本中肠道病毒RNA，发现该方法较常规一步PCR敏感性至少增加100倍。10例病毒培养阳性的CSF标本，二次PCR后10例均阳性；同时期的血清标本病毒培养4例阳性，而二次扩增后7例阳性。10例CSF培养阴性者二次扩增后4例CSF阳性，2例血清阳性，对照组全部阴性。表明本方法特异敏感，对临床EV感染的病原学诊断有较高的使用价值。
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深圳5例肠道病毒71型手足口病病毒株全基因组测序分析
通过RD细胞(横纹肌肉瘤细胞)和Vero细胞进行病毒培养的方法,分离到5株手足口病患者的EV71型病毒株,病毒命名为SZ/08-1/08/CHN、SZ/08-4/08/CHN、SZ/08-28/08/CHN、SZ/08-121/08/CHN和SZ/08-605/08/CHN.
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评估经阴道超声探头覆盖物——避孕套
目的:评估经阴道超声(TVS)扫查过程中,探头覆盖物避孕套的破裂率及探头污染情况.方法:428名门诊患者接受TVS,探头由避孕套覆盖,使用后的避孕套被加入过氧化氢,再注入500ml水检查穿孔情况;用干燥的棉球擦净探头,或再加用75%的乙醇擦拭,定期检测及培养使用后的棉球,隔周抽查一次耦合剂.结果:428名患者共使用434个避孕套,6个在使用过程中破裂,4个用后肉眼检查发现小孔(2.3%),余无漏气漏水;92次使用后的棉球取样,2例培养阳性,为不动杆菌属,8次耦合剂菌培养及26次擦试探头的棉球病毒培养均为阴性.结论:避孕套本身破裂穿孔发生率很低,再加用乙醇消毒则探头污染率更低.
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天津地区住院腹泻患儿星状病毒感染情况及其型别分析
目的 调查天津地区5岁以下住院的腹泻患儿HAstV的感染情况及其分型特点.方法 收集天津市儿童医院2008年5月1日至2009年4月30日住院腹泻患儿的粪便标本837份,用ELISA进行HAstV抗原检测,将检测阳性的标本进行细胞培养,产生细胞病变(CPE)后,提取病毒RNA,RT-PCR扩增并对产物进行测序确证.同时用胶体金免疫层析法进行轮状病毒抗原检测.结果 HAstV抗原阳性检出率为3.0%(25/837),与轮状病毒共同感染者的检出率为0.7%(6/837);96%(24/25)的HAstV腹泻发生在2岁以下患儿,其中小于6月龄的患儿占HAstV阳性标本的48%(12/25);HAstV感染主要集中在2008年8月至2009年4月,与轮状病毒流行季节相似;21例接种的HAstV抗原阳性的标本中,由RT-PCR成功检出11例,经测序确证均为HAstV-1型.结论 HAstV是天津地区2008-2009年婴幼儿病毒性腹泻的重要病原之一,流行型别以HAstV-1型为主.
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流感病毒快速检测法在北京地区2007-2008年流感季节中的应用
目的 分析评价采用流感病毒快速检测法诊治流感的应用价值.方法 前瞻性选择2007年12月-2008年3月流感季节在北京朝阳医院发热门诊就诊的符合卫生部流感样病例患者500例,留取咽部分泌物进行流感病毒培养,随机选取260例患者进行流感病毒快速检测,并调查患者性别、年龄、症状、实验室检查、症状恢复时间、治疗花费等因素.同时分析流感病毒培养阳性组与流感病毒快速检测组的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,及对治疗方案和预后的影响.结果 2007-2008年流感季节共入选流感样病例500例,终498例纳入分析,病毒培养结果主要为乙型流感(208例,41.8%),而甲型流感少见(51例,10.2%).498例流感样患者的平均年龄为35岁,男:女比例为1.47:1.与培养阴性组比较,培养阳性组咳嗽、咽痛、鼻塞症状比例比较高(t值分别为13.728、4.014和4.720,P均<0.01或0.05).260例经流感病毒快速检测患者中,甲型流感抗原阳性18例、乙型流感抗原阳性132例,流感病毒快速检测的敏感度77.1%、特异度70.1%、阳性预测值78.6%、阴性预测值68.2%.流感病毒快速检测抗病毒治疗的比例由0提高到26%,抗生素使用比例由63.4%降到20.7%.结论 2007-2008年流感季节主要流感类型为乙型流感,流感病毒快速检测法对临床病例检测敏感度和特异度较高,对临床抗病毒诊治有指导意义.
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应用小瓶离心培养法分离检测2009年1-6月广州市成人流感样病例相关病毒
目的 应用高通量的小瓶离心法快速分离检测广州市成人流感样病例相关病毒,分析广州地区患有ILI的成人呼吸道病毒感染情况,评价其在临床实验室开展快速病毒培养的意义.方法 采集2009年1-6月广州市成人流感样病例患者标本652份,应用小瓶离心法(包括MDCK、HEp-2、LIE-MK_2和MRC-5 4种细胞),离心接种后,通过观察CPE、血凝(HA)、血吸附(HAD)及直接免疫荧光法(IF)等方法进行病毒分离鉴定.结果 652份成人流感样病例标本中共检出阳性161份,5种病毒病原体,病毒培养阳性率为24.69%,其中甲型流感病毒62株(62/161,38.51%),乙型流感病毒88株(88/161,54.65%),副流感病毒8株(8/161,4.96%),腺病毒2株(2/161,1.24%),呼吸道合胞病毒1株(1/161,0.62%).用小瓶离心培养法发出各种病毒培养报告的平均时间分别为:流感病毒2 d、腺病毒3 d、副流感病毒3 d.结论 (1)离心培养法具有快速、灵敏、高通量的特点,对临床实验室诊断病毒具有应用推广价值.(2)在分离的Iu病原体中,流感病毒占主导,乙型流感病毒为优势毒株,自2009年1月延续至6月,并呈逐步增多的态势,出现夏季高峰.
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临床病毒实验室检测现状及展望
由于病毒引起的临床重症感染性疾病出现地越来越频繁，严重威胁着人类的健康及生命。临床上可引起感染性疾病的病毒种类繁多，且同种病毒可以引起多种疾病，一种疾病又可由多种病毒感染引起，导致病原与疾病的相关性十分复杂。目前在临床上对大多数病毒感染的有效检测手段基本处于空白，随着分子诊断技术的快速发展，临床病毒感染疾病快速、多重诊断将成为可能。本文就临床病毒感染检测现状、展望及诊断流程改进做一分析和建议。（中华检验医学杂志，2014，37：728-731）
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潮汕地区中枢神经系统疾病肠道病毒感染调查
目的对潮汕地区1972年-2003年间临床诊断为中枢神经系统(CNS)疾病的1 605例患者进行肠道病毒(EV)感染调查.方法采集临床诊断为CNS疾病的患者脑脊髓液、血液、咽拭子或粪便标本共l 605份.用Hep-2细胞对标本进行病毒培养;用免疫血清微量中和试验对分离出的毒株进行鉴定;采集患者的双份血清进行中和抗体检测.结果从l 605例CNS疾病患者(包括疑似脊髓灰质炎、脑炎、格林-巴利综合征、脊髓压迫症、脑血管意外、颅内积水或占位和多发性硬化)的各种标本中共检测出4种25个型EV病原541例,EV病毒总检出率为33.7%,患者EV感染型别分布及检出率构成比分别为:脊髓灰质炎病毒(Polio)260例(0.480 6);柯萨奇病毒(Cox)169例(0.3124);埃可病毒(ECHO)57例(0.105 4);新型EV 55例(0.101 6).结论潮汕地区CNS疾病中存在EV感染.不同年份EV的检出率不尽相同,1972年-1979年、1980年-1989年、1990年-1994年这三个时间段里EV检出率以Polio高;1995年-2003年EV检出率则以Cox高.随着脊髓灰质炎疫苗的普及接种,1995年后未再发现Po-lio.
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山东地区肠道病毒中枢神经系统感染187例分析
目的探讨山东地区中枢神经系统肠道病毒(EV)感染的实验和临床特点.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和病毒培养技术,检测187例临床诊断为无菌性脑膜炎病人的脑脊液(CSF)和部分病人的血清及尿液标本中EV RNA.结果 187例无菌性脑膜炎患儿中,CSF中RT-PCR和病毒培养同时阳性者62例(33.16%);病毒培养阴性的125例中,RT-PCR阳性93例(74%);此93例中,4例同时在血清或尿分离到EV.本实验中,RT-PCR检测EV脑膜炎的阳性率为82.89%(155/187),而病毒培养的阳性率为33.16%(62/187).包括EV RNA 的提取,RT-PCR的全部过程在4小时内可以完成,而病毒培养繁杂,平均需要4.6天得出结果.肠道病毒脑膜炎可以散发或局部暴发,临床特点在各个年龄组有所不同,5岁以内者以发热、呕吐、激惹多见,5岁以上者以头痛、畏光、疲劳、肌痛多见.结论 EV是山东地区无菌性脑膜炎常见的病原体,临床症状一般较轻、无特异性;RT-PCR检测能快速、敏感的诊断EV感染;快速确诊可减少抗生素的应用和住院天数,有较高的社会效益和经济效益.
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人巨细胞病毒短时培养快速诊断改良技术的建立及其应用
目的建立人巨细胞病毒(HCMV)短时培养快速诊断改良技术;检验临床样本,与病毒分离比较.方法①用含细胞飞片培养板离心吸附AD169株,设时间梯度培养后用SABC法检测培养物中HCMV即刻早期抗原(IEA);②用改良法检测156例患儿尿样本(7例留取脑脊液),其中54例与病毒分离对照;147例检测血清特异性IgM;③9例更昔洛韦(GCV)治疗后随访尿排毒和特异性IgM变化.结果①标准毒株培养16～24 h,能100%检出培养物中HCMV IEA.②快速法检测尿样本178份,阳性率46.6%.与病毒分离比较,敏感性和特异性分别达100%和91.7%.③147例检测血清HCMV IgM,50例阳性(34.0%),其中49例和另25例特异性IgM阴性者尿快速培养阳性.后25例中,年龄＜1岁22例;2例免疫抑制者快速培养阳性.④2例先天感染儿脑脊液快速培养阳性伴蛋白增高.⑤9例GCV治疗后随访2～4次,2例无效,1例尿排毒减少;6例尿排毒停止.结论改良快速培养法敏感性高、特异性强,操作更为简便,是快速诊断活动性HCMV感染和评估抗HCMV疗效的可靠方法.
