首页 > 文献资料
-
重组腺病毒Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系感染效率的比较研究
目的以 Ad5-GFP 及 Ad5/F35-GFP 为对照，评价Ad5/F11p-GFP 对不同肿瘤细胞系的感染效率。
方法制备并纯化 Ad5-GFP、Ad5/F11p-GFP 及 Ad5/F35-GFP三种重组腺病毒，以不同的感染复数（MOI）感染乳腺癌细胞系 SKBR-3、MCF-7及肾癌细胞系786O。48 h 后，荧光显微镜观察 GFP 的表达，流式细胞仪检测感染效率及不同细胞表面柯萨奇腺病毒受体（CAR）、CD46和桥粒芯糖蛋白质2的表达。
结果 Ad5/F35-GFP 对 SKBR-3、MCF-7及 786O 均具有很高的感染效率，且其在较低的 MOI 时就具有较高的感染效率；Ad5/F11p-GFP 对 CD46高表达的 MCF-7及 786O具有较高的感染效率，5 MOI 感染即可达到60%以上的感染效率；而 Ad5-GFP 仅对 CAR 高表达的细胞系786O具有较高的感染效率，且感染效率随着 MOI 的增加而升高。Ad5/F11p-GFP 和 Ad5/F35-GFP 对三种肿瘤细胞系的感染效率明显高于 Ad5-GFP。
结论对5型腺病毒进行纤维顶球的改造，可增强对肿瘤细胞的感染效率。 -
重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP的构建及其对UT-7/Epo细胞感染效率的检测
目的 构建携带报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,并且研究该病毒对人白血病细胞UT-7/Epo的感染效率及其在细胞中的复制.方法 先通过分子克隆技术构建重组腺病毒质粒pAd5F11pTPEGFP,然后利用脂质体转染法,将其转染至HEK293细胞包装出重组腺病毒Ad5 F11 pTPEGFP,经酶切和PCR鉴定正确后,扩增并纯化得到滴度较高的重组腺病毒.以空载体病毒Ad5GFP作为对照,将纯化的重组腺病毒感染UT-7/Epo细胞,经流式细胞仪检测在不同感染复数(MOI)下荧光阳性细胞比例,即为Ad5F11pTPEGFP病毒对UT-7/Epo细胞的感染效率,同时将冻融后的重组腺病毒感染的UT-7/Epo细胞上清感染HEK293细胞,48 h后观察GFP在HEK293细胞中的表达.结果 成功制备了重组腺病毒Ad5 F 11 pTPEGFP,其对UT-7/Epo细胞的感染效率明显高于空载体对照病毒Ad5GFP,在MOI为200时,感染效率达98.2％,而空载体病毒在MOI为200时,对UT-7/Epo细胞的感染效率仅为29.7％.感染了重组腺病毒的UT-7/Epo细胞冻融上清感染新的HEK293细胞后,荧光显微镜下观察到GFP的表达.结论 成功构建了重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,其对UT-7/Epo细胞有较高的感染效率,并能在其中复制.
关键词： 重组腺病毒 端粒酶 纤维顶球 UT-7/EPO细胞
