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重组腺病毒Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系感染效率的比较研究
目的以 Ad5-GFP 及 Ad5/F35-GFP 为对照，评价Ad5/F11p-GFP 对不同肿瘤细胞系的感染效率。
方法制备并纯化 Ad5-GFP、Ad5/F11p-GFP 及 Ad5/F35-GFP三种重组腺病毒，以不同的感染复数（MOI）感染乳腺癌细胞系 SKBR-3、MCF-7及肾癌细胞系786O。48 h 后，荧光显微镜观察 GFP 的表达，流式细胞仪检测感染效率及不同细胞表面柯萨奇腺病毒受体（CAR）、CD46和桥粒芯糖蛋白质2的表达。
结果 Ad5/F35-GFP 对 SKBR-3、MCF-7及 786O 均具有很高的感染效率，且其在较低的 MOI 时就具有较高的感染效率；Ad5/F11p-GFP 对 CD46高表达的 MCF-7及 786O具有较高的感染效率，5 MOI 感染即可达到60%以上的感染效率；而 Ad5-GFP 仅对 CAR 高表达的细胞系786O具有较高的感染效率，且感染效率随着 MOI 的增加而升高。Ad5/F11p-GFP 和 Ad5/F35-GFP 对三种肿瘤细胞系的感染效率明显高于 Ad5-GFP。
结论对5型腺病毒进行纤维顶球的改造，可增强对肿瘤细胞的感染效率。 -
协同刺激分子CD46诱导T细胞分泌IL-10的研究
目的 探讨补体调节蛋白CD46作为一种新的T细胞共刺激分子参与T细胞活化的作用机制.方法 磁珠分离纯化人外周血中CD4+T细胞,在加入或未加入外源性IL-2情况下,采用CD3/CD46或CD3/CD28刺激培养.ELISA方法测定培养上清液中IL-10、IFN-γ及IL-4的浓度,用氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定细胞增殖速率.结果 在加入外源性IL-2时,CD3/CD46或CD3/CD28刺激CD4+T细胞分泌IL-10水平较缺乏IL-2时明显增加.在中等浓度CD3刺激下,以CD46为协同刺激分子时,CD4+T细胞分泌IL-10水平较以CD28为协同刺激分子时水平升高.以CD46为协同刺激分子时,CD4+T细胞分泌IFN-γ水平降低,两者均无IL-4分泌.在CD3/CD46刺激下,CD4+T细胞增殖能力较CD3/CD28刺激下显著降低.结论 CD46作为一种新的T细胞共刺激分子能够刺激T细胞活化,并导致IL-10分泌增加.
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乳腺癌患者手术治疗前后血清CD46水平检测及临床意义
目的：研究乳腺癌患者手术治疗前后血清CD46水平检测及临床意义。方法应用ELISA法对58例乳腺癌患者(实验组)进行手术治疗前后CD46水平的检测,并与30例正常对照组进行对比。结果实验组术前血清CD46显著高于对照组,术后CD46水平较术前显著下降(P<0.05)。术后复发患者术前及术后CD46变化差值显著高于非复发组,并与患者无病生存期呈正相关(r=0.57, P<0.05)。结论检测乳腺癌患者手术前后血清CD46水平变化可作为诊断及预后的预测参数。
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不同浓度CD46预先给药对鼠原代培养小胶质细胞补体蛋白表达的影响
目的 评价不同浓度CD46预先给药对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的鼠原代小胶质细胞补体蛋白表达的影响.方法 培养原代小胶质细胞,取分离纯化的小胶质细胞接种于24孔板,随机分为4组(n=6):正常对照组、LPS组、低浓度CD46组和高浓度CD46组.采用噻唑蓝法检测细胞活性,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定培养上清液补体C3浓度.结果 LPS组、低浓度CD46组、高浓度CD46组补体C3表达均较正常对照组增加(P＜0.01);低浓度CD46组、高浓度CD46组补体C3表达均较LPS组减少,且高浓度CD46组补体C3表达较低浓度CD46组减少(P＜0.05).结论 CD46可明显抑制LPS诱导的小胶质细胞激活,显著减少补体C3释放.
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复合皮移植术对大面积烧伤瘢痕整形患者血管紧张素CD46及临床疗效的影响
目的：：探讨复合皮移植术对大面积烧伤瘢痕整形患者血管紧张素、CD46的影响及临床疗效。方法：收集我院就诊或住院治疗的60例大面积烧伤瘢痕整形患者，随机分为实验组和对照组，每组30例。分别行相应的手术方式。对照组患者采用反复切取后躯干瘢痕皮的方法，实验组患者行复合皮移植术，术后给予患者预防性抗生素治疗预防感染。治疗结束后对患者血管紧张素Ⅱ、CD46水平、创面愈合率以及创面周围炎症反应情况进行检测并比较。结果：与治疗前相比，治疗后患者血管紧张素Ⅱ、CD46水平均下降(P<0.05)；与对照组相比，实验组患者的血管紧张素Ⅱ、CD46水平较低(P<0.05)，创面愈合率以及创面周围炎症反应积分较高( P<0.05)。结论：复合皮移植术能够降低大面积烧伤瘢痕整形患者血管紧张素Ⅱ以及CD46水平，患者创面愈合较快，炎症反应情况较低，对临床有指导意义。
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CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染人肺泡上皮细胞中的作用
目的:探讨CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染人肺泡上皮细胞中的作用.以及CD46和Nectin-4之间的相互作用.方法:分为麻疹病毒感染前处理组和感染后2 h组,均用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理人肺泡上皮细胞,并设对照组.检测细胞内病毒滴度的变化,采用Western blot和Real-time PCR检测NP蛋白的表达水平,并运用免疫共沉淀检测CD46与Nectin-4的相互作用.结果:与对照组相比,麻疹病毒感染前用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理的人肺泡上皮细胞内麻疹病毒滴度显著降低,分别为对照组的48.03%和49.53%,同时用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理使病毒滴度下降为27.15%,差异均有统计学意义(P<0.01).然而,在麻疹病毒感染2 h后用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理,人肺泡上皮细胞内麻疹病毒滴度和NP蛋白量未见显著减少.Western blot和Real-time PCR结果与上述结果一致;免疫共沉淀实验显示,CD46与Nectin-4存在相互作用.结论:CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染肺泡上皮细胞中起到介导作用,CD46与 Nectin-4可能存在协同作用,该作用对麻疹病毒的感染起到了增强效果.
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CD3/CD46共刺激通路调控同种移植免疫反应的实验研究
目的:探讨CD3/CD46共刺激通路对同种移植免疫反应的调控作用及其机制.方法:分离转人CD46的C57BL/6小鼠的脾脏淋巴细胞,采用MACS免疫磁珠分选CD4+T细胞,以阴性对照组作为对照,体外检测CD3、ConA、CD3/CD28、CD3/cD46、CD3/CD28/CD46共刺激对CD4+T细胞增殖的作用效果,并检测其细胞上清液中白细胞介素2(IL-2),γ-干扰素(γ-IFN),白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGFβ-p)的水平,并以BALB/c小鼠的脾细胞作为刺激细胞,以转人CD46的c57BL/6小鼠的淋巴细胞作为反应细胞进行同种混合淋巴细胞培养,MMT法检测淋巴细胞增殖活性.结果:与CD3组或阴性对照组相比.ConA、CD3/CD28、CD3/CD46和CD3/CD28/CD46共刺激后,CD4+T细胞均出现显著增殖反应(P<0.05),而且CD3/CD28/CD48共刺激组的增殖活性较CD3/CD28或CD3/CD46共刺激组显著增高(P<0.05).CD3/CD28共刺激后,IL-2和γ-IFN水平较阴性对照组和CD3组显著升高(P<0.05),CD3/CD46共刺激后,IL-10和TGF-β水平较阴性对照组、ConA组、CD3组和CD3/CD28共刺激组显著升高(P<0.05).CD3/CD46共刺激后可以显著地抑制同种混合淋巴细胞的增殖反应(P<0.05).结论:CD3/CD46共刺激通路可以诱导CD4+T细胞产生IL-10和TGF-β,抑制同种移植免疫反应的发生.
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人类疱疹病毒6型引起的细胞融合机制
目的:观察人类疱疹病毒6型(HHV-6A)引起的细胞融合不依赖于病毒的复制(FFWO).方法:细胞用103-4TCID50HHV-6感染1h,在感染后2～3d用HE染色,观察细胞融合现象.Vero细胞用103-4TCID50HHV-6感染1h后培养液中加入磷甲酸(PFA)(终浓度300 mg·L-1)和环已酰亚胺(CHX)(终浓度100 mg·L-1),分别在感染后2 h和24 h经HE染色鉴定以确定是否产生FFWO.结果:HHV-6A感染细胞2 h后可观察到细胞融合现象,加入CHX时这种现象亦可观察到,提示HHV-6A感染可引起FFWO这种细胞融合现象的出现依赖于HHV-6的受体CD46表达于靶细胞表面.结论:HHV-6A通过其受体CD46在多种人类细胞引起FFWO.
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肿瘤细胞对血清补体杀伤耐受的机制研究
目的:探讨肿瘤细胞耐受血清补体杀伤的分子机制.方法:将表达不同血型抗原的肿瘤细胞与添加同血型血清的培养基孵育,获得耐受血清杀伤的肿瘤细胞.无血清悬浮培养肿瘤干细胞,对耐受血清杀伤的肿瘤细胞和肿瘤干细胞分别提取mRNA,进行反转录PCR,检测肿瘤干细胞干性标志物和补体调节蛋白的表达情况;干扰补体调节蛋白,检测肿瘤细胞对血清补体的杀伤情况.结果:对分别表达血型抗原A、B和H的HT-29、KATOⅢ、MCF7肿瘤细胞均获得耐受血清杀伤的耐受细胞,耐受细胞高表达三种膜性补体调节蛋白CD46、CD55和CD59,以及部分肿瘤干细胞干性标志物;spheroid悬浮球肿瘤干细胞高表达上述三种膜性补体调节蛋白,特别是CD46;在肿瘤细胞中腺病毒干扰Cd46的表达,可显著增强血清补体对肿瘤细胞的杀伤率.结论:补体调节蛋白CD46分子可通过增强肿瘤细胞的干性而介导肿瘤细胞对血清补体的杀伤耐受.
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人CD46RNAi逆转录病毒载体系统的构建与鉴定
目的:构建并筛选携带针对CD46基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,从而特异、有效地抑制人CD46mRNA水平.方法:利用DNA重组技术,将2条60nt能转录产生靶向CD46小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,并转化大肠杆菌JM109.结果:重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确.结论:特异性沉默CD46基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体构建成功,为后续转染Jurkat细胞,研究CD46在T细胞的信号转导中的作用奠定了基础,对进一步研究T细胞相关疾病及开展细胞免疫缺陷的治疗方面提供了新的思路与方向.
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CD4+CD25+调节性T细胞在CD46途径下诱导IL-10生成的研究
目的:炎症抑制因子IL-10在过敏及自身免疫性疾病的发生过程中有着重要意义,补体调节蛋白CD46作为一种新的T细胞活化辅助因子可以诱导CD4+T细胞生成IL-10.另外有研究表明,CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ Tregs)作为一种重要的免疫抑制细胞可以通过促进周围细胞分泌IL-10,使其抑制作用得到放大.本研究探讨在CD46辅助刺激途径下,CD4+CD25+Tregs诱导周围CD4+CD25-T细胞产生IL-10的能力.方法:分离纯化CD4+CD25+ Tregs和CD4+CD25+T细胞,采用CD3/CD46或CD3/CD28刺激,分别进行单独培养或按1:10的比例共培养,同时以CD4+T细胞组作为比较.用氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定细胞增殖速率,ELISA方法测定各培养组上清IL-10的水平.结果:在CD46或CD28刺激下,CD4+CD25+Tregs/CD4+CD25+T细胞共培养组、CD4+T细胞组的IL-10水平均显著高于CD4+CD25+T细胞单独培养组.在CD46刺激下,CD4+CD25+T细胞组、CD4+CD25+ Tregs/CD4+CD25+T细胞共培养组、CD4+T细胞组IL-10的水平均较CD28刺激下明显增高,各组细胞的增殖能力均较CD28刺激下显著降低.结论:在CD46或CD28刺激下,CD4+CD25+ Tregs均能够诱导CD4+CD25-T细胞分泌IL-10,CD46作为一种新的T细胞共刺激分子,与传统的CD28分子相比,能够刺激IL-10分泌增加.本文阐述了CD46途径下CD4+CD25+ Tregs诱生IL-10的功能,进一步研究CD46途径下各类免疫细胞的活化反应,对于明确此途径下免疫细胞的功能改变与某些疾病发病机制的关系具有重要意义.
关键词： CD46 CD4+CD25+调节性T细胞 IL-10 -
新辅助化疗对进展期乳腺癌患者 CD46表达影响及临床预后预测意义的研究
目的：探讨CD46在进展期浸润性乳腺癌及正常乳腺组织中的表达水平，并分析其与乳腺癌患者新辅助化疗疗效的关系，探讨其在乳腺癌新辅助化疗预后评估方面的预测价值。方法采用免疫组化的方法检测60例浸润性乳腺癌组织及30例正常乳腺组织标本CD46的表达，并分析该表达与新辅助化疗疗效的关系，采用生存分析预测CD46表达对患者预后的意义。结果乳腺癌组织CD46阳性率明显高于正常乳腺组织（81．67％vs．46．67％，P＜0．05）；新辅助化疗后，CD46表达阳性率明显下降（P＜0．05），CD46表达阳性率与患者化疗疗效呈负相关关系（P＜0．05）；CD46阳性表达提示患者的生存预后较差，浸润程度、有无淋巴结转移、CD46表达是乳腺癌新辅助化疗技术有效与否的独立影响因素（ P＜0．05）。结论乳腺癌患者的CD46表达高于健康者，与新辅助化疗技术的临床疗效呈负相关，CD46阳性表达率升高对患者较差的预后具有一定的预测价值。
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补体调节蛋白CD46在聚肌胞苷酸加重三氯乙烯致敏小鼠肝损伤中的表达规律
[目的]研究补体调节蛋白CD46在聚肌胞苷酸(poly I∶C)加重三氯乙烯(TCE)致敏小鼠免疫性肝损伤中的表达和转录水平.[方法] 6～8周的雌性BALB/c小鼠36只,随机分为空白对照组(4只),溶剂对照组(4只),TCE组(15只),TCE+poly I∶C组(13只),适应性喂养1周,于第1、4、7、10天作致敏处理,第17、19天作激发处理,TCE+poly I∶C组于末次激发前3h腹腔注射100 μL含50 μg poly I∶C的液体.末次激发24h后进行皮肤评分,48h后取小鼠血清及肝脏,试剂盒检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST),HE染色法观察小鼠肝脏病理,免疫组化法检测小鼠肝脏CD46和C3片段的表达,RT-PCR法检测肝脏CD46 mRNA表达水平.[结果]空白对照组与溶剂对照组小鼠背部皮肤无水肿与红斑,TCE处理组致敏率33.3％(5/15),TCE+polyI∶C处理组致敏率38.5％(5/13),差异无统计学意义.与溶剂对照组比较,TCE致敏组和TCE+polyI∶C致敏组肝脏系数升高,差异有统计学意义(P＜0.01).血清ALT和AST值在空白对照组、溶剂对照组以及未致敏组之间的差异均无统计学意义;与溶剂对照组相比,TCE致敏组和TCE+poly I∶C致敏组ALT和AST值升高,TCE+poly I∶C致敏组ALT和AST值相对TCE致敏组升高,差异有统计学意义(P＜0.01).肝脏病理检测发现TCE致敏组小鼠细胞形态异常,部分区域出现细胞水肿,而TCE+poly I∶C致敏小鼠肝脏出现大面积的细胞空泡样变性,肝细胞浆疏松且伊红染色变浅.小鼠肝脏免疫组化显示TCE致敏组C3片段少量沉积,TCE+poly I∶C组C3片段大量沉积,空白对照组、溶剂对照组与未致敏组则未发现.小鼠肝脏免疫组化显示CD46在肝脏细胞膜部位表达,空白对照组、溶剂对照组以及未致敏组高表达,TCE致敏组表达减少,而TCE+poly I∶C致敏组CD46表达极少.肝脏CD46转录水平在空白对照组、溶剂对照组以及未致敏组之间差异均无统计学意义;与溶剂对照组相比,TCE致敏组和TCE+poly I∶C致敏组CD46转录水平下降,TCE+poly I∶C致敏组CD46的转录水平较TCE致敏组下降,差异有统计学意义(P＜0.01).[结论] CD46可能在poly I∶C加重TCE致敏小鼠免疫性肝损伤中发挥重要作用.
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利用荧光染料的稳定性测量精子亚细胞的功能
目的:评价新的基于荧光染料的临床精液分析法的荧光信号的长期稳定性.方法:用87名未经筛选的不育病人的精液进行下列检测:caspase-3的活性(n=17)、线粒体膜电压(MMP)的完整性(n=17)、磷脂酰丝氨酸的外化(EPS)(n=16)、利用CD46检测顶体的完整性(n=37).检测结束后,在所有检测样本中加入4%多聚甲醛.用流式细胞仪分别检测加入试剂0、3、7、10天后的样本的荧光强度.结果:5%左右阳性精子的值与0天测得的值之间的差异被认为是可接受偏差.用FLICATM测得的Caspase-3值在第3、7、10天的平均差异小于5%.第14天的平均差异为7.6%.相比之下,受损MMP和EPS值的差异在第三天大于5%.CD46-FITC标记检测显示CD-46阳性的精子在第3、7、10和14天的绝对差异小于5%.结论:虽然建议快速分析荧光信号,但是可以延迟到第10天检测染色精子的caspase-3活力,CD46可以延迟到第14天,需要在当天用FACS分析MMP和EPS.
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受体依赖性TRAIL重组腺病毒对人肺癌细胞凋亡的诱导作用
目的:观察重组TRAIL腺病毒(Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL)对人非小细胞肺癌(nonsmall-cell lung cancer,NSCLC)原代培养细胞和细胞株的凋亡诱导作用,探讨两种Ad-TRAIL用于肺癌基因治疗的价值.方法:采用流式细胞术检测人肺癌细胞系A549、Z793、QG56和NCI-H520及10例原代培养肺癌细胞中CAR和CD46的表达水平;分别以Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL重组腺病毒按MOI 10和50感染上述细胞,48 h后Annexin V-FITC双标法流式细胞术检测细胞的早期凋亡.结果:A549、Z793、QG56和NCI-H520 4株肺癌细胞中,CD46的表达均明显高于CAR表达.Z793、QG56细胞对Ad5-TRAIL和Ad5F35-TRAIL的作用较敏感,MOI=10感染后凋亡率分别为(11.76±2.10)%、(15.96±2.89)%和(6.05±1.58)%、(10.11±1.26)%,显著高于对照组[(2.33±0.37)%和(5.95±1.89)%,P<0.05];MOI=50感染时NCI-H520细胞凋亡率分别为(12.89±3.2)%和(9.08±1.35)%,与对照组(7.04±2.17)%相比差异无统计学意义(P>0.05);Ad5-TRAIL和AdSF35-TRAIL均不能诱导A549细胞凋亡.10例原代肺癌细胞CD46表达也明显较CAR高;Ad5-TRAIL或Ad5F35-TRAIL感染后,5例的原代肺癌细胞检测到凋亡;与Ad5-TRAIL相比,AdSF35-TRAIL诱导的凋亡率更高.结论:两种TRAIL重组腺病毒对非小细胞肺癌细胞均有凋亡诱导作用,Ad5F35-TRAIL的作用强于Ad5-TRAIL,更适合于非小细胞肺癌的基因治疗.
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补体调节蛋白CD 46、CD 55和CD 59在胃肠肿瘤中的研究进展
胃肠肿瘤细胞的细胞膜高表达补体调节蛋白(complement regulatory proteins,CRPs)中的一种或几种分子.这些高表达分子可抑制机体的体液免疫和细胞免疫,可能是导致肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一.近年来许多学者在研究CRPs在胃肠肿瘤中的表达及其作用机制,以及将CRPs相关的单克隆抗体(monoclonal antibodies,McAbs)应用于肿瘤免疫治疗,取得了一定疗效.本文将CRPs在胃肠肿瘤研究中所取得的进展作一综述.
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变应性鼻炎大鼠鼻黏膜中补体调节蛋白C1-INH和CD46的表达
目的:检测补体调节蛋白C1-INH和CD46在变应性鼻炎大鼠鼻黏膜中的表达水平,探讨其参与变应性鼻炎病理过程的可能机制.方法:9只SD大鼠以0.1%卵清蛋白辅以氢氧化铝佐剂进行基础致敏,继之鼻部激发建立大鼠变应性鼻炎模型(AR组),另9只以生理盐水代替0.1%卵清蛋白作为对照组(N组).取大鼠呼吸区鼻黏膜,采用Western印迹法检测组织中补体调节蛋白C1-INH和CD46的表达含量,进行对比.结果:Western印迹结果显示两组大鼠C1-INH 和CD46均阳性表达,而AR组大鼠鼻黏膜中C1-INH表达低于N组(P＜0.05),CD46表达则高于N组,差异显著(P＜0.01).结论:补体调节蛋白CD46和C1-INH可能参与了变应性鼻炎的病理过程,其调控作用可能与补体激活的经典途径有关.
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CD46和雌激素受体在乳腺癌组织中的表达及临床意义
目的：探讨CD46、雌激素受体（ER）在浸润性乳腺癌、乳腺良性肿瘤及正常乳腺组织中的表达水平及其对乳腺癌患者预后的临床意义。方法采用免疫组化的方法检测60例浸润性乳腺癌、60例乳腺良性肿瘤及30例正常乳腺组织标本CD46、ER的表达，并分析该表达与不同临床病理特征之间的关联性，以及采用生存分析CD46、ER的表达对患者预后的临床意义。结果乳腺癌组织CD46阳性率（81.67%）明显高于乳腺良性肿瘤（58.33%）和正常乳腺组织（46.67%）；ER阳性率（50.00%）明显高于乳腺良性肿瘤（33.33%）和正常乳腺组织（26.67%），差别均有统计学意义（P<0.05）；CD46表达阳性率与临床分级、肿瘤直径、有无淋巴结转移、血管浸润、TNM分期等呈正相关（P<0.05）；ER表达阳性率与患者年龄、临床分级、肿瘤直径等呈正相关（P<0.05）；CD46、ER阳性表达均可致患者的生存预后变差，浸润程度、有无淋巴结转移、临床分期、CD46、ER的表达是乳腺癌5年生存率独立的危险因素（P<0.05）。结论 CD46、ER阳性表达与更严重的乳腺癌病理特征相关，并对较差的预后具有提示作用。
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人CD46、CD55和CD59与肿瘤免疫逃逸及免疫治疗
膜结合补体调节蛋白CD46、CD55和CD59在肿瘤细胞膜上表达或过表达,保护肿瘤细胞免受免疫系统的攻击,成为肿瘤细胞免疫逃逸的途径之一.如何下调肿瘤细胞表面三者表达或抑制其功能以增强其对补体依赖的细胞毒作用的敏感性备受关注.
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乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白表达对肝癌细胞免疫逃逸的影响及其机制
目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)表达对肝癌细胞免疫逃逸的影响及其机制.方法:免疫印迹法检测人正常肝细胞HL-7702、肝癌细胞HepG2中HBXIP、CD46和CD59蛋白的表达;将HepG2细胞分为pSilencer组(转染pSilencer质粒)、pSilencer-HBXIP组(转染pSilencer-HBXIP质粒)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1质粒)和pcDNA3.1-HBXIP组(转染pcDNA3.1-HBXIP质粒),台盼蓝法检测HBXIP对补体介导的细胞毒作用,免疫印迹法检测转染后各组细胞中CD46、CD59、p-IκB表达,检测NF-κB信号通路抑制剂PDTC作用pSilencer-HBXIP组和pcDNA3.1-HBXIP组细胞后CD46、CD59的表达情况.结果:HBXIP、CD46和CD59蛋白在HepG2细胞中的表达水平显著高于HL-7702细胞(P ＜0.05);pcDNA3.1-HBXIP组细胞的补体介导的细胞毒作用显著低于pcDNA3.1组(P＜0.05),而pSilencer-HBXIP组细胞的补体介导的细胞毒作用明显高于pSilencer组(P＜0.05).与pSilencer组相比,pSilencer-HBXIP组中CD46、CD59蛋白的表达和IκB的磷酸化水平均显著受到抑制(P均＜0.05),而pcDNA3.1-HBXIP组细胞中CD46、CD59蛋白的表达和IκB的磷酸化水平较pcDNA3.1组均显著上调(P均＜0.05).NF-κB信号通路抑制剂PDTC处理后,pSilencer-HBXIP组和pcDNA3.1-HBXIP组细胞中CD46和CD59蛋白的相对表达量均显著下调(P均＜0.05).结论:HBXIP在HepG2细胞中高表达,且正向调控膜结合补体调节蛋白CD46、CD59的表达,减弱补体介导的细胞毒作用,进而发生免疫逃逸,其作用机制可能与HBXIP介导NF-κB信号通路调控CD46、CD59蛋白的表达有关.
