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EB病毒实验室检测技术研究进展
EB病毒(epstein-barr virus,EBV)又称人类疱疹病毒4型,可引起传染性单核细胞增多症,并与鼻咽癌(NPC)、伯基特(Burkitt)淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤及多发性硬化症的发生关系密切[1-2].因此,检测EBV可作为相关疾病的辅助诊断.EBV实验室检测方法包括病毒分离和鉴定、免疫学检测以及核酸检测等.现将EBV实验室检测技术研究进展综述如下.
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流感病毒快速诊断的临床应用价值
目的 评估流感病毒快速检测法在临床应用中的价值.方法 从2010年10月至2012年5月,在该院发热门诊每日随机选择年龄在2～8岁符合卫生部流感样病例患者7～10例留取鼻咽分泌物进行流感病毒抗原快速检测,同时调查患者基本信息、临床症状、诊治情况等,并对在该院流感病毒快速检测达到3次阳性的患者进行细菌培养和耐药性分析.另从在该院诊治为流感样病例3次及以上的2～8岁患者中随机选取从未进行流感病毒抗原快速检测的相同例数作为对照组,调查内容同实验组.结果 留取鼻咽分泌物进行流感病毒抗原快速检测人次为5 122例,阳性报告1 885例,阳性报告率为36.8%;达3次阳性的患者进行细菌培养和耐药分析终有208例纳入分析.结果 如下:在对照组按流感病毒阳性报告率36.8%计算,实验组及对照组的抗菌药物使用率分别为5.8%(12/208)剧增至26.9%(56/208);细菌感染比例由4.3%(9/208)大幅提升到24.0%(50/208),耐药比例由2.9%(6/208)增加到13.9%(29/208),差异具有统计学意义(P<0.05).结论 对流感样病例进行流感病毒快速检测,可明显降低抗菌药使用率和患者的细菌感染率,并提高患者的药敏水平,降低患者的耐药程度.同时,有利于指导临床医生在患者临床早期进行有效的抗病毒治疗以减少目前医疗机构广泛存在的抗生素滥用现象.
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037 血清学、PCR技术、病毒滴度检测在儿童原发性人类疱疹病毒6型感染早期诊断中的应用
目前诊断HHV-6感染可行的实验室检查包括抗体滴度测定(在双份血标本中表现为抗体滴度动态上升)和外周血单核细胞病毒培养,这两种方法都是回顾性诊断HHV-6感染,而且HHV-6病毒培养需同脐带血单个核细胞一起培养,这在常规诊断实验中并不实用.而在抗体滴度检测方法中,在发病初五天内采集的标本检测不出抗体,仅在恢复期或发病晚些时候采集的血标本中可检出抗HHV-6抗体,而且急性期血标本IgM抗体检测作为常规诊断方法,远非所说的敏感、特异.在一出现症状就收集的血标本中,超过25%的标本HHV6IgM抗体阴性,而且起病后典型的IgM应答反应仅持续5～7天.
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3种检测生殖器疱疹方法的对比研究
目的：寻找更为准确、经济、实用的生殖器疱疹病毒感染的检测方法。方法取根据病史及典型的临床症状表现的生殖器疱疹疑似病例患者标本50例，分别采用病毒培养、荧光定量聚合酶链反应（FQ‐PCR）及酶联免疫吸附试验（ELISA）3种方法进行实验室检测，比较各种方法检测的阳性率。结果病毒培养阳性30例，阳性率60．0％；FQ‐PCR检测阳性34例，阳性率68．0％；ELISA检测阳性32例，阳性率64．0％，经χ2检验，三者差异无统计学意义（χ2＝0．69，P＞0．05）。水疱和脓疱标本的阳性率分别为94．6％和83．3％，明显高于其他来源标本的阳性率。结论3种检测方法对临床疑似生殖器疱疹患者的检测阳性率差异无统计学意义（P＞0．05）。相对另外两种检测方法，ELISA因其便宜、实用的优点而适用于临床推广应用。水疱和脓疱标本阳性率明显高于其他类型标本的阳性率，对临床疑似病例的实验诊断，标本以采集水疱和脓疱液为佳。
关键词： 生殖器疱疹 病毒培养 荧光定量聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验 -
用微载体培养Vero细胞制备狂犬疫苗
目的 研究微载体培养Vero细胞生产狂犬疫苗.方法 搅拌式生物反应器培养Vero细胞,待细胞在微载体上长成单层后,用狂犬病毒aG株感染细胞.培养5 d后,开始灌流收获病毒液,每天取样测定病毒滴度.经灭活后制备成试验疫苗,进行效力试验.结果 3次培养,细胞密度均达到1×106/ml以上,病毒滴度都在106 LD50以上,3批试验疫苗的效价分别达到5.88、6.49和5.98 IU/ml.结论 在生物反应罐中用微载体培养Vero细胞制备狂犬疫苗工艺合理,所获免疫原性良好,适用于工业化生产,有较好的应用前景.
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辛德比斯病毒和伪狂犬病毒制备方法的优化
目的 优化辛德比斯病毒(Sindbis virus)和伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)的培养和制备方法,建立高效价病毒制备方法.方法 从选用不同宿主细胞、不同的宿主细胞培养方式、以及不同的病毒悬液收集方式3方面考察病毒效价.病毒效价测定采用细胞病变法,按Karber氏法计算病毒效价.结果 用非洲绿猴肾(Vero)细胞培养的Sindbis病毒效价(8.63±0.45)明显高于用幼仓鼠肾(BHK)细胞培养的病毒效价(7.63±0.30)(P＜0.05);用Vero细胞培养的PRV效价(8.13±0.59)也明显高于用BHK细胞培养的病毒效价(6.94±0.71)(P＜0.05);宿主细胞长满单层后继续换液培养或再传代培养2种提高病毒效价的方式所制备的病毒效价(7.69±0.98 vs 7.54±0.69)的差异无统计学意义(P＞0.05),可任选其一;收获病毒时,直接收集培养悬液离心组(直收-冻组)病毒效价(8.66±0.83)较先冻融2次再离心组(冻-收-冻组)病毒效价(8.14±0.91)高(P＜0.05).结论建立了制备高效价Sindbis 病毒和PRV的方法;制备Sindbis病毒和PRV宜选用Vero 细胞;病毒培养悬液直接离心分装即可,既简化操作又可获高效价病毒.
