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Fas配体与胃癌关系的综合分析
目的 综合分析Fas配体(FasL)与胃癌的关系.方法 计算机检索5个数据库(CNKI数据库、万方数据库、维普数据库、Springerlink全文期刊数据库、ProQuest全文期刊数据库)1990至2006年间国内外公开发表的关于用免疫组化的方法检测胃癌组织中FasL表达的文献;各文献研究假设与研究方法相似;病例组和对照组诊断明确;对样本大小明确;原始数据提供阳性表达的例数或阳性率.对每个研究进行复习并进行质量评估,对重复报告、研究质量差、信息少或数据不完整而无法利用的文献剔除.使用Review Manager 4.2.10软件进行Meta分析对数据进行处理,估计其合并OR值和95%CI.结果 共检索出相关文献49篇.根据文献的入选和排除标准,终纳入本次Meta 分析的共有13篇文献.在胃癌组和正常胃黏膜组的分析研究中,纳入分析10篇文献,结果表明FasL.的表达在胃癌组和正常胃黏膜组之间的差异有统计学意义(OR合并=14.88,95%CI 5.34～41.48;P＜0.00001);在不同分化程度的分析研究中,纳入分析8篇文献,结果表明FasL的表达在高中分化型胃癌和低分化胃癌之间的差异无统计学意义(OR合并=1.90,95%CIO0.68～5.28;P=0.22);在不同TNM分期的分析研究中,纳入分析5篇文献,结果表明FasL的表达在Ⅰ、Ⅱ期胃癌组和Ⅲ、Ⅳ期胃癌组之间的差异有统计学意义(OR合并=2.58,95%CI1.05～6.32,P=0.04);在有无淋巴结转移的分析研究中,纳入分析8篇文献,结果表明FasL的表达在有淋巴结转移胃癌患者和无淋巴结转移胃癌患者之间的差异无统计学意义(OR合并=1.00,95%CI0.45～2.21,P=1.00).结论 FasL的高表达是胃癌的危险因素,并且和不同的TNM分期有关.
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大鼠FasL+Sertoli细胞的分离与鉴定
为了将睾丸Sertoli细胞应用于细胞治疗,应用胶原酶、胰蛋白酶及脱氧核糖核酸酶消化制备睾丸Sertoli细胞,并对其做生活观察、透射电镜检查,了解其功能状态.SABC法标记Fas配体和卵泡刺激素受体的表达情况,对睾丸Sertoli细胞加以鉴定.培养的睾丸Sertoli细胞,形态完整,细胞器和细胞核保持良好,有丰富的线粒体、内质网、高尔基复合体和溶酶体,功能状态良好.且高度表达Fas配体和卵泡刺激素受体,出现优势生长现象.Fas配体阳性的睾丸Sertoli细胞可以作为联合移植的供体,发挥其免疫赦免作用.
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Fas和Fas配体在角膜移植免疫排斥反应中的表达
目的了解Fas和Fas配体(FasL)在发生免疫排斥的角膜植片中的表达情况,探讨其在角膜移植免疫排斥反应中的作用. 方法角膜移植术后排斥反应的患者42例,于再次行穿通性角膜移植术时取其排斥的移植片;正常角膜6例.进行免疫组织化学染色,观察正常角膜和移植片中上皮、基质和内皮层的Fas及Fas配体的表达. 结果在6例正常角膜中,角膜上皮、内皮Fas和FasL为阳性表达.42例移植片中,角膜上皮Fas和FasL均有表达.有新生血管形成及免疫细胞浸润的角膜基质中,血管内皮细胞、基质细胞FasL为阳性表达,Fas在部分浸润的免疫细胞中有表达;移植片内皮细胞层广泛破坏. 结论 Fas、FasL在角膜移植片中的表达,可能与角膜移植免疫排斥反应有关.
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体外转染mFasL-cDNA小鼠骨髓细胞预防移植物抗宿主病的实验研究
为了探讨通过Fas-FasL途径清除骨髓移植物中T细胞后,预防移植物抗宿主病(GVHD)的可能性,采用脂质体转移法将FasL-cDNA转染雌性BALB/c小鼠骨髓细胞,证实其获得表达后,体外与雄性BAC (BALB/c×C57BL/6) 小鼠骨髓移植物混合培养后输注给经致死照射的BALB/c鼠,然后观察受体鼠GVHD的表现、死亡率,进行组织病理学检查,骨髓细胞Y染色体及CFU-S检测.结果表明:实验组10只小鼠,60天死亡2只,4只有GVHD改变;对照组10只, 60天死亡7只,10只均有GVHD改变;两组骨髓细胞Y染色体分析显示均有供体鼠来源的骨髓细胞植入;CFU-S检测表明实验组动物体内10天即有CFU-S形成,移植后第20天即达正常水平.结论:转染mFasL-cDNA小鼠骨髓细胞能有效地预防GVHD的发生,并能使受体造血功能获得重建.
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通过FasL通路阻抑肿瘤免疫逃逸的研究
许多白血病和实体瘤细胞通过高表达Fas配体(FasL)而发生肿瘤的免疫逃逸.为了观察腺病毒载体向肿瘤细胞导入小鼠可溶性Fas(sFas)基因后能否阻抑肿瘤细胞通过FasL发生肿瘤免疫逃逸作用,采用AdEasy腺病毒载体系统,利用大肠杆菌内质粒间同源重组的方法分别构建携带小鼠sFas基因及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组腺病毒载体,扩增纯化后利用空斑试验测定滴度,Western blot检测蛋白的表达.然后,分别感染肿瘤细胞-EL4细胞,用氚胸腺嘧啶核苷(3H-thymidine,3H-TdR)掺入法检测其诱导靶细胞YAC-1的凋亡率.结果表明,获得了重组成功的复制缺陷的腺病毒载体AdsFas和AdEGFP,密度梯度离心纯化后其滴度达到1011pfu/ml,Westem blot分析证实前者能够高效表达出sFas蛋白.转染肿瘤细胞EL4细胞之后与YAC-1细胞混合培养,导入sFas组的YAC-1凋亡率在效靶比(E:T)为3:1,10:1和30:1时分别为6%、7%和9%,与对照组(分别为28%、37%和45%)相比明显下降,统计学有显著性差异(P＜0.01);而导入EGFP组YAC-1凋亡率(分别为30%、36%和48%)与对照组相似,没有统计学差异(P＞0.05).结论:腺病毒介导sFas的导入能够明显抑制肿瘤细胞EL4诱导Fas+细胞-YAC-1的凋亡,说明通过腺病毒转移sFas基因,在体外可以达到阻抑肿瘤细胞表面FasL产生的免疫逃逸作用,为寻找新的途径治疗肿瘤提供了方向.
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Fas配体在髓系白血病细胞中的表达及功能研究
为了解Fas配体(FasL)在髓系白血病细胞中的表达水平及其诱导Fas+敏感细胞发生凋亡的功能,用流式细胞术检测38例髓系白血病患者(外周血白细胞＞100×109/L)的白血病细胞在新鲜分离及IL-2和IFN-γ刺激后表面膜FasL的表达水平,将白血病细胞(1×106/ml)与Jurkat细胞(1×105/ml)混合培养24小时后,用DNA电泳和流式细胞术双标法检测Jurkat细胞发生凋亡的情况.结果表明:白血病细胞表面FasL表达量(3.59±1.05)%高于正常人(0.36±0.16)%,P＜0.001,经IL-2和IFN-γ刺激后其表达量明显增加(7.78±3.40)%,P＜0.01;白血病细胞刺激前后诱导Jurkat细胞发生的凋亡率分别为(8.28±1.61)%,(10.73±2.16)%,差异具有显著性意义.结论:FasL在髓系白血病细胞表面高表达且对Fas+的敏感细胞具有杀伤功能,推测Fas/FasL途径可能在白血病的"免疫逃逸"中发挥作用.
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转染外源性FasL的CD34+细胞诱导同种抗原特异性T细胞凋亡的实验研究
为探讨通过Fas/FasL途径选择性去除移植物中成熟T细胞的可能性,本研究借助反转录病毒途径,以FasL基因转染骨髓CD34+细胞,与经过富集的T细胞进行单向混合培养(刺激细胞/效应细胞比例为5:1),加入或不加入IFN-γ,IL-2,应用原位末端标记法(TUNEL)和流式细胞术(FCM)检测培养5天后的细胞凋亡率,并比较两种细胞因子对移植物中CD34+细胞的影响.以转染外源FasL的CD34+细胞为刺激细胞,T细胞凋亡率为(12.1±1.5)%[对照组为(3.2±1.1)%,P＜0.01];经IFN-γ或IL-2作用后,转染细胞诱导T细胞的凋亡率分别上升至(20.1±2.3)%,(17.6±1.3)%(P＜0.01);且IL-2对CD34+细胞Fas抗原的表达无明显影响.上述结果表明,转染外源FasL的骨髓CD34+细胞可诱导同种抗原特异性T细胞凋亡,IFN-γ和IL-2增强上述致细胞凋亡作用,且IL-2更有利于临床应用;提示该方案可选择性清除移植物中同种抗原特异性T细胞,可望为临床上防治移植物抗宿主病(GVHD)提供新的途径.
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转染mFas配体的COS-7细胞诱导Fas+淋巴瘤细胞系(Yac-1)凋亡
本研究探讨通过Fas配体(Fasligand,FasL)-Fas途径进行免疫治疗淋巴瘤的可能性.常规转化pBillneo-mFasL至大肠杆菌DH5α,经扩增、质粒抽提和纯化后,进行限制性内切酶酶切、mFasL基因PCR及其产物DNA测序,以鉴定pBillneo-mFasL内mFasL基因一级结构及插入方向;用脂质体法转染pBillneo-mFasL至猴肾COS-7细胞,G418选择培养后,Western印迹分析外源性mFasL cDNA基因表达水平,将高表达mFasL的COS-7细胞与Fas+小鼠淋巴瘤细胞系Yac-1以不同比例混合培养,5J时后收集悬浮的Yac-1细胞,用膜联蛋白(annexin)V/PI标记后,借助FCM观察细胞凋亡率.结果表明,质粒pBillneo-mFasL的EcoRI酶切获得920bp和7 227bp产物,HomdⅢ酶切获得1 293bp和6 807bp产物,初步证实插入mFasL cDNA片段与理论预计大小一致,并系正向插入;PCR扩增出自起始密码子(ATG)至终止密码子(TAA)后+36bp的mFasL cDNA全长890bp序列,DNA测序结果与基因库已知序列完全一致;pBillneo-mFasL转染COS-7细胞,并经G418选择培养后,Western印迹检测到明显mFasL蛋白质表达;当用这种高表达mFasL蛋白质的COS-7细胞与Fas+Yac-1细胞以1:1,5:1和10:1混合培养5 小时后,用annexin V/PI标记悬浮Yac-1,结果后者凋亡率分别为(22±4.8)%,(32.18±7.8)%和(51.8±5.4)%,与对照转染空质粒pBillneo的COS-7细胞组存在显著差异(P＜0.01).结论:通过FasL-Fas抗原途径体外具有明显杀伤高表达Fas抗原的淋巴瘤细胞的作用.
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乙型肝炎肝组织Fas，FasL和HBV抗原的表达
目的评价Fas和FasL介导细胞凋亡在乙型肝炎肝损伤中的作用及其与FBV抗原的关系。方法应用免疫组化方法检测了62例乙型肝炎患者肝组织内的Fas、FasL和HBsAg、HBcAg，并以6例正常肝组织为对照。结果 Fas/FasL在正常肝组织内无表达；Fas主要在乙型肝炎患者肝细胞质内表达，58例阳性(93.5％)；FasL在肝内浸润的单个核细胞和肝细胞质内均可见到，37例阳性(59.7％)。结论 Fas/FasL的表达程度与肝组织活动性炎症程度密切相关；Fas/FasL介导的细胞凋亡可能在乙型肝炎时肝损伤中起重要作用；Fas/FasL表达程度与肝内HBV抗原HBsAg、HBcAg无明显相关性。
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FasL相关蛋白SH3P12影响FasL细胞膜表达效应研究
目的 研究FasL相关蛋白SH3P12对FasL表达的影响.方法 构建SH3P12真核细胞表达载体,并与FasL共同短暂表达于人胚肾细胞293T细胞.以免疫共沉淀和免疫印迹法确定目的蛋白之间的相互作用,以免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜观察SH3P12与FasL在细胞内表达.结果 在转染的293T细胞中,SH3P12与FasL可形成免疫共沉淀的蛋白-蛋白复合物.荧光蛋白标记结合显微镜观察提示在无SH3P12存在时,FasL主要分布于293T细胞膜,并伴随部分蛋白表达在细胞内高尔基体或内含体样颗粒中;在有SH3P12存在时,FasL与SH3P12形成复合体,共同定位于细胞膜,此时细胞内表达FasL量明显降低.结论 SH3P12为FasL细胞内结合蛋白,其生物学活性可能为稳定FasL在细胞膜上的表达.
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CTLA4-FasL双功能融合蛋白分子抑制混合淋巴细胞反应及促进淋巴细胞凋亡
目的构建人CTLA4-FasL融合蛋白真核表达载体,表达CTLA4-FasL融合蛋白,通过体外实验初步研究其生物学特性. 方法通过特异引物分别扩增出CLTA4和FasL胞外区的cDNA,将它们拼接后,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,体外表达纯化.Western blot分析CTLA4-FasL融合蛋白的抗原性.体外细胞结合试验研究其结合特异性配体作用.混合淋巴细胞反应研究其抑制免疫应答的效应. 结果测序证实所扩增的PCR产物分别是CLTA4和FasL胞外区的cDNA,其序列与文献报道相符.成功构建了pcDNA3.1-CTLA4-FasL真核表达载体.Western blot分析结果显示,表达获得的蛋白具有CTLA4和FasL的抗原性.体外细胞结合试验显示,CTLA4-FasL融合蛋白可以分别与Jurkat细胞表面的Fas受体和Raji细胞表面的B7分子结合.混合淋巴细胞反应结果显示,该融合蛋白可以有效抑制异基因淋巴细胞的刺激作用及诱导淋巴细胞凋亡,并显示了显著的协同效应. 结论成功构建了CTLA4-FasL融合蛋白真核表达载体,体外表达并纯化了CTLA4-FasL融合蛋白,体外实验证实CTLA4-FasL融合蛋白是一个可以有效抑制免疫应答的双功能分子.
关键词： 细胞毒T细胞相关抗原 Fas配体 融合蛋白 基因表达 -
再生障碍性贫血患者外周血T细胞FasL的表达分析
目的比较分析再生障碍性贫血(AA)患者T细胞上Fas配体(FasL)的表达及其在胞内外的分布情况,观察AA T细胞胞浆FasL的释放特性及细胞毒作用. 方法以正常人"静息"T细胞和人为诱导活化的T淋巴母细胞为参照,采用免疫荧光标记和流式细胞技术,检测FasL在AA T细胞表面及胞浆中的分布;用体外大剂量PHA一过性刺激的方式诱导T细胞胞浆FasL的释放;以Jurkat细胞为靶向,同时辅以单抗阻断及超速离心的方法,观察AA T细胞FasL的释放特性和杀伤效应. 结果 AA T细胞表面及胞浆中均有FasL的异常表达,其中胞浆FasL的异常表达尤为显著;高浓度胞浆FasL可在大剂量PHA一过性刺激时迅速向胞外释放;PHA刺激后的AA T细胞培养上清有明显的Jurkat细胞杀伤活性,该效应可被FasL McAb阻断,或经超速离心加以去除. 结论 AA T细胞是一种处于预活化状态的细胞,具有与T淋巴母细胞相似的活化特征,含有高浓度、能以细胞外体形式诱导释放、具备完整活性的胞浆FasL是其异常活化的一大特点.
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选择性消化道脱污染对烫伤大鼠白细胞介素-18及相关介质表达的影响
目的探讨选择性消化道脱污染对烫伤大鼠白细胞介素-18及相关介质表达的影响。方法采用大鼠30%体表面积Ⅲ度烫伤模型，组织IL-18、IFN-γ、FasL mRNA含量采用逆转录聚合酶链式反应检测，IFN-γ蛋白含量采用ELISA法测定。结果烫伤后组织IL-18 mRNA表达较伤前值即有显著升高，8h达高峰，且一直持续至伤后24h；烫伤后组织IFN-γ mRNA表达开始增加，伤后8h达高峰。肠、肺组织IFN-γ水平与基因表达趋势基本一致。未致伤动物肠、肺可表达少量FasL mRNA，烫伤可使其表达增加。相关分析表明，组织IL-18 mRNA表达与IFN-γ mR NA、IFN-γ水平、FasL mRNA表达均呈显著正相关。结论肠、肺组织IL-18 mRNA表达在烫伤早期即显著增多，并呈一逐渐升高的趋势，创伤后组织IL-18 mRNA基因表达对IFN-γ、FasL的生成具有重要影响。SOD预治疗后可不同程度抑制IL-18及相关介质表达的表达。
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抑制层黏素受体过表达在胆管癌细胞免疫逃逸中的作用
目的 探讨抑制层黏素受体(LNR)过表达下调Fas配体基因表达在胆管癌免疫逃逸中的作用.方法 采用流式细胞仪分选出过表达层黏素受体的胆管癌细胞QBC939,用脂质体转染法转染层黏素受体RNA干扰质粒和阴性对照质粒各6 μg至过表达层黏素受体的胆管癌细胞QBC939中,用实时荧光定量PCR法检测未转染组、阴性组和阳性组QBC939细胞Fas配体基因的表达情况.结果 分选后的QBC939细胞层黏素受体的表达率高达95%,继续转染层黏素受体RNA干扰质粒后,其FasL基因表达水平较未转染组和转染阴性对照质粒组明显降低.结论 LNR过表达在胆管癌免疫逃逸中的作用可能是通过Fas-FasL信号通路实现的.
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凋亡相关因子Fas/FasL在慢性肝炎、原发性肝癌表达的规律
当病毒等损伤因素引起细胞损伤或癌变时,将诱导受损细胞及癌变细胞表面表达Fas及Fas L增加[1,2].
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Fas/Fas配体在大肠癌发生和免疫逃逸及反击中的作用
目的探讨Fas、Fas配体(FasL)在大肠癌发生和免疫逃逸及反击中的作用.方法应用免疫组织化学染色的方法,对52例大肠癌、27例大肠腺瘤、28例溃疡性结肠炎、30例正常大肠组织及23例大肠癌淋巴结转移癌组织进行Fas和FasL的检测.对52例大肠癌用TUNEL法,检测不同FasL表达区肿瘤细胞的凋亡情况.结果 (1)Fas在不同大肠组织中的表达规律是:大肠癌中表达低,其次是大肠腺瘤、溃疡性结肠炎,表达水平高的是正常大肠组织.FasL在不同大肠组织中的表达规律与Fas正好相反,大肠癌组织中表达高,其次是大肠腺瘤、溃疡性结肠炎,正常大肠组织中几乎不表达FasL.(2)Fas、FasL的表达与大肠癌的组织学类型无关(P＞0.05),与Dukes分期、分化程度、有无淋巴结转移有关(P＜0.05).(3)在同一大肠癌组织切片中,FasL的表达不均匀;FasL表达阳性区(n=25)肿瘤细胞的凋亡率(81.2%)比FasL阴性区(n=25)(47.4%)高(P＜0.01).(4)在23例大肠癌淋巴结转移癌组织中,发现23例转移癌FasL均强阳性表达,阳性细胞率均大于75%.结论 Fas、FasL在大肠癌发生和免疫逃逸及反击中起重要的作用.
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转FasL基因的树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的实验研究
目的观察转FasL基因的树突状细胞(DC)体内注射诱导大鼠肝移植免疫耐受作用,并研究其机制.方法用"二袖套法"行受体为Wistar大鼠肝移植36例,并随机分为3组:①对照组(n=12);②环孢霉素治疗组(n=12);③转FasL基因治疗组(n=12),腹腔注射转FasL基因的树突状细胞.手术后7 d分别杀死各组4只大鼠,用原位末端标记法及透射电镜观察移植肝细胞及肝脏内淋巴细胞凋亡,其余大鼠用于观察生存期.结果对照组大鼠在9～15 d迅速死亡,TUNEL及电镜观察发现肝细胞变性坏死明显;而环孢霉素治疗组及转FasL基因治疗组免疫排斥反应轻微,移植后大鼠已存活超过6个月,原位末端标记法及透射电镜均发现FasL基因治疗组肝脏内浸润淋巴细胞凋亡明显.结论转FasL基因DC细胞治疗能有效地诱导肝移植免疫耐受,其机制是诱导了肝脏内浸润淋巴细胞凋亡.
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水飞蓟宾对荷人肝癌BALB/c鼠NK细胞的免疫活性的调节作用
水飞薊宾是菊类植物水飞薊的提取物.近来,体外研究发现水飞薊宾可以直接抑制肝癌细胞株生长[1].我们观察水飞薊宾对荷人肝癌BALB/c鼠自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)的Fas配体(Fas ligand,FasL)表达及NK细胞活性的影响,探讨水飞薊宾对于肝细胞癌宿主细胞免疫的影响.
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Fas配体阳性睾丸细胞和环孢素A对移植胰岛细胞存活起协同保护作用
目的探讨Fas配体(Fas L)阳性睾丸细胞与胰岛细胞共移植后联用环孢素A(CsA)对移植胰岛细胞存活的协同保护作用. 方法将同种大鼠胰岛细胞与睾丸Sertoli细胞同侧或异侧共移植于41只糖尿病SD大鼠受体肾包膜下.实验大鼠分7组,术后酌用CsA,观察各组大鼠移植物存活情况. 结果单纯胰岛细胞移植(对照组)后胰岛细胞的平均存活期为(4.6±1.1)d,加用CsA存活期明显延长至(21.8±4.7)d(P<0.01).与1×107个睾丸细胞同侧共移植的胰岛细胞平均存活期超过(57.5±4.0)d,但如移植前先封闭睾丸细胞表达的FasL后,移植的胰岛细胞平均存活期缩短为(5.8±2.6)d.胰岛细胞与1×105个睾丸细胞分别共移植于两侧肾包膜下,术后联用CsA,胰岛细胞的平均存活期超过(55.0±6.5)d,与1×107个睾丸细胞同侧共移植的存活期相近,但比对照组或CsA组则显著延长(P<0.01).当胰岛细胞与1×106个睾丸细胞分别共移植且不用CsA时,胰岛细胞存活期平均仅为(11.5±3.1)d,但仍较对照组延长(P<0.05). 结论表达FasL的睾丸细胞与CsA联用后可通过不同机制抑制胰岛细胞移植排斥反应而起到全身的协保护作用.
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Fas配体表达对同种胰岛移植的影响
目的探究睾丸细胞FasL表达能否对共移植的胰岛移植物提供免疫豁免作用以及胰岛细胞FasL基因转染对同种胰岛移植的影响. 方法将同种大鼠胰岛及睾丸细胞同时移植于糖尿病受体,重组腺病毒AdV-FasL感染胰岛细胞后移植,观察移植物存活情况、胰岛功能,并检测移植物内浸润淋巴细胞以及基因转染胰岛细胞凋亡情况. 结果单纯移植胰岛组平均存活期为(6.3±0.56)?d.与胰岛细胞同时移植的睾丸细胞数增加至1×107时,存活期大于50?d(P＜0.05).表达FasL的睾丸细胞在移植物内诱导浸润淋巴细胞凋亡.FasL基因转染组出现排斥加速,存活期缩短至(3.4±0.24)?d.FasL转染的胰岛细胞在移植后24 h见FasL表达,48 h表达增强,移植后FasL转染胰岛细胞凋亡. 结论表达FasL的睾丸细胞与胰岛同时移植可诱导活化的淋巴细胞凋亡,使胰岛移植物获得免疫豁免、存活期延长,但通过FasL基因转染使胰岛细胞直接表达FasL引起胰岛细胞凋亡和粒细胞浸润,导致排斥加速.
