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神奇的流感病毒
那个圆球是一层脂质包膜,包裹着病毒的遗传物质.插在膜上的小棍,仔细看有两种:数目较多、看上去像柱子的是一种叫血凝素(简称HA)的蛋白质,数目较少、看上去像蘑菇的是另一种叫神经氨酸酶(简称NA)的蛋白质.
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2014—2016年四川省B型流感病毒全基因组进化特征分析
目的 了解2014—2016年四川省B型流感病毒的流行特点,明确流行株与国际疫苗株的匹配情况及流感病毒全基因组进化特征.方法 选取2014—2016年四川省分离的29株B型流感病毒,全基因组测序后完成序列拼接,采用Bioedit、MEGA5.0软件对各基因片段进行系统发育分析及分子特征分析. 结果 2014—2015年以Yamagata系流感病毒为主,2016年以Victoria系流感病毒为主.全基因组分析表明,29株B型流感毒株中有5株发生了B/Yamagata系血凝素(hemagglutinin,HA)和B/Victoria系神经氨酸酶(neuraminidase,NA)间的重配;B/Yamagata系HA氨基酸序列与国际疫苗株B/Massachusetts/2/2012相比,进化树上group I分支毒株突变较多,所分析的15株病毒株均发生K58R、A118P、N126K、S160I、N176Y等14处氨基酸突变;2016年的11株Victoria系毒株与毒株B/Brisbane/60/2008相比,HA基因主要有2个氨基酸位点发生了共有突变(I127V、N139D).本研究中的29株分离株均未发生NA蛋白酶活性位点及耐药位点的突变.结论 2014—2016年四川省B型流感病毒两系交替流行,29株分离株中的5株出现BY/BV系间神经氨酸酶基因的重配,会导致抗原转变使疫苗失去保护效果,双组分的B型流感疫苗可能更为有效;NA重要的氨基酸位点相对保守.
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四川省1996～1999年流感监测结果分析
由于流感病毒特别是甲型流感病毒的抗原(主要是血凝素和神经氨酸酶)不断发生变异,使得人体因曾经感染而获得的免疫力很快失效,一旦有新亚型出现,很容易在人群中造成流行甚至大流行.
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2003-2014年浙江省宁波市乙型流行性感冒病毒血凝素和神经氨酸酶基因变化特征分析
目的 分析2003-2014年宁波市乙型流行性感冒(流感)病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的分子流行病学特征.方法 采集宁波市2003-2014年哨点监测医院的流感样病例标本进行流感病毒分离鉴定,选取不同时期的乙型流感毒株进行HA和NA基因序列测定,采用生物信息学软件分析变异和进化.结果 宁波市乙型流感病毒Victoria和Yamagata两大普系流行株的HA及NA基因在2003 2014年间每年均有不同程度的氨基酸序列变异,其中明显的为2005年与2009年的Victoria系毒株及2007年与2010年的Yamagata毒株变异.每当HA基因序列发生明显变异时NA基因也同时出现明显的变异,而且有时NA基因的变异比HA基因更明显.同时发现2013 2014年流行的乙型流感病毒为Yamagata系HA与Victoria系NA的重配株.结论 乙型流感两大谱系流行株的HA基因发生变异时NA基因也会出现变异,甚至较HA基因更快.2013-2014年宁波市乙型流感高发的流行株为Yamagata系HA与Victoria系NA基因的重配株.
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2015-2017年浙江省衢州市H3N2亚型流感病毒血凝素基因分子进化特征分析
目的 了解浙江省衢州市2015-2017年H3N2亚型流感病毒血凝素(HA)基因分子进化特征,为流感防控提供科学依据.方法 选取衢州市2015-2017年分离到的H3N2亚型流感病毒18株,通过RT-PCR扩增病毒HA基因片段并测序,采用生物信息学软件分析其分子进化特征.结果 18株H3N2亚型流感病毒HA基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.36％～100.00％和96.76％～100.00％,与同年度疫苗株HA基因的核苷酸平均遗传距离分别为0.008 2、0.007 1和0.011 2,氨基酸平均遗传距离分别为0.009 2、0.003 1和0.010 0.分离株的HA基因分支从3C.3a转变为3C.2a支系,其HA氨基酸序列与同年度疫苗株比较,变异位点共涉及HA蛋白的5个抗原表位(A、B、C、D和E区),2个受体结合位点(T131K、T135N/K),6个潜在糖基化位点(122NES、126NWT、133NGT、135NSS、144NSS、158NYT).结论 2015-2017年衢州市H3N2亚型流感病毒可能出现了抗原漂移,当前疫苗株A/HongKong/4801/2014的免疫效果需重新评估.
关键词： H3N2亚型流感病毒 血凝素 序列分析 抗原漂移 分子特征 -
2009-2012年浙江省湖州市甲3亚型流行株基因特性分析
目的 分析2009-2012年湖州市甲3亚型流感病毒主要抗原基因血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的分子变异特征.方法 选择浙江省湖州市2009-2012年流感流行期间分离的甲3亚型代表株11株,提取病毒RNA,扩增HA1和NA基因,进行序列测定,用MegAlign软件分析处理.结果 湖州市近几年甲3亚型流感流行株在HA1区的核苷酸长度均为987 bp,编码329个氨基酸；在NA区的核苷酸长度为1362 bp,编码454个氨基酸.2009-2012年甲3亚型流感病毒分离株HA1区与NA区的氨基酸同源性分别在94.7％～99.9％与96.2％～ 100.0％之间,HA1区的变异较NA区更大.4个流感流行期分离的甲3亚型流感毒株相比HA和NA发生了多个氨基酸位点的替换.此外,近几年来世界卫生组织推荐的甲3亚型流感疫苗株与当年的流感流行株之间存在一定的差异.结论 2009-2012年湖州市甲3亚型流感病毒流行株发生明显变异,基因重配和抗原漂移是病毒发生变异的主要机制.
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流感大流行的威胁及中国的应对
流感大流行是指在人群中出现流感病毒血凝素新亚型的毒株,它的抗原性及基因特性与当时人群中流行的流感病毒株毫无相关,即不是由当时人群中流行的甲型流感病毒通过基因突变而来;大部分人群对新亚型毒株缺乏免疫力;新亚型毒株具有较强的人传人能力,有较高的感染率、发病率和死亡率;传播速度快,超出国界和洲界,在一年内波及全球.
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2015年杭州地区3C系甲型H3N2流感病毒的流行及血凝素基因特征研究
目的 对2015年1～9月季节性甲型H3N2流感病毒的血凝素(HA)基因变异情况进行遗传进化特征及抗原漂变趋势进行分析,旨在发现流感疫苗对目前H3N2流感病毒是否完全适用.方法 对该时间段内的病毒流行情况进行统计分析,并对随机选择的49株代表性流行毒株进行HA基因序列的测定和分析.结果 季节性H3N2亚型3C系是当地的流行优势株,其支系正在从3C.3a向3C.2a逐步转变.流行株的更替和病毒株的抗原漂变使得现用疫苗的免疫效果不断下降.正在流行的3C.2a支系流行株比例升高,其对于当前疫苗株的免疫效果可能不佳.结论 本研究提示免疫策略急需调整,结果对指导下个流行季季节性H3N2流感病毒流行的防控具有参考价值.
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2010-2012年长沙市流感流行情况及B型流感病毒基因特性分析
目的 分析2010-2012年长沙市流感流行情况,并探讨B型流感病毒分离株血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的分子流行病学特征.方法 采集长沙市流感网络监测哨点医院及暴发点流感样病例(ILI)咽拭子样本,狗肾传代细胞(MDCK)进行病毒分离,血凝和血凝抑制实验进行型别和亚型鉴定；提取B型流感病毒核酸,一步法RT-PCR扩增HA和NA基因片段,双向测定扩增产物核苷酸序列,对基因序列和氨基酸序列进行分析.结果 2010-2012年间,长沙市甲型H1N1、H3N2、B型流感交替流行,流行高峰为冬春季.3年间共分离到B型流感病毒78株,其中79.5％为Victoria系,20.5％为Yamagata系,以Victoria系为主.与WHO推荐疫苗株B/Brisbane/60/2008相比,HA基因的同源性在87.2％～98.4％之间,NA基因的同源性在94.5％～97.5％之间.氨基酸序列分析发现,与疫苗株相比,HA蛋白主要存在单个氨基酸的突变；种系进化分析发现,所有毒株HA和NA蛋白位于相应的谱系内,无抗原重排发生.结论 2010-2012年间长沙市甲型H1N1、H3N2、B型流感交替流行,B型流感病毒HA基因出现抗原漂移,但无重组毒株的出现.
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血凝素蛋白裂解位点对H5亚型禽流感病毒侵入细胞的影响
目的 通过RT-PCR反应获得了H5N1亚型禽流感病毒完整的血凝素基因(HA)并克隆到真核表达载体pcDNA3上,通过转染293T细胞进行了瞬时表达验证.方法 采用PCR定点突变技术,将其HA基因裂解位点的氨基酸组成由RKKR↓GLF突变为RSSR ↓ GLF,使其具有低致病性AIV的分子特征,并构建了表达突变后HA基因的真核表达载体pcDNA-Hm.将pcDNA-H5和pcDNA-Hm分别与MuLV假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111共转染转化了SV40大T抗原的人胚肾细胞293T后,收集转染细胞上清,通过Western-blot和细胞感染性实验来研究假病毒的特性.用缺乏囊膜蛋白和已经证实可以形成MuLV假病毒的水泡性口炎病毒糖蛋白G作为对照.结果 转染后形成假病毒进行裂解后进行Western-blot证明两种HA蛋白都能够整合到各自的假病毒颗粒表面,野生型的HA可以检测到三条带,分别与HA0、HA1和HA2大小相符,而突变后的HAm则仅能检测到一条带,与HA前体大小相符,说明其失去了裂解活性.通过感染293T、COS-7和NIH3T3三种不同的靶细胞后发现野生型的HA所形成的假病毒MuLV-H5具有感染性和泛嗜性,而突变后的HA所形成的假病毒则失去了感染性.结论 可以得出HA蛋白裂解位点的氨基酸组成不仅对H5亚型禽流感病毒的致病性有影响,对禽流感病毒侵入细胞也具有至关重要的作用.
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2010-2011年北京市儿童甲型H3N2流感病毒的血凝素基因特征和遗传进化分析
目的 了解2010年9月1日～2011年8月31日北京市儿童甲型H3N2流感活动特点,并对病毒血凝素的基因和进化特征进行研究.方法 采集哨点医院收集的1 040份儿童流感样病例样本和14份疫情样本,进行MDCK细胞分离病毒.选取26株甲型H3N2流感毒株进行血凝素(HA1)基因的扩增和序列测定.采用生物信息软件进行序列比对和进化分析.结果 2010-2011年流感监测季期间,总共分离64株甲型H3N2毒株,占分离毒株构成的65.31％.病毒HA1基因出现了Ⅰ、Ⅱ两个明显分支,均有S214Ⅰ氨基酸变异.另外,分支Ⅰ的毒株序列还均出现P162S、R261Q氨基酸变异;分支Ⅱ的毒株序列均出现D53N、K62E、Y94H、K144N、T212A、I230V氨基酸变异,涉及A、C两个抗原决定簇,并新增1～2个糖基化位点.结论 2010年9月～2011年2月期间北京市儿童甲型H3N2流感活动活跃,并且其毒株呈现出两个明显不同的进化分支,其中一个分支毒株的血凝素基因特性发生了明显改变.
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105例肾综合征出血热病人IgM、IgG抗体检测及血清学分型
肾综合征出血热(EHF)是危害人类比较严重的一种传染病,发病率和病死率都比较高.过去长春市为低发区,近几年,发病人数逐年增加.我市现已将肾综合征出血热列为重点防治疾病.为控制本病的发生与流行,我们于1999年7月～2000年5月采用IgM捕获ELISA法及间接ELISA法测定IgG对长春市不同地区临床病人血清进行IgM及IgG抗体测定,并将测得的IgM及IgG抗体阳性的病人血清用血凝抑制试验(HI)方法进行了血清学分型,现将结果报告如下:1 材料和方法1.1 试剂来源:IgM及IgG酶标试剂盒购于哈尔滨高新生物技术公司.分型抗原A-血凝素和R-血凝素,购于浙江省卫生防疫站.
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长沙市2009年甲型H1N1流感病毒血凝素基因特性分析
2009年4月21日,美国疾病预防控制中心(CDC)检出2名儿童感染新甲型H1N1流感病毒~[1],该病毒属于正黏病毒科(orthomyxoviridae),甲型流感病毒属(influenza virus A),单股负链RNA病毒,由大小不等的8个独立片段组成,共编码11种蛋白,主要通过飞沫或气溶胶经呼吸道传播,极易造成流行.
关键词： 甲型H1N1流感病毒 血凝素 基因特性 -
广州地区2009年乙型流感病毒血凝素基因特征分析
根据抗原性和基因特异性的差异,乙型流感病毒可分为B/Victoria/2/87系(Victoria系)和B/Yamagata/16/88系(Yamagata系)[1].血凝素(HA)基因与该病毒的进化趋势相关[2],HA的抗原变异主要发生在HA1区域[3],该区域4个主要的抗原表位[120-loop(HA1 116-137)、150-loop(HA1141-150)、160-loop(HA1 162～167)和190-helix(HA1194-202)]如发生变化,往往引起变异相关病毒株进化方向的改变[4].为了解2009年乙型流感病毒进化情况,本研究分析了HA1基因特点.
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浙江省1999-2010年乙型流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因变化特征分析
目的 分析1999-2010年浙江省乙型流感病毒主要抗原基因血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的分子变异特征.方法 采集浙江省流感暴发疫情和哨点监测医院的流感样患者呼吸道标本,荧光定量RT-PCR快速检测和病毒分离,选取乙型流感病毒分离代表株进行HA和NA基因测序,采用生物信息学软件分析变异和进化.结果 共分析浙江省乙型流感病毒分离株34株,其中Victoria系20株,Yamagata系14株;1999-2010年间Victoria系毒株的HA1基因变异率4.5%,Yamagata系毒株为3.4%;2004年后分离的Victoria系毒株均为基因重配株,HA属于Victoria 系,而NA属于Yamagata系;2010年新型甲型HINI流感流行高峰过后,浙江省仍以乙型流感病毒流行为主,分离株与2009-2010年流感疫苗株B/Brisbane/60/2008接近,与往年乙型流感毒株相比HA和NA发生多个氨基酸位点变异.结论 1999-2010年浙江省乙型流感病毒流行株发生明显变异,基因重配和抗原漂移是病毒发生变异的主要机制.
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云南省边境地区禽流感H5N1亚型病毒遗传多样性分析
目的 了解云南省边境地区禽流感H5N1亚型病毒遗传多样性.方法 2009-2011年7月在云南省边境地区采集境外家禽和野生鸟类棉拭子样品,经H5/Nl亚型特异性多重RT-PCR检测,阳性样品进行病毒HA基因扩增,克隆至pMD 18-T载体测序,并与已知参考毒株进行序列比对及系统发育分析.结果 36份阳性样品病毒HA基因测序获得15种HA序列,存在2个不同进化分支(2.3.2、2.3.4),2.3.2进一步可划分为3个进化小分支(Ⅱ-1～Ⅱ-3),2.3.4进一步可划分为2个进化小分支(Ⅰ-1和Ⅰ-2).2.3.2Ⅱ-1、Ⅱ-2毒株是新出现的H5N1亚型病毒变异株.结论 2009- 2011年7月云南省边境地区H5N1亚型病毒具有遗传多样性,病毒经历了多分支(2.3.2、2.3.4)至单一支(2.3.2)的进化过程.
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流行性感冒疫苗组分的确定及其免疫预防策略
流行性感冒(流感)病毒主要由内、外抗原两大部分组成,因外抗原中的血凝素和神经氨酸酶在不断变化,导致每年新亚型不断产生,其中流感病毒甲型变异频繁,尤其是甲1和甲3型易造成大流行,10～40年发生1次;乙型变异比较少,不会形成大流行;丙型没有变异.目前使用的流感疫苗一般包括3个型别即甲1、甲3和乙型流感病毒株.
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全球历年人甲型流感病毒H3A1抗原的分子进化研究
目的应用生物信息学数据库和工具,对现有的H3N2亚型人甲型流感病毒全球分离株的H3A1抗原序列进化规律进行分析研究.方法下载NCBI Genbank和流感病毒数据库中全部的甲型流感病毒H3A1序列,首先用两步聚类法进行样本拆分,随后分类绘制出完整的进化树.结果人H3A1序列呈现出单一主干的进化趋势,随着时间的推移,进化树结构和进化模型相关参数均呈现出一定的变化规律,关键变异株的出现则无明显的地域分布特征.结论人流感病毒H3A1抗原的进化主要是病毒抗原漂移和人类免疫选择相互作用的结果,新变异株的出现并未出现明显的地域倾向性,中国华南地区不应当被认为是H3亚型新变异株的发源地.
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高致病性H5亚型禽流行性感冒病毒血凝素单克隆抗体的制备与初步应用
以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FC1、7C6、10HD4和13G4.经血凝抑制试验法分析,结果发现这6株单抗具有特异性高、反应性强、识别谱宽且互补等特点.基于单抗2F2,初步建立了三种H5N1病毒诊断方法,经评估证实均具有很好的特异性.由此说明,研究制备的抗H5亚型禽流感病毒血凝素单抗可适用于H5N1病毒的诊断.
关键词： 禽流行性感冒病毒H5N1 血凝素 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验 胶体金免疫试验 -
鸭源H9N2AIV血凝素基因序列比较
为明确国内外鸭源H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素基因(hemagglutinin,HA)的遗传进化关系、血凝素蛋白裂解位点的氨基酸结构特征和血凝素蛋白受体结合位点的氨基酸变异特征,本研究选取GenBank中登录鸭源H9N2亚型AIV HA基因,通过MEGA4.1进行比对和分析,并绘制其遗传进化树.结果表明,鸭源H9N2亚型AIV在遗传进化上分为2大谱系:即Ck-Bj-1-94-1ike和North-Ame-like,中国大陆鸭源H9N2亚型AIV和亚欧美其它国家鸭源H9N2亚型AIV在遗传进化上分居完全不同的谱系,相互之间遗传进化关系较远.从血凝素受体结合位点看,亚欧美国家鸭源H9N2亚型AIV在第183、190和226位点的氨基酸均为鸭源AIV经典H、E和Q,且高度保守.但中国大陆地区H9N2亚型AIV第183位为N;第190位为AorVorT,与中国大陆鸡源H9N2亚型AIV一致;第226位中国鸭源H9N2亚型AIV有相当一部分为L,且近年福建省H9N2亚型AIV分离株在此处均为L.提示我们,中国大陆地区H9N2亚型AIV鸭鸡和鸡鸭相互交叉感染较为普遍.
关键词： 鸭源H9N2亚型禽流感病毒 血凝素 遗传进化 受体结合位点 分子特征
