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重组痘苗病毒rVTT-JEVE理化特性研究
目的 痘苗病毒作为疫苗载体具有接种途径简单、高滴度、低成本等优点,重组痘苗病毒投入使用之前进行理化特性试验,对重组痘苗病毒的生产、运输和保存有一定重要意义. 方法 将重组痘苗病毒rVTT-JEVE作热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、超声波以及紫外线处理,然后接种到BHK-21细胞上,观察rVTT-JEVE毒价的变化,分析理化因素对rVTT-JEVE的影响. 结果 在pH3～9范围内,酸碱度变化不会引起rVTT-JEVE毒价的显著变化.rVTT-JEVE经50℃处理60 min、30 min和60℃处理15 min可被灭活;对5％的氯仿敏感;经终浓度0.5％的胰蛋白酶37℃作用1h,病毒毒价降低2个滴度;对25％的乙醚不敏感;经40 KHz超声波处理60 min和80 KHz处理30 min即可灭活;30 W紫外灯垂直距离10 cm照射15 min、30 cm照射30 min即可灭活. 结论 rVTT-JEVE耐热、酸、碱、乙醚、氯仿及胰蛋白酶,对超声波、紫外线较敏感.
关键词： 重组痘苗病毒rVTT-JEVE 理化因子 病毒效价 -
流感病毒感染豚鼠模型的初步建立
目的 初步建立流感病毒感染豚鼠模型.方法 通过滴鼻方式分别将A/威斯康星/67/2005(H3N2)、A/广岛/52/2005(H1N1)和B/马来西亚/2506/20043个型别的流感病毒感染豚鼠,观察感染动物的临床症状,并于感染后第1、3、5、7、9、11和13天,取鼻腔洗液和肺组织,采用细胞培养法检测病毒效价.结果 3个型别的流感病毒均能感染豚鼠,感染后3 d,鼻腔和肺组织中病毒效价达峰值,随后逐步下降,直至被清除.结论 豚鼠对H3N2、H1N1和B型流感病毒较为易感.
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甲型H1N1流感病毒制备方法的优化
2009年3月新型H1N1流感病毒首次在墨西哥暴发,截止2009年11月,全球已有20万人感染H1N1流感病毒,死亡6000多人,引起全球恐慌,流感成为第一个实施全球监控的疾病.之后H1N1病毒并未从此销声匿迹,2010年下半年,甲型H1N1又重新在人群中出现,逐渐成为优势株,虽然未发生大流行,然而该病毒始终是公共卫生安全的重大威胁.
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辛德比斯病毒和伪狂犬病毒制备方法的优化
目的 优化辛德比斯病毒(Sindbis virus)和伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)的培养和制备方法,建立高效价病毒制备方法.方法 从选用不同宿主细胞、不同的宿主细胞培养方式、以及不同的病毒悬液收集方式3方面考察病毒效价.病毒效价测定采用细胞病变法,按Karber氏法计算病毒效价.结果 用非洲绿猴肾(Vero)细胞培养的Sindbis病毒效价(8.63±0.45)明显高于用幼仓鼠肾(BHK)细胞培养的病毒效价(7.63±0.30)(P＜0.05);用Vero细胞培养的PRV效价(8.13±0.59)也明显高于用BHK细胞培养的病毒效价(6.94±0.71)(P＜0.05);宿主细胞长满单层后继续换液培养或再传代培养2种提高病毒效价的方式所制备的病毒效价(7.69±0.98 vs 7.54±0.69)的差异无统计学意义(P＞0.05),可任选其一;收获病毒时,直接收集培养悬液离心组(直收-冻组)病毒效价(8.66±0.83)较先冻融2次再离心组(冻-收-冻组)病毒效价(8.14±0.91)高(P＜0.05).结论建立了制备高效价Sindbis 病毒和PRV的方法;制备Sindbis病毒和PRV宜选用Vero 细胞;病毒培养悬液直接离心分装即可,既简化操作又可获高效价病毒.
