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四嗪二甲酰胺抑制T淋巴细胞活化的实验研究
目的 研究四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)对植物血凝素(PHA)刺激的T淋巴细胞体外活化的影响,初步探讨其免疫抑制作用.方法 从健康人外周血分离淋巴细胞,经PHA刺激诱导淋巴细胞活化,ZGDHu-1单独或联合环孢霉素A(CSA)作用24 h、48 h,检测各组T淋巴细胞的增殖、凋亡情况.采用流式细胞仪检测CD3~+ CD69~+、CD3~+ CD25~+、CD4~+ CD25~+、CD8~+ CD25~+和CD3~+ Fas~+、CD4~+ Fas~+、CD8~+ Fas~+.用Annexin V/PI染色结合流式细胞术,分析淋巴细胞早期凋亡.酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清IL-2和转化生长因子-β1(TGF-β1).结果 ZGDHu-1能明显降低PHA活化的CD3~+ CD69~+、CD3~+ CD25~+、CD4~+ CD25~+和CD3~+ Fas~+、CD4~+ Fas~+、Annexin V~+/PI~-,并降低活化T淋巴细胞的IL-2分泌及促进TGF-β1的分泌,联合CSA应用效果更明显.结论 ZGDHu-1能抑制T淋巴细胞活化,降低T淋巴细胞凋亡,和CSA联合具有一定的协同效应.
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再生障碍性贫血患者外周血T细胞FasL的表达分析
目的比较分析再生障碍性贫血(AA)患者T细胞上Fas配体(FasL)的表达及其在胞内外的分布情况,观察AA T细胞胞浆FasL的释放特性及细胞毒作用. 方法以正常人"静息"T细胞和人为诱导活化的T淋巴母细胞为参照,采用免疫荧光标记和流式细胞技术,检测FasL在AA T细胞表面及胞浆中的分布;用体外大剂量PHA一过性刺激的方式诱导T细胞胞浆FasL的释放;以Jurkat细胞为靶向,同时辅以单抗阻断及超速离心的方法,观察AA T细胞FasL的释放特性和杀伤效应. 结果 AA T细胞表面及胞浆中均有FasL的异常表达,其中胞浆FasL的异常表达尤为显著;高浓度胞浆FasL可在大剂量PHA一过性刺激时迅速向胞外释放;PHA刺激后的AA T细胞培养上清有明显的Jurkat细胞杀伤活性,该效应可被FasL McAb阻断,或经超速离心加以去除. 结论 AA T细胞是一种处于预活化状态的细胞,具有与T淋巴母细胞相似的活化特征,含有高浓度、能以细胞外体形式诱导释放、具备完整活性的胞浆FasL是其异常活化的一大特点.
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HIV-1感染者CD73+CD8+T细胞减少与T细胞异常活化的相关性研究
目的 探讨HIV-1感染者外周血CD8+T细胞上CD73的表达特点及其与T细胞异常活化和疾病进展的关系.方法 研究入选65例HIV-1感染者和27例健康对照.通过流式细胞术检测研究对象外周血CD73+CD8+T细胞的频率和绝对计数,并将患者CD73+CD8+T细胞绝对计数和频率与其CD4+T细胞计数、HIV-1载量以及CD38+CD8+T细胞频率进行相关性分析.结果 与健康对照相比,HIV-1感染者外周血CD73+CD8+T细胞绝对计数和频率均明显降低(P均 <0.05);HIV-1感染者外周血CD73+CD8+T细胞绝对计数和频率与CD4+T细胞计数呈正相关(r=0.555,P=0.001;r=0.342, P=0.005),与CD38+CD8+T细胞频率呈负相关(r=-0.384,P=0.002;r=-0.387,P=0.001);HIV-1感染者CD73+CD8+T细胞的绝对计数与HIV-1载量呈弱负相关(r=-0.261,P=0.035).结论 HIV-1感染者外周血CD73+CD8+T细胞的减少不但与患者T细胞的活化程度呈显著负相关,而且与AIDS疾病进展相关.
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淋巴细胞减少期联合免疫重建和瘤苗免疫增强抗肿瘤免疫的机制
目的阐明向免疫重建的淋巴细胞减少小鼠(reconstituted lymphopenic mice,RLM)进行瘤苗免疫增强抗肿瘤免疫反应的机制.方法分别以放疗和环磷酰胺处理C57BL/6小鼠,建立淋巴细胞减少模型,并各设正常-非免疫组、RLM-非免疫组、正常-免疫组和RLM-免疫组等4个实验组.在免疫重建的24 h内,分别用灭活黑色素瘤细胞F10(放疗实验部分)和GM-CSF修饰的活黑色素瘤细胞D5-G 6(化疗实验部分)免疫,8～10 d后采集肿瘤疫苗部位引流淋巴结(tumor vaccine draininglymph node,TVDLN),以FACS分析细胞表型.磁珠纯化的T细胞分别经anti-CD3及anti-TCRβ刺激后,分别以[3H]-TdR掺入法和FACS检测T细胞的增殖能力和CD69的表达情况,以此反映T细胞的激活阈值.结果 RLM-免疫组TVDLN中,DC细胞和活化T细胞的频数显著增高.新鲜T细胞的体外增殖能力显著增强,激活阈值明显降低.结论放、化疗引起的淋巴细胞减少可诱导T细胞增殖活化,激活阈值降低,有助于瘤苗免疫打破机体对肿瘤的免疫耐受,增强抗肿瘤免疫反应.
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协同刺激分子CD46诱导T细胞分泌IL-10的研究
目的 探讨补体调节蛋白CD46作为一种新的T细胞共刺激分子参与T细胞活化的作用机制.方法 磁珠分离纯化人外周血中CD4+T细胞,在加入或未加入外源性IL-2情况下,采用CD3/CD46或CD3/CD28刺激培养.ELISA方法测定培养上清液中IL-10、IFN-γ及IL-4的浓度,用氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定细胞增殖速率.结果 在加入外源性IL-2时,CD3/CD46或CD3/CD28刺激CD4+T细胞分泌IL-10水平较缺乏IL-2时明显增加.在中等浓度CD3刺激下,以CD46为协同刺激分子时,CD4+T细胞分泌IL-10水平较以CD28为协同刺激分子时水平升高.以CD46为协同刺激分子时,CD4+T细胞分泌IFN-γ水平降低,两者均无IL-4分泌.在CD3/CD46刺激下,CD4+T细胞增殖能力较CD3/CD28刺激下显著降低.结论 CD46作为一种新的T细胞共刺激分子能够刺激T细胞活化,并导致IL-10分泌增加.
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生物制剂治疗银屑病的机制及应用进展
银屑病是一种免疫性疾病，大量研究证实 T细胞在其发生、发展中起重要作用。近年来，传统药物治疗银屑病的疗效不高、不良反应大，而生物制剂表现出显著的疗效和较好的安全性。靶向性生物制剂能阻断T细胞活化及其相关细胞因子的产生，在治疗中、重度银屑病方面疗效显著。近年来国外应用生物制剂治疗银屑病的报道屡见不鲜，国内虽有使用，但甚少。该文对多种银屑病生物制剂的作用机制、临床疗效和国内病例报道进行了综述。
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乌贼墨对小鼠T细胞亚群和T细胞活化的影响
目的:研究乌贼墨对小鼠T细胞亚群和T细胞活化的影响.方法:实验组小鼠每天灌胃5%的乌贼墨0.5 ml,连续7 d.对照组小鼠给予等量生理盐水.流式细胞术检测小鼠外周血CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+比值及IL-2αR(CD25)表达.结果:实验组小鼠外周血CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+比值及IL-2αR(CD25)表达较对照组小鼠均有明显升高.而CD8+T细胞却无显著性变化.结论:乌贼墨通过增高CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+比值及IL-2αR(CD25)表达对小鼠免疫功能进行调节.
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γδT细胞表达共刺激分子及协同信号通路的研究进展
根据T细胞受体的不同,人体T淋巴细胞分为αβT细胞和γδT细胞.近年αβT细胞共刺激信号在调节T细胞活化及耐受方面的研究取得了重要的进展,而在γδT细胞相关的研究较少.明确这些共刺激分子及其信号通路在γδT细胞免疫应答的不同阶段发挥的不同正向负向调节作用,将为病毒感染、肿瘤、自身免疫性疾病、移植后排斥等疾病的治疗提供新的前景.
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外用广谱半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶抑制剂抑制小鼠变应性接触性皮炎的激发
目的 研究外用广谱半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)抑制剂苄氧羰基-缬氨酰-丙氨酰-门冬氨酰氟甲基酮(Z-VAD-FMK)对小鼠变应性接触性皮炎(ACD)激发阶段的抑制作用,探讨其对T细胞的作用.方法 以2,4二硝基氟苯(DNFB)制作小鼠经典ACD模型,于激发前外用不同浓度的Z-VAD-FMK,以耳肿度、双耳重量之差及组织切片中同一位置双耳双面距离之差为指标,观察Z-VAD-FMK对小鼠ACD激发阶段的抑制作用；以酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠耳皮损中T细胞因子干扰素γ(INF-γ)及白细胞介素2(IL-2)的含量,以实时反转录PCR( real-time RT-PCR)方法检测上述因子mRNA水平(实验结果以“相对于每百万管家基因的拷贝数”表示)；进行局部淋巴结分析(LLNA),以5-溴脱氧尿核苷(BrdU)-流式细胞术检测耳引流淋巴结中淋巴细胞增殖活性,以流式细胞术检测淋巴细胞表面活化标记.结果 1.25 mmol/L Z-VAD-FMK组小鼠耳肿度为(12.6±1.2)×10-2 mm,双耳重量差为(3.1±0.2)mg,镜下双耳双面距离差为(12.1±1.1)×10-2 mm,均低于阴性对照组[(17.4±1.6)× 10-2mm,(4.2±0.3) mg,(16.7±1.5)×10-2mm;q =3.25、2.98、3.12,均P＜0.05].1.25 mmol/L Z-VAD-FMK组小鼠耳皮损中INF-γ与IL-2mRNA及蛋白的表达均低于阴性对照组[ INF-γ mRNA:152±12比220±15,IL-2 mRNA:96 ±8比156±11,q=3.15、3.42; INF-γ蛋白:(856±45) pg/ml比(1180±58)pg/ml,IL-2蛋白:(167±12) pg/ml比(225±16) pg/ml,q=3.11、3.14；均P＜0.05].1.25 mmol/L Z-VAD-FMK组小鼠耳引流淋巴结中T细胞内掺入的BrdU的平均荧光强度明显低于阴性对照组(185±15比298±21,q=3.02,P＜0.05),T细胞3种表面活化标记CD69、CD25与Ia阳性细胞的百分率亦均明显低于阴性对照组(7.8％±0.7％比10.5％±1.0％,9.8％±0.8％比14.5％±1.1％,31.2％±2.8％比46.5％±3.2％,q =3.16、3.52、3.11,均P＜0.05).结论 在小鼠ACD激发前外用广谱caspase抑制剂Z-VAD-FMK可以抑制小鼠皮损局部及耳引流淋巴结中T细胞的增殖与活化,从而抑制小鼠ACD的发生.
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低氧暴露对大鼠外周血T淋巴细胞活化的影响
目的:探讨低氧暴露后大鼠外周血T淋巴细胞亚群及活化共刺激分子的变化,为干预措施的研究提供科学依据.方法:采用三色免疫荧光标记流式细胞仪分析法,观察在低氧暴露前和模拟海拔8 000 m低氧暴露8 h、3d,6 d和10 d后,大鼠外周血T淋巴细胞亚群和T淋巴细胞活化共刺激分子的变化.结果:模拟海拔8 000 m低氧暴露8 h后,大鼠CD3<'+>、CD8<'+>、CD8<'+>CIY28<'+>细胞数较低氧前均显著降低(P均<0.01);低氧暴露3 d后,除上述变化外,CD4<'+>CD28<'+>细胞敷也显著降低(P<0.01),CD4<'+>CD28<'+>细胞数显著增加(P<0.01);低氧暴露6 d和10 d后,CD3<'+>、CD4<'+>呈现进一步降低趋势,CD8<'+>CD28<'+>细胞数显著增加(P<0.01).结论:说明模拟海拔8 000 m低氧暴露8 h和3 d后,大鼠外周血CD8<'+>、CD4<'+>T淋巴细胞活化水平均显著下降,随着低氧暴露时间的延长,CD8<'+>T淋巴细胞活化水平由降低变为增加.
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尘肺患者T细胞及T细胞活化状态分析
目的 探讨尘肺及合并肺部感染患者外周血T细胞的表达特性及T细胞的活化状态,分析其与疾病的关系.方法 选择尘肺患者120例,尘肺合并肺部感染患者20例,肺结核合并感染患者42例和健康志愿者23例,采集患者肝素抗凝全血100 μL,运用流式细胞术检测CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞,CD8+CD28+活化T细胞及CD4+CD25hi调节性T细胞(Treg),同时采用统计学方法对结果进行分析和比较.结果 与对照组、肺结核合并感染组比较,尘肺组及尘肺合并肺部感染组CD3+T细胞无明显变化(P>0.05);尘肺组、尘肺合并肺部感染组、肺结核合并感染组CD4+T细胞分别为(34.17±0.60)%、(33.11±2.36)%和(44.34±1.90)%,均明显低于对照组(49.94±1.72)%(P<0.05),且尘肺组、尘肺合并肺部感染组均明显低于肺结核合并感染组(P<0.05);尘肺、尘肺合并感染组CD8+T细胞分别为(27.85±0.66)%和(24.05±2.08)%明显低于对照组(42.15±1.18)%(P<0.05),而肺结核合并感染组则高于对照组(P<0.05).CD8+CD28+的活化T细胞尘肺组、尘肺合并肺部感染组、肺结核合并感染组分别为(21.86±0.46)%、(20.35±1.82)%和(21.94±0.95)%均明显低于对照组(54.47±2.44)%(P<0.05),而CD4+CD25hi的Treg则明显高于对照组(P<0.05).结论 尘肺患者其疾病的发生和发展与T细胞亚群分布失衡密切相关,且其T细胞亚群的分布与结核并感染患者明显不同.
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CTLA4-Ig诱导的免疫耐受及其在肾移植中的应用
肾移植后排斥反应是影响受者和移植肾长期存活的主要危险因素,细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4-lg)与排斥反应的发生密切相关.本文综述了CTLA4-Ig诱导的免疫耐受及其在肾移植中应用的相关文献.
关键词： 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白 T细胞活化 肾移植 免疫耐受 排斥反应 -
BTLA信号对T细胞活化的起始和早期阶段的调节作用
目的:观察BTLA分子在T细胞上的表达并探讨其在各个阶段不同时相对T细胞活化的抑制.方法:分离人外周血单个核细胞,经阴性选择磁珠分离纯化获得T淋巴细胞.检测T细胞上BTLA、CTLA-4和PD-1的表达;用CD3抗体刺激T细胞活化,比较BTLA、CTLA-4和PD-1在T细胞活化过程中的动态表达.CD3抗体联合CD28抗体活化T细胞,在不同的活化时间,MTT法检测BTLA单抗8H9对T细胞增殖的影响.GM-CSF和IL-4体外诱导单核细胞分化成未成熟DC,CD40抗体刺激DC成熟,流式榆测HVEM在DC上的表达.用DC诱导T细胞活化,加入游离8H9或抗HVEM抗体,阻断HVEM和BTLA结合,MTT法检测T细胞增殖.结果:静止T细胞组成性高表达BTLA,不表达CTLA-4和PD-1分子.T细胞活化后,BTLA分子表达有所降低,然后迅速回升至高水平.CTLA-4、PD-1分子在活化后两大几乎不表达,第三天开始表达并逐渐上升.8H9可以抑制CD3和C028抗体活化的T细胞增殖.CD3和CD28抗体预先活化T细胞24小时或48小时后,再加入8H9仍然具有抑制效应,但不如在T细胞活化之初加入8H9的抑制效应.单核细胞诱导的不成熟DC上高表达HVEM,当DC成熟后,HVEM表达降低.用游离8H9或HVEM抗体阻断DC表面HVEM与T细胞表面BTLA结合,48小时之内均明显增强了DC诱导的T细胞增殖.结论:BTLA信号可以提高T细胞的活化阈值,在T细胞活化的起始和早期阶段发挥重要的负性调控作用.
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凋亡细胞体外抑制T细胞活化
目的:研究凋亡细胞对T细胞活化的影响.方法:以ConA刺激小鼠脾细胞增殖体系为研究对象,观察凋亡细胞预处理后对ConA刺激的脾细胞CD69表达的影响.结果:凋亡细胞可以抑制T细胞活化,而活细胞或坏死细胞却不能,同时抑制效果与凋亡种类及凋亡诱导方式无关,而与凋亡细胞数量密切相关.结论:研究证明了凋亡细胞可以主动抑制T细胞活化,这一发现拓宽了目前对凋亡的认识,表明凋亡细胞主动调节免疫反应在一些生命的基本现象和一些疾病中有重要意义.
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孕酮对人T淋巴细胞体外活化CD69表达的作用
目的:探讨孕酮(Progesterone, Prog)及地塞米松( Dexamethasone, Dex )对人外周血T淋巴细胞体外活化CD69表达的作用.方法:以女性健康志愿者(10名)为研究对象,以蛋白激酶C的刺激剂佛波醇酯(Phorbol ester,PDB)为T 淋巴细胞的活化剂,采用双荧光染色流式细胞技术,检测CD3+的T淋巴细胞表达早期活化表面分子CD69的百分率,以观察Prog、Dex及Prog加上Dex对外周血T淋巴细胞体外活化的作用.结果:在体外培养条件下,无论单独使用Prog还是Dex均增强低剂量PDB刺激CD69的表达. 然而,与单独使用Prog或Dex 的作用相比,Prog加上Dex明显减弱低剂量PDB的活化CD69的表达.结论:同时使用Prog与Dex可明显抑制T淋巴细胞的体外活化,提示在临床上联合使用Prog和Dex对自身免疫性疾病病人可能产生抑制免疫炎症作用.
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对系统性红斑狼疮异常T细胞活化机制及相关药物的研究
系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一种与环境和遗传因素相关的复杂性自身免疫系统疾病,以大量自身抗体产生、免疫复合物蓄积导致多系统损伤为特点.SLE的发病机制极为复杂,其中,以异常T细胞活化较为重要,因其引起细胞因子失衡,导致机体持续产生自身抗体和自身反应性T细胞.本文将以异常T细胞活化过程中的钙离子信号异常为核心,概述近年来SLE异常T细胞活化机制及其相关药物研究的新措展.
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Caspase在T细胞活化与增殖中的作用
半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶( caspases)是一类同源蛋白酶,主要参与细胞的凋亡过程.近年来的研究表明,该家族部分成员在T细胞活化与增殖中亦发挥重要作用,主要体现在以下3个方面:T细胞活化过程中检测到多种caspases活性；caspase-8失活后导致了人与鼠T细胞免疫的缺陷；体外实验中,caspase抑制剂能够阻断抗CD3单抗及超抗原引起的T细胞的活化与增殖.目前,部分体内实验已经证实了caspase抑制剂抗免疫反应及抗炎症反应的有效性,这为免疫性及炎症性疾病提供了新的治疗思路,为研制新型抗免疫、抗炎药物提供了依据.
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T细胞活化促进B细胞产生抗体机制的研究
B细胞活化和分化为抗体产生细胞的过程中,T细胞活化和T/B细胞相互作用的分子解析对研究自身抗体参与的自身免疫性疾病的发病机制和免疫干预具有重要的意义.为深入探讨人活化T细胞促进B细胞抗体产生的分子机制,我们建立CD4+ T细胞和B细胞体外共培养体系,将活化CD4+T细胞和B细胞在体外共培养,测定不同时间培养上清液中IgG和IgM的水平,并通过抗体阻断实验分析参与B细胞抗体产生的重要分子.结果显示:CD4+ T细胞在抗CD3/CD28抗体共同作用24 h后即被活化,IL-2和IFN-γ的分泌明显增加,细胞表面黏附分子ICAM-1和诱导性协同刺激分子ICOS的表达强度显著增高;活化CD4+ T细胞与B细胞共培养4d起,细胞培养上清液中可以检测到IgG和IgM,并随着共培养时间的延长而其量逐渐升高,抗ICAM-1抗体和抗ICOS抗体加入共培养体系可以明显降低培养上清液中IgG和IgM水平,其中抗ICAM-1抗体的阻断作用明显强于抗ICOS抗体.上述研究结果为人T细胞的活化促进B细胞抗体产生提供了重要证据,也为自身免疫病中T/B细胞相互作用的研究提供简便的实验方法和潜在的治疗靶点.
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米诺环素对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响
研究米诺环素(MNC)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.以ConA刺激小鼠淋巴结来源的淋巴细胞,以不同终浓度的MNC与T细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModFit软件分析T细胞增殖相关指数.结果:终浓度为10、25和50/μmol/L的MNC显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的71.20%±1.08%,分别降低为64.43%±1.39%、53.34%士1.26%和33.65%士1.91%;CFDA-SE染色结果显示,培养48 h和72 h的ConA组T细胞的增殖指数(P1)分别为1.57土0.03和2.06±0.02,各浓度的MNC对ConA刺激的T细胞增殖具有明显的抑制作用,以50μmol/L的MNC抑制作用明显,48 h和72 h的P1分别为1.01±0.02和1.03±0.01,与相应时间的对照组比较,均有统计学意义(P<0.01).MNC能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖.具有独立于其抗菌活性的抗炎作用.
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利用II型胶原变构肽抑制类风湿关节炎患者T细胞活化的研究
为了研究II型胶原(CII)变构肽对类风湿性关节炎(RA)患者外周血T细胞激活的抑制作用,以固相法合成CII263-272原型肽及3条变构肽,计算机模拟分析变构肽与HLA-DR4分子的结合能力.3H掺入法检测61例RA患者外周血单个核细胞对CII263-272原型肽及变构肽的T细胞增殖反应.ELISA法检测CII263-272原型肽及变构肽刺激下外周血T细胞IL-2及IFN-γ的分泌.竞争抑制试验观察CII变构肽对原型肽介导T细胞激活的抑制作用.计算机模拟结果发现,CII263-272原型肽可与HLA-DR4分子结合,在此基础上替换TCR结合位点267位谷氨酰胺、270位赖氨酸和271或265位甘氨酸为丙氨酸,不影响该多肽与HLA-DR4分子的结合能力.CII变构肽在RA患者外周血T细胞具增殖中有明显低反应性,下调IL-2和IFN-γ的产生,并且可特异性抑制CII原型肽诱导的T细胞活化 (P＜0.05或P＜0.01).以上结果提示,替换CII263-272多肽中与T细胞受体结合的氨基酸形成的CII变构肽可抑制RA患者外周血T细胞活化,可能在本病的免疫治疗中有重要意义.
