首页 > 文献资料
-
2015—2017年上海市浦东新区H3N2亚型流感病毒流行特征与基因变异分析
目的 了解2015—2017年上海市浦东新区甲型H3N2亚型流感病毒流行特征及血凝素(HA)基因变异情况. 方法 收集2015年1月至2017年7月5 436份在上海市浦东新区两所国家级流感监测哨点医院采集符合流感样病例(ILI)定义的鼻咽拭子标本,使用荧光定量PCR进行常见流感亚型检测,核酸阳性样本进行MDCK细胞培养.选取275株甲型H3N2亚型病毒分离株进行HA基因测序,对比同期中国香港流行代表株和世界卫生组织(WHO)推荐疫苗株基因序列,分析关键氨基酸位点替换情况. 结果 流感病毒检出率为22.9%(1 245/5 436),其中54.5%(678/1 245)为甲型H3N2亚型.275株甲型H3N2亚型有效测序毒株HA基因分成3C.2a和3C.3a等2个主分枝,96.0%(264/275)毒株位于3C.2a分枝上,其中62株位于3C.2a1新分枝上;氨基酸替换位点主要为N121K,替换率为10.5%(29/275),在3C.2a1亚分枝中携带N121K替换位点的2017年毒株高达94.1%.结论 甲型H3N2亚型是上海市浦东新区2015—2017年流行的主要流感亚型,其HA基因位点改变带来的基因漂移是造成流行高峰的主要原因.
-
利用反向遗传学技术构建H5N9重组流感病毒株
目的 利用反向遗传学技术构建来源人感染禽流感病毒H5N1和H7N9 HA和NA基因的H5N9亚型禽流感病毒.方法 全基因合成A/Beijing/01/2003(H5N1)禽流感病毒HA基因片段和A/Zhejiang/DTID-ZJU10/2013(H7N9)禽流感病毒NA基因片段,插入到pHW2000载体,与携带有A/Puerto Rico/8/34(H1N1)的6个内部基因的pHW2000重组质粒一起转染293T和MDCK混合细胞,拯救H5N9重组病毒.结果 核酸测序、HA和NA基因转录和表达检测、细胞病变分析确定利用该反向遗传学系统可以成功拯救H5N9病毒.重组H5N9病毒在MDCK细胞上复制增殖能力低于相同方法拯救H1N1病毒.结论 利用反向遗传学技术成功构建一株H5N9重组病毒.
-
检测甲型流感病毒的绿色荧光蛋白报告系统的构建与鉴定
目的 构建pDZ-EGFP的真核表达重组质粒,转染MDCK细胞,建立增强型绿色荧光蛋白稳定转染的报告细胞系,提供更为直观、快速的检测甲型流感病毒的新途径.方法 将PCR扩增的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因插入到pDZ载体中,将获得的pDZ-EGFP重组质粒用lipo-fectamine 2000转染MDCK细胞,通过G418进行选择培养,建立稳定转染的细胞系.传至3代,提取细胞总DNA,用EGFP的特异性引物进行PCR扩增及测序,鉴定细胞报告系统的稳定性；接种标准甲型流感毒株,用荧光显微镜和蛋白免疫印迹法检测EGFP的表达情况验证其应用性；另外,接种临床样本100份,用EGFP细胞报告系统检测的结果与Real-time RT-PCR检测结果进行比较,鉴定细胞报告系统的特异度和灵敏度.结果 稳定细胞系经传至3代,特异性EGFP引物利用PCR扩增到816bp的目的条带,测序结果与扩增的EGFP基因序列100％符合；稳定细胞系接种标准甲型流感毒株,24h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的增强表达,72h后用细胞裂解产物与EGFP的特异性抗体反应,获得目的条带；EGFP细胞报告系统检测的100份临床样本与Real-time RT-PCR检测结果相比,其特异度和灵敏度分别为88.52％和89.74％.结论 成功构建了pDZ-EGFP真核表达载体及稳定转染的MDCK细胞系,为甲型流感病毒的细胞培养鉴定及后期的致病机制的研究奠定了基础.
-
N40:一种新近发现的由流感病毒PB1节段编码的蛋白
N40蛋白是一种新发现的甲型流感病毒表达产物,该蛋白由流感病毒基因组PBl节段编码,是流感病毒PBl蛋白的变体,同PB1蛋白相比在N末端有40个氨基酸残基的缺失.N40蛋白和PB1节段编码的另外两种产物(PB1蛋白、PB1-F2蛋白)在表达水平上相互关联.2009年甲型H1N1亚型流感病毒的基阗组中存在N40蛋白的开放阅读框.N40蛋白的生物学意义以及同流感病毒毒力的关系尚有待于深入研究.
-
2017-2018年流感季节美国流感活动以及2018-2019年流感季节流感疫苗的组成建议
美国2017-2018年流感季节(2017年10月1日至2018年5月19日)是一个流感活动高强度季节,流感样病例(ILI)的门诊/急诊就诊和流感相关入院治疗百分比高,美国全国范围内流感流行时间长、范围广.在全国范围内,ILI在2017年11月开始增加,2018年1-2月出现一个较长的发病高峰并且持续到3月.甲型流感病毒(H3N2)在2月占主导地位并在整个流感季节都占优势地位;乙型流感病毒从3月开始占据主导地位.该报告总结了美国从2017年10月1日至2018年5月19日的流感活动情况.
-
世界卫生组织(WHO)对新甲型流感病毒(H1N1)公共卫生措施的指导意见
世界卫生组织(WHO)提供的以下指导意见,有助于各国对2009年流行性感冒(流感)(H1N1)大流行的管理.
-
墨西哥和其他国家新甲型流感病毒(H1N1)感染病例的临床观察及世界卫生组织(WHO)的临床管理初步指南
到2009年5月20日止,向WHO报告新甲型流行性感冒(流感)病毒(H1N1)的国家有41个,实验室证实病例合计10 243例,死亡80例.大多数病例来自北美洲(美国5469例,墨西哥3734例,加拿大496例).多数死亡病例是墨西的临床特征并提供了WHO对临床管理的初步指南.
-
甲型流感病毒在MDCK细胞上培养条件的优化
目的 优化甲型流感病毒在MDCK细胞上的培养条件,提高甲型流感病毒的分离率和监测效果.方法 将三种甲型流感病毒液(甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3 N2)分别接种于MDCK细胞,通过比较不同的病毒接种量(25、50、75、100、125和150 μl/cm2)、不同的TPCK-胰酶添加浓度(1.0、1.5、2.0、2.5、3.0和3.5μg/ml)以及不同的MDCK细胞增毒代次(连续盲传四代),对三种甲型流感病毒易感性的影响,确定其佳分离效果.结果 三种甲型流感病毒:甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2的佳病毒接种量分别为:100、75和75 μl/cm2;胰酶佳使用浓度分别为2.5、2.0和2.0 μg/ml;适宜的细胞增毒传代次数为:一代、二代、二代;低代次的MDCK细胞对甲型H1N1流感病毒的易感性高于季节性H1N1和季节性H3N2;甲型H1N1流感在培养后病毒的HA滴度低于季节性H1N1与季节性H3N2.结论 甲型H1N1流感病毒在MDCK细胞上的分离效果低于季节性H1N1与季节性H3N2;季节性H1N1流感病毒和季节性H3N2流感病毒的分离条件基本相同.
-
表面等离子体共振传感器技术在检测甲型流感病毒中的应用研究
目的 建立一种基于表面等离子体共振传感器技术检测人类甲型流感病毒的方法,并进行初步诊断应用.方法 分别设计基于甲型流感M基因的引物和探针,制备RT-PCR扩增产物,优化并确定基于传感技术的实验条件,建立高灵敏度和高特异度的表面等离子体共振传感器方法.结果 缓冲液的盐离子强度和pH值是影响杂交效果的关键因素,对其优化后标准曲线参数良好,甲型流感病毒标准品的Ru值与其相应梯度稀释标准品浓度呈良好的线性关系(R2>0.99),同时,该传感器在200mmol/L氯化钠的磷酸盐缓冲液中可以有效区分DNA的完全匹配与单碱基错配,以乙型流感探针作为质控,该探针并不与甲型流感扩增产物发生特异性杂交.结论 成功建立了高灵敏度和高特异度的甲型流感病毒表面等离子体共振传感器检测方法,为临床诊断或感染病例提供了技术平台.
关键词： 表面等离子共振传感技术 甲型流感病毒 检测 应用 -
四重RT-PCR快速检测2013新型H7N9禽流感病毒
目的 建立能快速准确检测发热病人咽拭子样本中2013新型H7N9禽流感病毒的四重RT-PCR方法.方法 针对甲型流感病毒的M基因设计通用引物,针对2013新型H7N9禽流感病毒的HA和NA基因设计特异性引物,选择人源看家基因beta-actin设计质控引物,通过优化实验条件建立一步法四重RT-PCR反应体系.与商品化实时荧光RT-PCR试剂盒进行方法比对.结果 成功建立四重一步法RT-PCR筛查2013新型H7N9禽流感病毒的检测技术.结论 该方法简便、实用、成本低廉,适用于2013新型H7N9禽流感病毒的快速检测.
关键词： 多重RT-PCR 甲型(H7N9)禽流感病毒 甲型流感病毒 -
生物气溶胶采集富集仪用于医院空气中甲型流感病毒的调查
目的 采用生物气溶胶采集富集仪调查医院空气中的甲型流感病毒.方法 2015年3月,在北京市和山东省3家医院(A、B、C)设置24个采样点,用生物气溶胶采集富集仪BIO Capturer-5采集48份空气样本.其中,磁珠富集采集样本24份,磁珠采集富集后上清液14份,未加富集磁珠采集样本10份.用实时荧光RT-PCR试剂盒检测空气样本中的甲型流感病毒.结果 48份空气样本中有5份(1 0.42％)检出甲型流感病毒,其中A、B、C3家医院的检出率分别为4.55％(1/22)、16.67％(3/18)和12.5％(1/8).磁珠富集液中甲型流感病毒的检测阳性率为16.67％ (4/24),磁珠富集后上清液的检测阳性率为7.14％(1/14),不含富集磁珠的采集液中未检出甲型流感病毒.结论 生物气溶胶采集富集仪能有效采集和富集空气中的流感病毒,提升空气中流感病毒监测的灵敏度,为公共场所空气质量监测提供了新的技术手段.
-
加味银翘方在甲型流感病毒感染患者中的应用
目的:探讨加味银翘方治疗甲型流感病毒感染的临床疗效.方法:收治甲型流感病毒感染患者168例,随机分为两组.对照组给予达菲治疗,治疗组给予加味银翘方治疗,比较两组临床疗效.结果:两组治疗总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:加味银翘方治疗甲型流感病毒感染患者的临床疗效与达菲相似.
-
医院内流行性感冒暴发的控制措施
目的 探讨医院流行性感冒暴发的有效控制措施.方法 用前瞻性监测方法发现医院内流行性感冒暴发,同时采用检测确定感染病例;及时展开控制工作.结果 该医院某病区1周内连续发生12例感冒病人,其中包括病人和医务人员,确定为一起流行性感冒小型暴发流行.经对病人鼻咽拭子标本用MDCK细胞分离鉴定,确定为H1N1型甲型流感病毒.经采取有效的消毒和隔离措施,疫情及时得到控制.结论 前瞻性监测能及时发现医院感染暴发,很快确诊此次感染病原体是H1N1型甲型流感病毒,所采取的措施有效.
-
甲型流感病毒DNA疫苗的小鼠免疫效果
目的 观察甲型流感病毒M2基因与GM-CSF基因DNA疫苗的小鼠免疫效果.方法 提取甲型流感病毒DNA疫苗质粒.将BALB/c小鼠随机分成流感裂解疫苗对照组、空载体pVAXI对照组、pVAX/GM-CSF对照组、pVAX/M2实验组、pMIG实验组,按0、2、4程序免疫BALB/c小鼠,第一针免疫后1周,定期对小鼠眼眶采血.用血凝抑制(HI)试验检测特异性抗体,流式细胞术双标法检测脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子数量,ELISA方法检测细胞因子IL-4和IFN-γ的含量,并进行保护性试验.结果 流感裂解疫苗对照组HI平均值均＞40,产生了特异性血凝素抗体,其余各组均未检测到抗体;流感裂解疫苗组具有较强的刺激淋巴细胞增殖的作用,各组间T淋巴细胞表面CD4+及CD4+/CD8+的水平比较,差异有统计学意义;DNA疫苗组可刺激机体产生较高水平的细胞因子,且保护率较流感裂解疫苗对照组提高了一倍.结论 甲型流感病毒DNA疫苗可诱导小鼠的免疫应答,且细胞免疫水平显著高于流感裂解疫苗.
-
金华市2011-2013年活禽市场甲型流感病毒监测分析
目的 了解金华市活禽市场甲型流感病毒分布情况,评估人感染禽流感风险.方法 选取全市21个活禽市场,开展市场基本情况调查,并采集养禽笼具等5类环境样本共405份,采用PCR方法检测甲型流感病毒,使用SPSS 13.0软件对检测结果进行分析.结果 样本中通用A型流感病毒阳性率为30.37％(123/405),21个市场、5类样本中均有阳性样本检出.城区市场阳性率高于农村市场(x2=4.624,P＜0.05),涉禽摊位数≥5个的市场阳性率高于涉禽摊位数＜5个的市场(x2=9.990,P＜0.01),消毒市场阳性率低于未消毒市场(x2 =5.416,P＜0.05),冬春季样本阳性率高于夏秋季(x2=13,438,P＜0.01),活禽销售区和禽宰杀加工区的样本阳性率均高于”白条禽“销售区(P均＜0.05),涉鸡环境样本阳性率高于涉鸭样本和涉鸽子样本(P均＜0.05).结论 金华市活禽市场甲型流感病毒阳性率较高,存在人感染风险;加强市场监管,落实检疫准入、消毒、休市等措施,推广禽类“杀白上市”模式,对预防控制人禽流感非常重要.
-
H3N2亚型人甲型流感病毒HA1序列进化正向选择位点研究
目的 筛选H3N2亚型人甲型流感病毒红细胞凝聚素(HA1)序列中的正向选择位点,为进一步揭示流感病毒的变异规律.方法 从NCBI GenBank和流感数据库中下载甲型流感病毒H3亚型RNA4节段序列,用两步聚类法将全部序列分为6个年代类别,使用固定效应似然比检验模型分别筛选每一类中的正向选择位点,并使用两步聚类法归纳所筛选出位点的正向选择压力变化模式.结果 各年代类别筛选出的正向选择位点不完全相同,共有50个位点在进化过程中经历过正向选择,其中有42个位点属于5个抗原决定簇之一,A、B抗原决定簇在各年代均有较多的位点入选,且承受较大的免疫选择压力.50个位点可被归纳为7种变化模式,前6种模式的位点依次在某一个时间段存在正向选择,第7种模式则在多个年代中均存在正向选择.结论 分析结果提示流感病毒HA1序列在进化过程中的正向选择位点并非恒定,而是在不同年代中存在更替趋势.抗原决定簇A、B的变异在流感进化过程中起关键作用,8个位于非抗原决定簇正向选择位点有可能是未被识别的抗原决定簇位点.
-
全球历年人甲型流感病毒H3A1抗原的分子进化研究
目的应用生物信息学数据库和工具,对现有的H3N2亚型人甲型流感病毒全球分离株的H3A1抗原序列进化规律进行分析研究.方法下载NCBI Genbank和流感病毒数据库中全部的甲型流感病毒H3A1序列,首先用两步聚类法进行样本拆分,随后分类绘制出完整的进化树.结果人H3A1序列呈现出单一主干的进化趋势,随着时间的推移,进化树结构和进化模型相关参数均呈现出一定的变化规律,关键变异株的出现则无明显的地域分布特征.结论人流感病毒H3A1抗原的进化主要是病毒抗原漂移和人类免疫选择相互作用的结果,新变异株的出现并未出现明显的地域倾向性,中国华南地区不应当被认为是H3亚型新变异株的发源地.
-
甲型H1N1流感中医病因病机治法述要
甲型H1N1流感是流行性感冒的一种,因其发热、传染性强,属于中医"温疫"范畴.流感病毒极易变异,尤其是甲型流感病毒,一般3～5年发生一次小变异,引起小流行,10～20年发生一次大变异,或发生基因重组,引起一次大流行,甚至发生席卷全世界的大流行.在20世纪中,席卷全球的大流行共有5次,其中1918年的西班牙流感造成2000万到5000万的死亡.
-
预防甲型H1N1流感的食疗法
甲型H1N1流感,为一种由H1N1病毒所引致的呼吸道疾病.H1N1甲型流感病毒与人类H1N1病毒的抗原完全不同,很多流感是因甲型流感病毒H1或H3所引致.为一种新型病毒,人类对这种病毒尚未建立免疫系统.H1N1甲型流感病毒爆发于墨西哥,可导致严重的气管疾病或一些慢性疾病,如哮喘、肺病及心脏病.
-
秦艽抗甲型流感病毒的药效学实验研究
目的:研究秦艽抗甲型流感病毒的药理作用.方法:复制甲型流感病毒感染小鼠肺部感染性疾病动物模型,以利巴韦林为阳性对照,观察秦艽对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用.结果:秦艽提取物可明显延长甲型流感病毒感染小鼠存活天数和存活率;对甲型流感病毒感染小鼠肺指数、肺组织形态学都有保护作用,与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05).结论:秦艽具有较好的抗甲型流感病毒感染的作用,值得开发利用.
