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医院环境中甲型流感病毒气溶胶检测及其HA基因特征分析
目的 了解甲型流感病毒气溶胶在医院环境中的存在情况,分析甲型流感病毒的HA基因变异特征. 方法 选择江苏省淮安市综合性医院(医院A)及儿童专科医院(医院B)各1家,利用BIO Capturer-5仪采集医院门诊输液中心4个位点(入口、出口、中央走廊、输液台附近)的环境气溶胶;医院A和医院B分别采集气溶胶样本16份,共计采集32份;并分别采集到发热门诊就诊的7份病人咽拭子标本,共计14份.以实时荧光RT-PCR及巢式RT-PCR法分别进行流感病毒的快速检测及甲型流感病毒HA基因扩增、测序及构建系统发生树并进行HA基因特征分析. 结果 医院A环境中检测到1份H3N2流感病毒气溶胶,在病人咽拭子中检测到6份H3N2流感病毒和1份甲型H1N1流感病毒;医院B环境中检测到1份甲型H1N1流感病毒性气溶胶,在病人咽拭子中检测到3份H3N2流感病毒和2份甲型H1N1流感病毒.H3N2流感病毒气溶胶样本A/Environment-air/Huai'an/A1/2017与咽拭子样本A/Huai'an/TA1/2017的核苷酸同源性高,为99.8%;甲型H1N1流感病毒气溶胶样本A/Environment-air/Huai'an/B1/2017与咽拭子样本A/Huai'an/TA7/2017的核苷酸同源性高,为100.0%. 结论 医院环境中易存在甲型流感病毒污染,对医院环境中气溶胶进行流感病毒监测有助于了解流感病毒在人群中的流行情况;与甲型H1N1流感病毒相比,H3N2流感病毒分离株的HA基因存在基因多样性.
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2015年杭州地区3C系甲型H3N2流感病毒的流行及血凝素基因特征研究
目的 对2015年1～9月季节性甲型H3N2流感病毒的血凝素(HA)基因变异情况进行遗传进化特征及抗原漂变趋势进行分析,旨在发现流感疫苗对目前H3N2流感病毒是否完全适用.方法 对该时间段内的病毒流行情况进行统计分析,并对随机选择的49株代表性流行毒株进行HA基因序列的测定和分析.结果 季节性H3N2亚型3C系是当地的流行优势株,其支系正在从3C.3a向3C.2a逐步转变.流行株的更替和病毒株的抗原漂变使得现用疫苗的免疫效果不断下降.正在流行的3C.2a支系流行株比例升高,其对于当前疫苗株的免疫效果可能不佳.结论 本研究提示免疫策略急需调整,结果对指导下个流行季季节性H3N2流感病毒流行的防控具有参考价值.
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1968-2013年我国季节性流感H3N2亚型的进化分析
目的 了解我国季节性流感H3N2亚型在1968-2013年间的进化状况,为更好地防范该型流感提供依据.方法 从流感基因数据库中(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/FLU/Database/)获取在中国发现的季节性流感病毒H3N2亚型的8个基因片段,采用BEAST v1.7.4进行BMCMC时间进化分析,获得Bayesianskyline图.结果 季节性流感H3N2亚型在时间进化上其各片段核酸变异率总体在0.26～37.32/(碱基·年),进化曲线明显地反映出流感在1968-2013年间进化不同.结论 季节性流感H3N2亚型的进化在今后一段时间里仍会比较活跃,其中各个片段的进化情况不一致,变化较大的时间拐点值得深入分析.
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两种甲3型流行性感冒疫苗株交叉免疫研究
目的 探究2007-2008年度甲3型流行性感冒(简称流感)疫苗2株相似株之间交叉免疫反应的情况.方法 以18～60岁无流感疫苗免疫史的健康人作为受试者,分别接种2种流感裂解疫苗,其中52名接种安尔来福TM,137名接种凡尔灵(R),采集免疫前、后血清,采用微量血凝抑制(HI)试验检测血清抗体.以免疫后血清抗体阳转率、抗体几何平均滴度(GMT)增长倍数和抗体保护率3项指标进行评价.结果 用广岛株抗原检测,安尔来福TM和凡尔灵(R)的抗体阳转者分别有43名和110名,抗体平均阳转率分别为82.7%(95%CI:69.2%～91.8%)和80.3%(95%CI:72.4%～86.5%),差异无统计学意义(χ2=0.141,P>0.05);用威斯康星株抗原检测,抗体阳转者分别有37名和101名,抗体阳转率分别为71.2%(95%CI:56.7%～82.8%)和73.7%(95%CI:65.4%～80.8%),差异亦无统计学意义(χ2=0.126,P>0.05).用广岛株抗原检测,安尔来福TM和凡尔灵(R)的免疫后抗体GMT增长倍数分别为11.5(95%CI:7.5～17.5)和13.0(95%CI:10.0～16.9),差异无统计学意义(F=0.497,P>0.05);而用威斯康星株抗原检测,分别为9.5(95%CI:6.3～14.3)和10.9(95%CI:8.5～13.7),差异亦无统计学意义(F=0.554,P>0.05).2种疫苗免疫前、后血清抗体保护率,用广岛株抗原检测免疫前安尔来福TM和凡尔灵(R)分别为48.1%和54.7%,免疫后达到98.1%和95.6%,2种疫苗的差异无统计学意义(χ2=0.135～0.673,P值均>0.05);用威斯康星株抗原检测,免疫前分别为11.5%和13.9%,免疫后达到80.8%和86.1%,2种疫苗的差异亦无统计学意义(χ2=0.178～0.834,P值均>0.05),但是广岛株抗原检测的结果均高于威斯康星株抗原检测的结果(χ2·=7.111～52.155,P值均<0.01).结论 WHO推荐的2种季节性流感疫苗相似株之间有良好的交叉免疫反应,但是存在毒株之间的检测系统误差,应采用相同毒株检测.
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深圳市2005-2007年H3N2亚型流行性感冒病毒流行病学和分子变异特征
目的 探讨深圳市2005-2007年季节性流行性感冒(简称流感)流行病学特征和甲3亚型流感病毒可能的分子变异.方法 对深圳市2005-2007年流感监测网络(由9所医院、6个区和市疾病预防控制中心共16个主要机构组成)的运行质量进行控制,按周统计分析主要监测医院流感样病例占就诊者的百分比(ILI百分比),并采集流感样病例鼻咽拭子进行流感病毒分离鉴定,对分离到的毒株提取病毒RNA,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增血凝素基因重链区(HAI区)基因片段,产物纯化后测序并进行核苷酸相似性、基因进化树和氨基酸变异分析.结果 深圳市2005-2007年流感活动水平在各年间有所波动,呈现夏季高峰,2006和2007年5-7月为流行高峰期.2005-2007年流感病毒的分离率分别为4.78%(114/2385)、5.77%(212/3674)和12.12%(343/2831),分离毒株数多少与ILI百分比的季节波动相关,按周分离率与ILI百分比的变化趋势基本一致.2005和2006年甲3亚型所占比例分别为25.46%(28/114)和2.83%(6/212),而2007年成为优势毒株,占62.68%(215/343).甲3亚型病毒HA1区序列进化树分析发现,虽然进化树的主干基本按照毒株分离的时间先后发展,与不同年度WHO推荐的疫苗株先后一致,但2005-2007年的主要流感毒株共分为5个分支,2005-2006年毒株在第Ⅰ～Ⅲ分支,2007年4-6月和5-12月形成2个分支,与同期WHO推荐的疫苗株不在一个进化分支,深圳甲3亚型流感病毒的变化较早,出现疫苗株滞后现象.所有毒株未见HA1区序列缺失和插入,受体结合位点和二硫键位点氨基酸也显保守,一些位点出现了不同属性氨基酸的置换,并导致个别潜在的糖基化位点的丢失或增加,但尚不能判定为新变种.结论 深圳市可能属于我国流感病毒变异较早的地区之一,甲3亚型流感病毒在人群中呈活跃状态;常规季节性流感监测与病毒分子变异分析结合,能为毒株的演变及其流行病学意义提供及时、重要的信息.
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1998-2009年浙江省H3N2亚型流行性感冒病毒全序列变异的研究
目的 比较1998-2009年浙江省H3N2亚型流行性感冒(简称流感)流行株HA基因进化与全基因进化状况的一致性,并探讨全基因组序列上可能存在的潜在抗原区域.方法 选择浙江省CDC流感实验室于1998-2009年流感疫情中分离保存的H3N2亚型流感流行代表株19株,采用RT-PCR法进行全基因组序列扩增,并将这些毒株与10株同期H3N2亚型流感疫苗株进行全序列及HA1基因的系统进化比较;通过氨基酸替换比较、熵值计算及正向选择位点的筛选,确定各基因上的氨基酸易变位点.结果 H3N2亚型流感病毒的全序列长度为4466个氨基酸,其中有137个氨基酸位点发生稳定变异.在HA基因上第144和158位氨基酸分别经历了4次和3次替换,NA基因的第93、143、307、370、372位氨基酸和NP基因的第450位氨基酸经历了2次替换,且HA基因和NA基因上分别有29%(12/41)和77%(24/31)的变异位点位于已知抗原决定簇之外的区域.氨基酸位点熵值分析显示,HA基因非抗原决定簇的3、225、361位,NA基因非抗原决定簇的93、143、147、150、372位,PB1基因的113、576、586位,PA基因的101、256、382、421、437位,NP基因的377、450位,M1基因的218位及M2基因的31位氨基酸均为易变位点.结论 浙江省1998-2009年H3N2亚型流感病毒在HA和NA已知抗原决定簇之外的区域与部分内部基因上,可能存在着一些尚未被发现或者新形成的抗原位点.与HA基因的系统进化比较,全序列能更为全面地反映出流感流行株之间的亲缘关系与进化规律.
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利用TaqMan-MGB探针检测A(H3N2)亚型流行性感冒病毒E119V耐药突变
目的 建立快速检测A(H3N2)亚型流行性感冒病毒(简称流感病毒)神经氨酸酶(M)基冈E119V奥司他韦耐药突变位点的双重实时荧光定量逆转录PCR(rRT-PCR)方法.方法 由GenBank获取2000-2012年A(H3N2)亚型流感病毒NA基因序列26条,据此设计特异性靶向NA E119V突变位点的TaqMan-MGB探针进行双重rRT-PCR反应,并利用耐药参考株、临床分离株进行敏感性、特异性和重复性评价.结果 建立了快速检测NA基因E119V位点的双重rRT-PCR检测方法.本方法在A(H3N2)病毒(HA=8)稀释度至10-5仍可检测到荧光信号,病毒滴度的对数与Ct值之间呈线性相关,具有较高的灵敏度；与无耐药突变的A(H3N2)流感病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应,两条TaqMan-MGB探针之问不存在交叉反应,具有很高的特异性,并能够检测耐药株和敏感株混合病毒中的耐药突变,在较高浓度的混合病毒中对耐药突变的检测限是5％,在低浓度混合病毒中的检测限是50％.重复性试验得到H3N2-119E和H3N2-119V两组探针批内平均变异系数(CV)值分别为2.32％和0.57％,批间CV值分别为1.77％和0.97％,具有较好的重复性.对其中20株病毒的NA基因序列进行分析,证实这些毒株的NA基因119位点均为谷氨酸(E),表明本研究设计的方法与序列测定结果一致.结论 建立了基于TaqMan-MGB探针检测A(H3N2)亚型流感病毒E119V耐药突变的双重rRT-PCR方法,该方法灵敏、特异、重复性好,实验过程和结果判读简单易操作.
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2011-2012年中国甲型H3N2亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂药物的敏感性
目的 分析2011-2012年中国甲型H3N2亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂药物(NAI)的敏感性.方法 所有待检流感毒株来自中国流感监测网络,该网络覆盖中国31个省份的408家网络实验室和554家哨点医院.本研究挑选了2011年1月1日至2012年12月31日采样分离的毒株,共1 903株,其中经国家流感中心复核鉴定为甲型H3N2亚型流感病毒的毒株共721株,采用化学发光法检测其对奥司他韦和扎那米韦的敏感性.药物敏感参考毒株为A/Washington/01/2007(119E),奥司他韦耐药参考毒株为A/Texas/12/2007(E 119V).采用t检验比较不同年份毒株对NAI敏感性的差异.结果 A/Washington/01/2007对奥司他韦和扎那米韦的半数抑制浓度(IC50)值分别为(0.10±0.02)、(0.30±0.05) nmol/L,A/Texas/12/2007对奥司他韦和扎那米韦的IC50值分别为(4.27±1.60)、(0.20±0.03) nmol/L.721株甲型H3N2亚型流感病毒中,2011年132株,2012年589株.2011和2012年的甲型H3N2亚型毒株对奥司他韦的IC50值范围分别为0.04～0.62、0.02～0.95 nmol/L,均在A/Washington/01/2007的IC50值10倍(1.00 nmol/L)以内.2011和2012年的甲型H3N2亚型毒株对扎那米韦的IC50值范围分别为0.12～0.80、0.04～0.72 nmol/L,均在A/Washington/01/2007的IC50值10倍(3.00 nmol/L)以内.结论 2011-2012年检测的中国甲型H3N2亚型流感毒株均对奥司他韦和扎那米韦敏感.
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重组细胞高产型H3N2猪流感病毒株的拯救
为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的H3N2亚型猪流感疫苗株,利用反向遗传操作技术,将A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的PB1、PA、NP、M、NS基因和A/PR/8/34毒株的PB2基因作为内部基因与猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株的HA、NA基因进行重组,成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株rH3N2株,该毒株接毒MDCK细胞60h后,血凝价可以达到1:512,表明该毒株具有高度适应细胞繁殖特性,为H3N2亚型猪流感病毒细胞培养型疫苗的研制奠定了基础.
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青海省2010～2012年H3N2型流感病毒NA基因特性研究
为了解2010～2012年青海省H3N2亚型流感病毒神经氨酸酶(NA)基因变异特征,并探讨对NA抑制剂的耐药性情况,本研究随机选择2010～2012年流感病原监测中分离到的H3N2亚型流感毒株,提取病毒RNA,通过RT-PCR法扩增病毒NA基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,采用MEGA4.0软件对其核苷酸序列及所推导的氨基酸序列进行基因特性分析.绘制NA基因进化树,研究发现2010～2011年H3N2型分离株与2010～2012年世界卫生组织(World health organization,WHO)推荐疫苗株A/Perth/16/2009和2008～2010年WHO推荐疫苗株A/Brisbane/10/2007聚集成簇,处于同一进化分支,2012年分离株则独立形成另一进化分支.将核苷酸序列推导成氨基酸序列,与2010～2012年WHO推荐疫苗株A/Perth/16/2009相比,2010年H3N2亚型分离株氨基酸变异位点在K81T;2011年H3N2亚型分离株氨基酸变异位点在I26V和D127N;2012年H3N2亚型分离株氨基酸位点变异在E41K,P46A,I58V,T71N,L81P,D93G,D127N,D151N和I307M,第151位处于NA蛋白酶活性中心,D151N变异使分离株增加了一个糖基化位点.上述结果表明青海省2010～2011年H3N2亚型流感病毒NA基因未发生明显变异,2012年H3N2亚型流感病毒则发生了较大变异,可能会对NA抑制剂扎纳米韦和奥司他韦产生轻微耐药性.
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2013～2014年度中国H3N2亚型流感病毒病原学特征分析
为分析2013～2014流感监测年度中国大陆地区H3N2亚型流感病毒的抗原性和基因变异情况,本文选择了本监测年度中国分离的H3N2亚型流感病毒,利用标准雪貂抗血清进行抗原性分析,利用Sanger测序法进行病毒基因测序,采用邻位相临法(Neighbor-Joining,N-J)方法进行种系进化分析,分析我国H3N2亚型流感病毒的变异情况,进一步比较其与疫苗株的匹配性.抗原分析显示,本监测年度H3N2亚型流感病毒大部分为疫苗株A/Vie-toria/361/2011细胞株的类似株(99.6％),但以A/Texas/50/2012鸡胚株为参考抗原,只有15.1％为类似株,仅有11.9％与中国流行株的鸡胚分离株A/Shanghai-Changning/1507/2012抗原性类似.HA基因特性分析显示我国毒株均位于同一大分支,NA基因没有发现与耐药性相关的氨基酸位点突变.总之,2013～2014流感监测年度我国H3N2亚型流感病毒在流行过程中未发生明显变异,但病毒在鸡胚中传代会导致关键氨基酸位点变异.应及时分析并发现我国病毒的抗原性和基因特性变异情况,推选出更适合我国的疫苗株.
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2010-2016年唐山市H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析
目的 了解2010-2016年唐山市分离的H3N2亚型流感病毒株血凝素HA基因特征和变异规律. 方法 随机选取2010一2016年唐山市分离的20株H3N2亚流感毒株提取RNA,采用RT-PCR扩增目的片段,测序,采用MEGA 6.0软件构建HA基因核苷酸系统进化树,采用BioEdit v7.2.5软件比较分析其核苷酸序列特征及氨基酸变异情况. 结果 0株病毒HA1区核苷酸和氨基酸同源性分别为92.4％和89.1％.系统进化和序列分析显示,2010-2011流行年度分离的5株病毒分别属于HA基因1和5分支,其中1分支毒株在抗原决定簇发生E50K,I260M,R261Q氨基酸替换,5分支毒株发生D53N、Y94H、I230V和E280A替换;2011-2016流行年度分离的15株H3N2亚型病毒属于3C分支,与疫苗株A/Perth/16/2009比较抗原表位发生S45N、T48I、A198S、N278K和N312S位点突变,并逐年进化为3C.1(2010-2011)、3@2012/13 (2012-2013)、3C.3(2013-2014)、3C.3a (2014-2015)和3C.2a (2015-2016)分支.与相应疫苗株相比,3C.3a和3C.2a分支毒株抗原表位A、B及受体结合部位均发生了氨基酸位点突变,其中3C.2a毒株拥有Q311H(C区)和N171K(D区)位点突变. 结论 2010-2016年唐山市分离株A/H3N2亚型流感病毒发生抗原漂移,未来应关注3C.2a分支流行株的变化.
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Sanger法测定季节性H3N2亚型流感病毒全基因组序列
目的 对流行的季节性甲型H3N2亚型流感病毒进行全基因组测序.方法 本文对甲型H3N2亚型流感病毒测序过程中的PCR扩增引物进行优化及精简,同时对PCR产物纯化方法进行了改进.使用优化后的34对PCR引物和优化后的纯化方法,对194株甲型H3N2亚型病毒进行了测序.结果 利用优化后的测序方法,可保证获得甲型H3N2亚型流感病毒的8个片段全基因组序列,而且大大缩短了实验时间,节约了实验成本和人力.结论 我们应大力开展A(H3N2)亚型流感病毒的序列测定工作,及时发现病毒变异情况,以推选出与人群中的流行株更为匹配的疫苗株.
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2013-2014年江苏省H3N2亚型流感血凝素分子特征分析
目的 分析2013-2014年江苏省H3N2亚型流感病毒HA基因变异规律及其遗传进化特征. 方法 从2013-2014年江苏省流感病原监测中分离到的季节性H3N2亚型流感毒株中,选取不同时间段、不同地区具有代表性的31株分离毒株,提取病毒RNA,利用自行设计的特异性引物通过RT-PCR扩增HA基因片段,将PCR产物纯化、测序并分析其遗传进化特征. 结果 31株分离株与疫苗株A/Texas/50/2012的核苷酸和氨基酸进化距离分别为0.010 5、 0.012 4,核苷酸与氨基酸的同源性分别为97.9%~99.6%、97.2%~99.3%.遗传进化分析结果表明,分离毒株的HA基因分属不同的进化分支,2013年的3株分离毒株独立形成Group 1;3株2014年江苏省分离株位于Group 2;其余位于Group 3.选择性压力分析通过REL模型得到3个正向压力选择HA氨基酸位点分别是237、366、367.与疫苗株相比,分离毒株分子特征表现为发生N128A/T和P198S/A(去信号肽排列)氨基酸位点变异,均位于B抗原决定簇;分离毒株抗原决定簇上发生变异的位点累计24个;7株分离株出现126NWT糖基化位点,3株分离株糖基化位点45NSS和144NNS消失.流感疫苗的效果评估结果显示,疫苗对江苏省季节性H3N2流感的保护效果不理想. 结论 江苏省2013-2014年H3N2亚型流感病毒的HA基因相较于疫苗毒株发生较大变异,疫苗对病毒的预防效果不理想,使得H3亚型成为当年的优势毒株.
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2011-2015年广东省H3N2亚型流感病毒血凝素基因变异和进化分析
目的 揭示2011-2015年广东地区甲型H3N2毒株血凝素(HA)基因进化特征和变异特点.方法 采用时空抽样方法抽样,测定2011-2015年广东甲型H3N2毒株HA核苷酸序列,同时检索全球HA序列作为对照,采用MEGA5.05、BEAST v1.7.0和BioEdit7.1.3软件对HA基因核苷酸序列进行比对和分析.结果 广东48株H3 N2流感病毒的HA序列核苷酸同源性为96.4％～100.00％,2013-2015年广东H3 N2亚型流感病毒HA基因与南半球疫苗株A/Switzerland/9715293/2013的同源性为97.8％ ～98.7％,抗原性较为接近.序列系统进化分析显示,其进化规律都是沿着树枝主干随着时间推移向上延伸,广东毒株主要分布在3C.3a分支,2015年部分毒株出现在3C.2a分支.2011-2015年HA基因共出现1 16个氨基酸位点突变,其中12个氨基酸位点突变涉及4个抗原表位,N241D(N225D)和K192C突变发生在受体结合部位和其中的190螺旋区内.结论 2011-2015年广东甲型H3N2毒株HA抗原变异明显,抗原变异的积累可能出现抗原漂移和流感暴发,应该加强流感病原学监测,及时发现新的流感变异株,为流感防控和降低流感对公众健康危害提供科学依据.
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2014-2015监测年度中国H3N2亚型流感病毒病原学特征分析
目的 分析我国大陆地区2014-2015流感监测年度分离的H3N2亚型流感病毒抗原性和基因变异情况以及与疫苗株的匹配性,为制定流感的预防和控制策略提供依据.方法 利用血凝抑制试验,对2014年4月至2015年3月中国大陆分离的2 516株H3N2型流感毒株进行了抗原性分析;对分离自全国不同省份的70株病毒进行了序列测定和序列分析.结果 2014-2015流感监测年度我国大陆地区主要流行3C.3a分支的H3N2亚型流感病毒,2014年10月份开始检测到3C.2a分支的毒株.两分支的毒株与疫苗株相比,在抗原决定簇A区和B区,受体结合部位均发生了氨基酸位点突变;抗原性分析结果显示检测毒株中有高达95.1％为疫苗株A/TX/50/12鸡胚株的低反应株.结论 本监测年度我国大陆地区流行的绝大部分H3N2亚型流感病毒与WHO推荐的疫苗组分A/TX/50/12匹配性不好,应加强病毒变异监测,建立我国流感疫苗株构建平台,提高流感疫苗的有效性.
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广东流感H3N2亚型神经氨酸酶基因变异和耐药分析
目的 揭示广东地区2007～2010年甲型H3N2毒株神经氨酸酶(NA)基因特征、变异及对奥司他韦和扎那米韦的药物敏感性.方法 采用时空抽样方法选取毒株,检测广东2007～2010年甲型H3N2毒株NA基因核苷酸序列,同时检索全球NA基因序列作为参照,采用Mega 5.05和BioEdit 7.0.1软件对NA基因核苷酸序列进行比对和分析;分析毒株变异进化速度;采用NA酶活性阻断试验检测病毒的奥司他韦和扎那米韦药物敏感性.结果 广东2007～2010年H3N2毒株NA基因同义进化(Ks)和错义进化(Ka)速度分别为1.69×10-3～1.84×10-3核苷酸/年和1.07×10-3～1.15×10-3核苷酸/年,Ks值约为Ka值的1.5倍,揭示NA基因受自然选择压力较大.疫苗株A/Perth/10/2009与2010年和2011年广东毒株NA基因同源性分别为97.7%～98.2%、97.6%～97.7%.广东毒株NA基因有6个抗原表位变异,尤其是367位和369位氨基酸的变异频率较高.毒株A/Guangdong/548/2008发生耐药相关位点D151V,出现对奥司他韦敏感性降低;其余分离毒株均对奥司他韦和扎那米韦敏感;各年份毒株药物敏感性差异没有统计学意义.结论 广东2007～2010年甲型H3N2毒株NA基因的6个抗原表位有变异,抗原变异的积累可能出现流感暴发;D151V变异可能降低H3N2病毒对奥司他韦敏感性,但广东大多数H3N2毒株对奥司他韦和扎那米韦仍敏感.
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驻闽部队群体性发热:85例临床诊治报告
流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病,季节性强、传播快,是群体性发热的常见病因.早期诊断、早期使用抗病毒药物、早期隔离对控制群体性流感具有至关重要的作用.
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实时RT-PCR检测甲型H3N2流感病毒R292K耐药位点
目的 建立快速检测甲型H3N2流感病毒神经氨酸酶(NA)奥司他韦耐药突变位点的实时RT-PCR方法.方法 通过设计特异性靶向NAR292K突变位点的Taq-MGB探针进行实时RT-PCR反应,并利用模拟样本和临床标本进行灵敏性和特异性评价.结果 与结论建立了快速检测NAR292K位点的实时RT-PCR检测方法;本方法灵敏性高,可检测低至500拷贝/μl;特异性好,与无耐药突变的甲型H3N2流感病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应,为流感耐药监测提供了有效工具.
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天津市2007-2010年流感监测及H3亚型毒株HA1基因特性分析
目的 了解2007-2010年天津市流感流行特点及季节性流感H3N2亚型HA1基因变异特性.方法 采用MDCK细胞培养法分离流感病毒,选取14株H3亚型流感毒株进行RT-PCR扩增HA1片段,产物纯化后进行核苷酸序列测定,测定结果与WHO全球流感疫苗株序列进行同源比对,绘制种系发生树.结果 采集咽拭子标本4220份,分离出流感毒株894株,总检出率为21.2％,其中H1亚型、H3亚型、B型作为优势型交替出现.氨基酸序列分析显示H3亚型流感HA1基因随时间推移不断发生点突变,2007年初分离株有6个主要位点变异,并延续下来；2009-2010年在抗原决定簇A和B区又有4个新位点变异；种系发生树分为两支,2009-2010年的毒株产生遗传距离单成一支,而其余毒株与同期疫苗株在一分支.结论 天津地区同时存在H3N2亚型、H1N1亚型、B型和新甲型H1N1流感病毒,并交替流行；H3亚型已发生抗原性漂移并有增强的趋势.
