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肠道病毒71型灭活疫苗免疫后不同时间点中和抗体动态变化情况
目的 观察肠道病毒71型灭活疫苗(简称“EV71疫苗”)免疫后不同时间点中和抗体动态变化情况.方法 采用随机、开放式临床试验设计,在浙江省上虞区选择120名6～35月龄婴幼儿作为研究对象,按年龄分层随机分为3组,分别在疫苗1剂次接种后10d、20 d、30 d采集受试者血清,检测EV71中和抗体水平,评价EV71疫苗快速产生抗体能力.采用开放式设计,以2012年江苏省EV71疫苗Ⅲ期临床试验的343名受试者为研究对象,在疫苗首针免疫后64个月采集受试者静脉血进行EV71中和抗体检测,评价EV71疫苗5年免疫持久性.结果 疫苗快速产生抗体研究结果显示,受试者免疫前抗体阳性率为3.8％(4/104),免前抗体几何平均滴度(GMT)为1∶5.0,接种1剂次EV71疫苗后10d、20 d、30 d时抗体阳性率分别达到89.2％(33/37)、80.6％(25/31)和66.7％(24/36),GMT分别为1∶24.6、1∶12.9和1∶13.8;各时间点抗体阳性率(Fisher精确概率法,P＜ 0.01)和GMT(Z10=-5.03,Z20=-3.73,Z30=-4.31,P值均＜0.01)均高于免疫前,差异均有统计学意义.5年免疫持久性研究结果显示,免疫后64个月疫苗组和安慰剂组的EV71抗体阳性率分别为94.3％(100/106)和71.4％(75/105),疫苗组抗体阳性率高于安慰剂组,差异有统计学意义(x2=19.57,P＜0.01);GMT分别为1∶141.4和1∶71.8,疫苗组抗体GMT高于安慰剂组,差异有统计学意义(t=2.60,P=0.01).结论 EV71疫苗接种人体后能快速产生抗体,并且具有较好的免疫持久性.
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上海市宝山区手足口病患者家庭密切接触者和健康儿童家庭成员肠道病毒感染率调查
目的 了解手足口病患者家庭密切接触者肠道病毒携带状况,为手足口病防控措施制定提供依据.方法 选取2014年6-8月辖区内手足口病实验室确诊病例以及预防接种门诊健康儿童,入户调查患者家庭密切接触者及健康儿童家庭成员人口学信息、家庭卫生习惯及卫生状况等,采集其粪便标本,比较两者肠道病毒感染情况并分析影响感染的危险因素.结果 30户手足口病患者家庭的79名密切接触者中检出肠道病毒阳性24人,阳性率为30.38％;11户健康儿童家庭的25名家庭成员,未发现肠道病毒隐性感染者.病例与其家庭密切接触者病原型别一致率为88.89％.病例家庭密切接触者中看护时间≥6 h/d(40.48％)的肠道病毒感染率高于看护时间＜6 h/d(14.71％),差异有统计学意义(x2=6.07,P＜0.05).结论 手足口病患者家庭密切接触者肠道病毒感染率高于健康人群,建议加强手足口病患者家庭密切接触者尤其是看护人的管理和健康教育.
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2012-2014年河南省南阳市手足口病流行期健康人群肠道病毒感染状况分析
目的 研究河南省南阳市2012-2014年手足口病流行期间健康人群肠道病毒(Enterovirus,EV)感染状况.方法 采用体外反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR),对南阳市2012-2014年分离自健康人群的EV进行核酸检测.调查对象共分为10个年龄组,每组10人,每年调查100人,每人均采集粪便和咽拭子标本.结果 在连续3年流行期监测的300名健康人群中,肠道病毒感染率为42.67％.≤5岁儿童为主要感染人群,性别分布差异无统计学意义(x2=0.587,P＞0.05).结论 肠道病毒在健康人群中分布普遍,以其他EV为主,未检出肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型.
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肥城市254例手足口病流行病学分析
手足口病是肠道病毒感染引起的常见病,以发热、口腔炎和手足、臀部皮疹为主要临床表现,多发生于5岁以下的婴幼儿,夏秋季易流行.1957年加拿大首次报告,我国于1981年始见于上海,1983年天津市出现了手足口病的流行.肥城市近年来也有病例发生,呈散发状态.2003年以来,新泰、泰安城区等地出现暴发流行,肥城市也相继出现了手足口病的流行.2003～2004年该市共报告手足口病254例,其中2003年138例,发病率为14.19/10万,2004年116例,发病率为12.02/10万,无死亡病例.
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脑脊液检查对重症手足口病早期诊断的意义
目的:探讨脑脊液检查在早期诊断重症手足口病中的作用和临床意义.方法:收治PICU患儿88例,所有患儿均在入院24小时内行腰椎穿刺脑脊液,进行常规检查、生化检查和涂片检查.结果:脑脊液外观均为无色、透明.脑脊液白细胞计数细胞数(0～456)×106/L,平均221.4×106/L,细胞数增高68例(77.3%),其中以多核细胞为主23例(33.8%),以单核细胞为主45例(66.2%).潘氏试验阳性22例(25.0%).脑脊液蛋白正常40例(45.5%),蛋白下降20例(22.7%),蛋白增高28例(31.8%),压力升高44例(50.0%).脑脊液氯化物正常61例(69.3%),液氯化物降低17例(19.3%),氯化物增高10例(11.4%).脑脊液涂片均未见细菌.结论:脑脊液检查阳性率高,及时进行脑脊液检查可以协助早期诊断重症患者,早期治疗,降低重症手足口病患者的死亡率.
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无锡市滨湖区2009～2011年散居儿童手足口病流行特征分析
目的:分析无锡市滨湖区散居儿童手足口病的流行病学特征.方法:根据无锡市滨湖区疫情监测资料提供的散居手足口病患儿,计算时间、地点、年龄分布等.结果:无锡市滨湖区报告散居儿童手足口病例2067例,死亡0例.地区分布广泛,四季均可发病.发病率高年龄段1～5岁90.32%.结论:加强手足口病的疫情监测,做好散居儿童家长的健康教育、养成良好的卫生习惯和加强消毒是控制疫情的关键.
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我国澳门地区2011-2016年肠道病毒感染时空分析
目的 了解我国澳门地区近年肠道病毒感染的时空分布规律.方法 基于2011-2016年澳门地区卫生局流行病学调查确认的学前期至小学教育机构肠道病毒感染事件,使用回顾性时空分析法,并用伯努利模型作模拟.事件的描述性分析使用SPSS 20.0软件,时空聚集性扫描使用SaTScan 9.4.4软件,利用Google Earth软件呈现事件的地理信息.结果 2011-2016年澳门地区共有330起肠道病毒感染事件,其中2014年多为101起(30.6％),多出现在每年5、6月.澳门岛东北部于2011-2013年有个半径为0.7km的事件聚集区(对数似然率为13.4,P＜0.001),RR=1.4.结论 澳门地区应在每年2-3月开展预防肠道病毒感染,其重点为澳门岛的东北部.
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70例手足口病病原检测和临床分析
目的 分析研究70例手足口病患者的临床一般情况及其致病原.方法 采集70例手足口病患者(其中5岁以下儿童患者60例)的咽拭子标本,提取病毒RNA.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)一步法检测肠道病毒(EV)的5'-UTR区基因、肠道病毒71型(EV71)的Vp3～Vp1区基因、柯萨奇病毒A16(Cox-A16)的Vp3～Vp1区基因.结果 在70例手足口病患者中,咽拭子标本肠道病毒核酸阳性率为42.8%(30/70).在30例肠道病毒核酸阳性病原中,EV71占66.7%(20/30).5岁以下儿童有EV71肠道病毒、或Cox-A16病毒、或非EV71及非Cox-A16的其他肠道病毒感染病例.而5岁以上的儿童和成人患者则只有EV71肠道病毒感染病例.39例4 d内采集的咽拭子标本病原核酸阳性检测率平均为66.7%(26/39),31例5 d以后采集的标本病原核酸阳性检测率是12.9%(4/31),差异有统计学意义(x~2=20.4,P<0.01).结论 手足口病以0～5岁婴幼儿患病为主,但成人也可发病.用RT-PCR检测病原核酸阳性的手足口病患者以EV71为主,且以发病后4 d内阳性检测率高.
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2008-2011年河南省手足口病患儿病原学监测结果
目的 了解2008-2011年河南省手足口病(HFMD)的病原体型别及分布特征.方法 于2008-2011年收集河南省各市级CDC门诊就诊和住院的30 486例HFMD患儿的粪便、肛拭子或咽拭子标本,共30 486份.采用RT-PCR、实时荧光RT-PCR法对河南省临床诊断HFMD患者标本进行肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)和其他肠道病毒核酸检测及病毒分离鉴定；扩增EV71分离株VP1区基因并测定序列,利用生物信息学软件分析序列,构建序列遗传进化树.结果 30 486例患者中实验室诊断17 876例,EV71、CA16和其他肠道病毒阳性率分别为62.70％(11209/17 876)、12.03％(2150/17 876)、25.27％(4517/17 876),差异有统计学意义(x2=157.17,P ＜0.05).男性EV71、CA16、其他肠道病毒阳性率分别为63.40％ (7370/11 624)、11.58％(1346/11 624)、25.02％ (2908/11 624)；女性分别为61.40％ (3839/6252)、12.86％ (804/6252)、25.74％(1609/6252),性别间差异有统计学意义(x2=4.06,P＜0.05).5岁以下儿童为HFMD的高危人群,占实验室诊断病例的97.67％(17 459/17 876)；其中1～3岁儿童患者多,占诊断病例的86.92％( 15 537/17 876).EV71构成比随季节而发生变化,4-6月份较高,5月份高达69.34％(2384/3438).实验室诊断6929例重症患者中的82.48％( 5715/6929)为EV71感染,1.76％( 122/6929)为CA16感染,15.76％ (1092/6929)为其他肠道病毒感染,EV71感染率明显高于CA16和其他肠道病毒(x2值分别为9259.17、6170.81,P值均＜0.05).重症患者中死亡117例,实验室诊断55例,诊断率为47.01％,以EV71感染为主(50例).遗传进化分析显示,EV71毒株VP1基因属于C基因型的C4亚型.结论 河南省HFMD主要病原是EV71和CA16；EV71病毒为优势流行株,属于C基因型的C4亚型.
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手足口病患儿不同类型肠道病毒感染临床特点分析
目的 探讨不同类型肠道病毒感染手足口病患儿的临床特点, 指导临床疾病预防和治疗.方法 收集456例手足口病患儿临床资料, 采用实时荧光定量PCR检测EV71和CoxA16病毒感染情况.观察患儿临床特征, 口腔疱疹分布情况, 以及手部、足部皮疹分布情况, 并进行统计学分析.结果 EV71感染患者数262例, CoxA16感染患者数194例.CoxA16型病毒性手足口病患儿发生咳嗽、嗜睡、惊厥、肌肉痉挛的比例显著高于EV71型, 而EV71型病毒性手足口病患儿发生呕吐的比例显著高于CoxA16型, 差异有统计学意义 (P均<0.05) .CoxA16型病毒性手足口病患儿在上腭、咽峡部、颊粘膜发生口腔疱疹的比例显著高于EV71型, 差异有统计学意义 (P均<0.05) .但两组手足口病患者间手部和足部皮疹分布情况并差异不显著.结论 EV71和CoxA16型病毒性手足口病仍然是常见类型, CoxA16型患者易发生咳嗽、嗜睡、惊厥、肌肉痉挛, EV71型患者易发生呕吐.CoxA16型患者口腔疱疹易发生在上腭、咽峡部、颊粘膜.积极监测肠道病毒类型对控制患儿病情有重要意义.
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感染肠道病毒71型婴儿5例尸检组织病理分析
目的 探讨感染肠道病毒71型(EV71)重症婴幼儿的临床病理特点.方法 对5例死亡患者尸体系统解剖,获得脑、肠、心、肝、脾、肺、肾、胰腺和淋巴结等脏器,组织常规HE染色,3例行免疫组织化学EnVision法以标记脑和肺组织细胞,光镜下观察.结果 4例中枢神经系统病变明显,即以脑干和颈髓上段为主的多部位脑炎和脊髓炎,表现为神经元变性和坏死、噬神经现象、血管套、脑实质内单核巨噬细胞/小胶质细胞弥漫或结节状增生,伴少量淋巴细胞浸润;脑水肿伴小脑扁桃体疝形成;有脑膜炎和脊膜炎病变;呼吸系统表现为肺淤血和不同程度的神经源性肺水肿及肺出血;消化系统黏膜上皮未见病变,回肠末端黏膜固有层和黏膜下层内淋巴组织增生显著,淋巴滤泡内细胞凋亡严重.另1例中枢神经系统仪见脑水肿伴轻度脑膜炎;呼吸系统见肺泡间隔增宽伴淋巴、单核细胞浸润,部分肺泡上皮增生,广泛肺透明膜形成;消化系统肠黏膜未见明显病变,肠黏膜固有层内淋巴组织增生.5例淋巴造血系统表现为肺门淋巴结和肠系膜淋巴结肿大,其内淋巴滤泡扩大,但生发中心凋亡明显,伴有不同程度的中性粒细胞浸润.脾脏脾小结内各类细胞减少.5例心脏、肝脏和肾脏组织学上均无明显病变.结论 感染EV71重症病例的病变主要累及中枢神经系统,呼吸系统为继发性病变,此类患儿主要因脑水肿致脑疝形成或肺水肿致呼吸循环衰竭死亡.个别病例主要表现为呼吸系统病变,中枢神经系统病变不典型.
关键词： 肠道病毒感染 尸体解剖 中枢神经系统病毒感染 -
感染肠道病毒71型尸检病例的分子病原学诊断
目的 探讨感染肠道病毒71型(EV71)的尸检病例石蜡包埋组织病原学分子检测的应用价值.方法 尸体解剖2例怀疑因EV71感染死亡的患儿,对脑组织进行了组织学观察和免疫组织化学EnVision法标记;应用逆转录聚合酶链反应检测尸检后的石蜡组织中肠道病毒的核酸并测序分析.结果 2例均有中枢神经系统脑干脑炎的病理学特点.坏死神经元周围可见大量的小胶质细胞(CD68阳性)和少量的中性粒细胞(CD15阳性)浸润.2例延髓石蜡组织中均检测出EV71的核酸序列,与GenBank新公布的安徽阜阳暴发EV71感染的病毒株序列同源性为100%.结论 从甲醛固定、石蜡包埋的EV71感染患儿脑组织中检测出病毒特异性核酸序列,及时明确诊断临床误诊、漏诊的死亡病例,深化认识了手足口病,为公共卫生管理机构及时加强EV71病原学监测提供决策依据.
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手足口病患儿家属及相关医务人员病毒隐性感染的现状调查
目的 探讨参与手足口病(HFMD)住院患儿治疗和护理的医务人员及患儿家属的HFMD病毒隐性感染情况,进行分析,旨在为HFMD的防治工作提供依据.方法 2013年3-6月HFMD流行期间,分别选取HFMD病区医务人员42人、患儿家属101人,采集咽拭子或粪便样本,并根据家属接触的密切程度,将家属分为密切接触组和非密切接触组.样本全部进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)定量分型,判断是否为HFMD隐性感染.结果 医务人员送检标本42例,均为阴性.HFMD家属送检的101例标本中,检测出肠道病毒核酸通用型阳性25例(24.75％),其中EV71阳性22例(21.78％),其他肠道病毒阳性3例(2.97％),CA16未检出.HFMD患儿家属的咽拭子标本EV病毒阳性检出率为3.45％,粪便标本EV病毒阳性检出率为33.33％,差异有统计学意义(x2 =9.913,P＜0.01);咽拭子标本EV71病毒阳性检出率为3.45％,粪便标本为29.17％,差异有统计学意义(x2=8.028,P＜0.01).非密切接触组家属的EV阳性率为23.40％ (11/47),EV71阳性率为23.40％(11/47),密切接触组家属分别为25.93％(14/54)和20.37％(11/54),两组之间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 了解HFMD的传播机制,对患儿家属等传播环节进行有效的护理干预,有利于HFMD的防控.建立医院感染监控系统、重视消毒隔离、强化卫生宣教、强化医务人员医院感染意识等,能防止院内交叉感染,值得推广.
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苏北地区无菌性脑膜炎病因病毒的分离和初步鉴定
目的分离并初步鉴定引起2003年我国苏北地区无菌性脑膜炎暴发的病原体.方法来自70例患者的66份脑脊液和4份粪便标本,用3种细胞系(MRC-5、Vero、Hep-2)进行病毒分离,并通过电镜、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和中和试验等方法,分别从形态学、分子生物学和血清学的角度对分离毒株进行鉴定.结果得到22株阳性分离株病毒,18株分离自脑脊液(分离率27.3%),4株分离自粪便标本.经电镜、肠道病毒通用引物RT-PCR以及肠道病毒组合及单价抗血清的中和试验鉴定,所有分离毒株均为Echo30型肠道病毒.结论 Echo30是本次脑膜炎暴发流行的病因病毒.
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海南西部地区手足口病流行病学及病原学特征分析
目的 了解2012—2015年海南西部地区手足口病(hand-foot-mouth disease, HFMD)流行病学及病原学特征,为防控工作提供依据.方法 收集2012年1月—2015年12月海南西部地区10258例HFMD患儿的资料,分析其流行病学特征.对粪便或咽拭子标本采用实时荧光定量PCR扩增基因序列进行肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71)、柯萨奇病毒A组(Coxasckie virus A, CA)16型和其他肠道病毒核酸检测.结果 2012—2015年海南西部地区累计报告HFMD患儿10258例,年发病率为121.34/10万,病死率为0.19%.HFMD患儿发病年龄主要集中在<5岁儿童,其中1~3岁组发病率高,占69.31%.HFMD发病有明显的季节性,发病高峰出现在5—8月,呈单峰分布.实验室诊断率为60.20%(6175/10258),其中EV71阳性3907例(63.27%),CA16阳性875例(14.17%),其他肠道病毒阳性1393例(22.56%).EV71和CA16感染构成比随季节变换而发生变化,EV71构成比在5月份高达74.28%(719/968), CA16构成比在8月份高达19.44%(146/751).重症患儿和死亡患儿均以EV71感染构成比高,分别占80.00%(20/25), 81.82%(9/11).结论 海南西部地区HFMD疫情处于高流行态势,<5岁儿童是主要发病人群,EV71和CA16为主要病原,应采取相应措施,更好防控HFMD的发生和流行.
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脑源性多器官功能障碍综合征模型血清内毒素及其受体基因表达
目的探讨急性前脑缺血致多器官功能障碍综合征(MODS)模型血清内毒素含量及其受体在各脏器基因表达的规律,分析脑原性多器官功能障碍综合征(CMODS)的发生机制. 方法随机将54只Wistar大鼠分为正常对照组(6只)、假手术组(8只)和前脑缺血组(40只),后者又被随机分为12 h、24 h、36 h、48 h、和72 h时相点的5个亚组,每亚组各8只;建立大鼠急性前脑缺血模型;分别采用偶氮显色法鲎试验定量法测定血清内毒素和原位杂交技术测定肺、肝、肠和肾组织CD14mRNA水平;使用CMIA真彩色医学图像分析系统,检测CD14mRNA的相对含量. 结果大鼠急性前脑缺血后12 h血清内毒素升高(0.184±0.055)Eu/L,24 h达高峰(0.639±0.064)Eu/L,72 h基本恢复至正常水平(0.117±0.024)Eu/L;肺、肝、肠和肾组织CD14mRNA的表达也在缺血后12 h升高,24～36 h达高峰,48 h后下降,并以肺脏变化显著(P＜0.001);正常对照组和假手术组CD14mRNA在各脏器均有不同程度的表达,其中两组肺脏的表达有显著性差异(P＜0.01).内毒素与其受体在各脏器的表达均存在显著相关性(均为P＜0.01),其中与肠、肺组织CDmRNA表达相关显著(P＜0.001). 结论急性前脑缺血致MODS大鼠存在内毒素血症;急性脑血管病→应激反应→肠道黏膜屏障损害→内毒素易位→内毒素血症→内脏器官功能障碍→MODS是CMODS发生的重要过程,肠道机制是CMODS发生的重要机制之一.
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扩张型心肌病活检心肌中肠道病毒RNA和穿孔素、颗粒酶B的表达及其与心肌病变的相关性
目的探讨肠道病毒（EVs）持续感染、穿孔素及颗粒酶B在扩张型心肌病（DCM）发病机理中的作用。方法用原位杂交和免疫组化方法检测了19例DCM患者（DCM组）和10例正常对照者（对照组）心肌中的EVs RNA及心肌浸润细胞中穿孔素和颗粒酶B的表达。结果 DCM组中9 例的心肌检测到了EVs RNA，15例心肌浸润细胞中检测到穿孔素mRNA和颗粒酶B的表达，阳性细胞数分别为（1.95±0.70）、（1.79±0.64）个/高倍视野。对照组心肌中未检测到EVs RNA和穿孔素、颗粒酶B的表达。结论心肌EVs持续感染、心肌浸润细胞中穿孔素和颗粒酶B的表达可能在DCM的发病中起了一定作用。
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扩张型心肌病心肌组织中肠道病毒感染与趋化因子mRNA表达的关系
目的探讨病毒感染与趋化因子表达的改变在扩张型心肌病发病中的作用.方法利用RT-PCR方法检测12例原位异体心脏移植的扩张型心肌病受体心肌组织以及5例正常对照心肌组织中Evs-RNA的存在以及趋化因子RANTES、MCP-1、FKN及其受体US28的表达水平.结果在病理学证实的12例扩张型心肌病心肌组织中有7例Evs-RNA阳性. 25%(3/12)心肌组织中MCP-1 mRNA的表达明显增高,经DNA同源序列分析,与人JE MCP-1同源性为97%.而正常对照心肌组织中病毒基因及趋化因子检测均阴性.结论肠道病毒感染可能会改变趋化因子的表达水平,而趋化因子的异常表达在扩张型心肌病发生发展中可能起重要作用.
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浙江省湖州市手足口病临床特征和肠道病毒EV71与CoxA16型的分子特征分析
手足口病是由人肠道病毒引起的儿童常见的急性肠道传染病.大多数患者临床症状较轻,个别重症患者可并发心肌炎、无菌性脑膜脑炎等,甚至导致死亡[1-2].肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxAl6)是引起该病常见的病原体[3-4].
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多重荧光定量RT-PCR快速甄别手足口病病原体的方法研究
手足口病(Hand foot and mouth disease HFMD)是由肠道病毒引起的儿童传染病,多发于5岁以下儿童[1].引起手足口病的肠道病毒种类多,目前以肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)为主要流行毒株[2-4].流行毒株常交替改变,患儿感染后产生的相应抗体不具有交叉保护性,这是手足口病呈反复流行的主要原因.手足口病的早期诊断、治疗与隔离是控制流行的有效手段.
