首页 > 文献资料
-
妊娠合并阵发性睡眠性血红蛋白尿一例及文献复习
阵发性睡眠性血红蛋白尿（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, PNH）首次于1928年被报道，被认为是一种后天获得性红细胞膜缺陷引起的血管内溶血病。目前认为其为一种少见的造血干细胞克隆性疾病，以补体介导的血管内溶血为特征，合并造血功能衰竭、血栓倾向、肾功能不全和肺动脉高压等并发症。本疾病造血干细胞的PIG-A基因发生突变，导致糖磷脂酰肌醇(glycosyl-phosphatidylinositol, GPI)锚磷脂合成障碍。GPI缺乏导致许多膜蛋白功能异常。其中，CD59和CD55补体调节蛋白不能连接于细胞膜，使红细胞对补体的敏感性增加，从而发生血管内溶血。此疾病发病率约为百万分之1-10，发病高峰年龄为20~40岁，男性明显多于女性。临床表现以间歇发作的睡眠后血红蛋白尿为特征，可伴有血栓形成倾向，并发感染和出血。实验室检查可见全血细胞减少和骨髓增生活跃，尤以红系造血旺盛。既往可以Ham试验、蔗糖溶血试验和蛇毒因子溶血试验阳性为诊断标准，随着技术的发展，目前利用特异性单克隆抗体通过流式细胞术检测外周血细胞GPI锚连接蛋白阴性细胞群体已作为诊断金标准。
-
A族链球菌表面蛋白FbaA单克隆抗体FbaAmAb2的免疫功能研究
目的 通过侵袭抑制及攻毒试验检测A族链球菌表面蛋白FbaA的单克隆抗体FbaAmAb2的免疫功能,为进一步探索A族链球菌的致病机制和感染后的治疗策略奠定基础.方法 通过亚克隆、全菌ELISA方法筛选稳定分泌高效价FbaAmAb2的杂交瘤细胞,并将其接种子小鼠腹腔制备腹水.通过侵袭试验对FbaAmAb2能否阻止H因子与A族链球菌的结合进行研究.而后将获得的腹水倍比稀释为1:1、1:2、1:4、1:8、1:16行试管凝集试验,选定合适的稀释度被动免疫动物后用致死量A族链球菌(FbaA+)标准菌株(7.5×107个)攻击,连续观察15 d计算保护率.结果 侵袭试验中FbaAmAb2能够竞争性抑制H因子与A族链球菌表面蛋白FbaA的结合,减少了H因子介导的A族链球菌侵入上皮细胞的数量.与全菌结合的ELISA效价为1:1600,试管凝集效价为1:8.在单抗被动免疫试验中,腹水原液、1:2稀释组的动物保护率高达66.67％,1:4稀释组保护率为50％,经SPSS10.0统计软件分析各实验组与PBS组保护牢差异有统计学意义(P＜0.05).结论 FbaAmAb2有望用于紧急预防及治疗A族链球菌感染,并为深入研究A族链球菌的致病机制、治疗策略及疫苗预防方面提供新的靶标.
-
类风湿关节炎患者红细胞CR1、CD59的变化及中药新风胶囊的干预作用
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的全身性免疫疾病,近年来补体调节蛋白在RA发病中的作用越来越受到人们重视,CR1与CD59在补体调节过程中起着主要的作用[1],本研究通过观察红细胞(RBC)CR1与CD59在RA中的表达,探讨其与RA发病的关系,并观察中药新风胶囊的疗效及其对补体调节蛋白的干预作用.
-
2型糖尿病患者补体调节蛋白CD55、CD59水平的变化及其意义
选2型糖尿病患者33例,24名健康自愿者作为对照,检测外周血白细胞CD55、CD59的表达,探讨其与糖尿病肾病的关系.2型糖尿病患者CD55、CD59表达下调,糖尿病病程、CD55阳性单核细胞平均荧光强度是尿白蛋白排泄率(UAER)的独立预测因素.补体调节蛋白表达减低可能与糖尿病肾病的发生有关.
-
补体C3、C4、备解素及补体调节蛋白CD55、CD59与颈动脉内膜中层厚度的关系研究
目的:探讨补体及补体调节蛋白与颈动脉内膜中层厚度(IMT)的关系.方法:选高脂血症患者57例(高脂血症组),正常对照20人(正常对照组),测定补体C3、C4、备解素(Pf)水平、补体调节蛋白CD55、CD59的表达及颈动脉IMT,分析其关系.结果:与正常对照组比较,高脂血症组补体C3、C4及备解素、颈动脉IMT明显升高,补体调节蛋白CD55阳性淋巴细胞平均荧光强度减低;IMT与年龄、收缩压、腰臀比值、高敏C反应蛋白正相关,与补体调节蛋白CD55阳性淋巴细胞平均荧光强度负相关,与补体C3、C4、备解素及补体调节蛋白CD59不相关.结论:颈动脉IMT增厚与补体调节蛋白CD55表达降低相关,而与补体C3、C4、备解素、补体调节蛋白CD59无直接关系.
-
高脂血症患者血清补体C3、C4、备解素和白细胞补体调节蛋白CD35、CD55、CD59的表达
目的:探讨高脂血症患者血清补体和外周血白细胞补体调节蛋白的表达及其在动脉粥样硬化中的意义.方法:选高脂血症患者46例(高脂血症组),年龄、性别、体重指数匹配的正常人20例作为正常对照组,用免疫散射比浊法测血清补体C3、C4、备解素(Pf);用流式细胞术测定外周血中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞CD35、CD55、CD59的表达,观察上述指标在高脂血症组中的变化,分析影响因素.结果:高脂血症组血清C3、c4、Pf水平较正常对照组明显升高(P＜0.01);补体C3、C4水平与血清总胆固醇(代)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显正相关(P＜0.01),Pf与代、LDL-C正相关(P＜0.01).CD35阳性淋巴细胞、单核细胞、粒细胞百分率较正常对照组升高(P＜0.05),CD35阳性淋巴细胞、粒细胞百分率与TG呈正相关(P＜0.05～0.01);CD55阳性淋巴细胞平均荧光强度较正常对照组下降(P＜0.05);CD59阳性淋巴细胞、单核细胞百分率较正常对照组下降(P＜0.05).结论:高脂血症患者血清补体C3、C4、Pf升高,白细胞补体调节蛋白表达改变,补体及补体调节蛋白的改变与血脂水平相关,表明脂代谢紊乱可影响补体及补体调节蛋白的表达,提示补体及补体调节蛋白可能参与动脉粥样硬化的病理生理过程.
-
阿托伐他汀对高脂血症患者补体调节蛋白CD35的影响
目的探讨他汀类调脂药物对高脂血症患者外周血白细胞补体调节蛋白CD35表达的影响及在动脉粥样硬化疾病中的作用.方法选高脂血症患者23例,年龄、性别、体重指数匹配的正常人20例作为对照,用流式细胞术测定外周血白细胞CD35的表达.高脂血症患者使用阿托伐他汀治疗,观察治疗8周后CD35的变化.结果高脂血症患者CD35阳性白细胞、百分率较正常对照组升高(18.40%比12.90%,P＜0.05);阿托伐他汀治疗后,CD35阳性白细胞、淋巴细胞、单核细胞、粒细胞平均荧光强度与治疗前比较明显升高(2.02比1.47,3.16比1.60,2.03比1.44,2.05比1.46,P均＜0.05),与正常对照组比较亦升高(2.02比1.47,3.16比1.67,2.03比1.52,2.05比1.48,P均＜0.05);CD35阳性、淋巴细胞百分率治疗后较治疗前及正常对照组比较均升高(4.93%比3.95%,4.93%比3.35,%,P均＜0.05).结论阿托伐他汀治疗可增加高脂血症患者外周血白细胞补体调节蛋白CD35的表达,提示上调补体调节蛋白的表达可能是他汀类药物延缓动脉粥样硬化进展新的作用机制.
-
高脂血症中脂联素水平与CD55、CD59表达的关系研究
动脉粥样硬化是一种慢性炎性病变,补体在其发生、发展中起重要作用[1].补体调节蛋白抑制补体活化过程,在一定程度上可防止组织损伤,但补体调节蛋白表达的影响因素目前还不清楚.本研究通过观察高脂血症患者补体调节蛋白CD55、CD59的表达和脂联素的关系,探讨补体调节蛋白表达的调节机制.
-
近10年新发阵发性睡眠性血红蛋白尿症的临床分析
阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种获得性克隆性造血干细胞疾病，临床表现多样，以持续性血管内溶血，阵发性加重为主要特征，易与再生障碍性贫血（AA）、骨髓增生异常综合征（MDS）等疾病相混淆。PNH患者的血细胞膜上缺乏多种糖化磷脂酰肌醇(GPI）-锚连蛋白，包括补体调节蛋白（如CD55、CD59），这是引起溶血等临床表现的主要原因。90年代以来，发现GPI-A基因突变导致GPI合成障碍，是引起GPI-锚连蛋白缺失的原因［1］。现将我院1990年以来诊断的PNH病例作回顾性分析如下。 一 、资料和方法 1. 病例： 78例均系1990年1月至1999年11月在我院住院诊治的患者。男48例，女30例，男∶女=1.6∶1，年龄6～70岁，中位年龄34岁。 2.检测方法：取髂骨骨髓组织做病理活检；用R显带法做骨髓单个核细胞的染色体核型分析；外周血检测以下溶血指标：游离血红蛋白（FHb）、结合珠蛋白（Hp）、尿含铁血黄素（Rous）、尿潜血（OB）、Ham试验、糖水溶血试验、蛇毒因子溶血试验（CoF）、微量补体溶血敏感试验（mCLST）；用间接免疫荧光法分别检测外周血粒细胞、红细胞、淋巴细胞的CD55、CD59抗原表达。
-
CD4+CD25+调节性T细胞与妊娠关系的研究进展
妊娠是一种自然同种半异体移植现象,其成功有赖于母体妊娠免疫耐受,而母胎耐受的建立和维持涉及到多种机制的参与.比较经典的有母胎界面的机械作用:首先,绒毛中的血管壁、绒毛间隙、基底膜和绒毛上皮细胞共同构成母胎机械性屏障.另外,胎盘滋养细胞表面的唾液黏蛋白能遮盖滋养层细胞表面的组织相容性抗原,且这层黏多糖和免疫活性的淋巴细胞都带负电荷,互相排斥.还有就是多因素作用的免疫屏障,比如妊娠早期胎儿滋养层细胞Ⅰ类主要组织相容性复合体分子与母体子宫的自然杀伤细胞的相互作用,胎源性凋亡因子Fas通过与滋养层细胞表达的相关配体结合导致母体特异性T细胞大量表达Fas,从而启动凋亡途径,补体调节蛋白的表达等.而作为一个具有独立免疫调节功能的T细胞亚群,调节性T细胞(regulatory Tcells,Treg细胞)由Sakaguchi等[1]在对啮齿类动物的研究中首次发现,其免疫学特性主要表现在抑制自身反应性T细胞的活化,参与机体免疫耐受,在正常妊娠过程中扮演了一个相当重要的角色.
-
补体和补体调节系统在年龄相关性黄斑变性发生中的作用
年龄相关性黄斑变性(AMD)是老年致旨性疾病的常见原因.目前认为,补体和补体调节系统在AMD发生过程中发挥重要作用.部分补体及其调节凶子与AMD发牛的关系已经明确,但由于AMD的发生是多因素共同作用的结果.要完全阐明补体激活与抑制的平衡机制与AMD发生的相互关系,尚有待进行深入研究.
-
太极拳运动对中老年女性外周血白细胞和红细胞表面CD55/CD59表达的影响
目的:探讨太极拳运动对中老年女性CD55和CD59表达影响.方法:研究一:94名中老年女性志愿者(55～65岁),随机分为安静对照组(47人)和太极拳组(47人).太极拳组进行24周太极拳锻炼,每周3次,每次训练时间约为60 min;对照组保持原有生活规律.研究二:90名中老年女性志愿者,其中太极拳组30人、快走对照组30人、久坐组30人.太极拳组和快走对照组运动年限在3～5年,每周锻炼次数不少于3次,每次锻炼时间约60min;久坐组组无运动习惯.对各组CD55、CD59在各血细胞表面的变化进行研究.结果:①24周后太极拳锻炼后,MO CD55及RBC CD55下降具有显著性(P＜0.05);LY CD59和MO CD59呈非常显著性升高(P＜0.01).安静对照组RBC CD55呈显著性下降(P＜0.05);LY CD59显著性上升(P＜0.05).②3～5年太极拳组LY、GR、MO、RBC CD55显著低于安静组(P＜0.05);LY CD55显著低于快走组但RBC CD55显著高于快走组(P＜0.05);太极拳组LY、RBC CD59显著高于安静组和快走组(P＜0.05).③太极拳锻炼第0周、第24周,各血细胞表面CD55和CD59之间均无相关性,3～5年太极拳锻炼组LY CD55/CD59及RBCCD55/CD59出现显著相关(P＜0.05);3～5年太极拳组与快走组LY CD55/CD59较安静对照组均出现显著相关(P＜0.05);另外太极拳组RBC CD55/CD59比安静对照组和快走组显著相关(P＜0.05).结论:①太极拳锻炼对血细胞表面CD55和CD59的影响不同,其中对红细胞的影响更为明显,可以为进一步研究运动与红细胞免疫提供理论支撑.②太极拳运动后外周血白细胞及红细胞表面CD55、CD59发生的变化与血细胞计数关系不大.③太极拳锻炼时间越长,CD55、CD59在淋巴细胞和红细胞上的协同作用越明显,可有效对抗年龄依赖性免疫机能下降.
-
新风胶囊对类风湿性关节炎补体调节蛋白红细胞CR1及CD59的影响
目的:探讨新风胶囊对类风湿性关节炎(RA)补体调节蛋白的影响及其作用机制.方法:将40例RA患者按随机数字表分为新风胶囊实验组(20例)和正清风痛宁对照组(20例),并设10名健康者为健康对照组,观察两组RA患者治疗前后补体调节蛋白红细胞CR1、CD59以及临床症状、体征关节疼痛度、关节肿胀度、关节压痛度、晨僵时间、握力、步行15 m时间和实验室指标[血沉(ESR),类风湿因子滴度(RF),C-反应蛋白(CRP),补体C3、C4,免疫球蛋白IgG、IgM、IgA,α1-糖酸蛋白(α1-AGP),红细胞计数(RBC)]的改善情况.结果:RA患者治疗前红细胞CR1与CD59表达水平均显著低于健康对照组(P均＜0.05);治疗后两组RA患者临床症状、体征及实验室指标均较治疗前有明显改善(P均＜0.05),其中实验组关节疼痛度、晨僵时间、双手平均握力、15 m步行时间及ESR、补体C3、RBC改善程度均较对照组显著(P＜0.05或P＜0.01).两组治疗后红细胞CR1、CD59均比治疗前显著升高(P均＜0.05),治疗后实验组的红细胞CR1、CD59均值均显著高于对照组(P均＜0.01).结论:新风胶囊能有效提高体内过低的补体调节蛋白红细胞CR1、CD59含量,进而抑制过亢的体液免疫反应,使补体有效清除体内循环免疫复合物,并减少补体对自身细胞的攻击损伤,从而控制病情活动,这也是其治疗RA的机制之一.
-
脊髓MCP/DAF表达在大鼠神经病理性痛形成中的作用
目的 评价脊髓MCP/DAF表达在大鼠神经病理性痛形成中的作用.方法 MCP/DAF双基因重组转染SD大鼠24只,体重200 ～ 250 g,按照随机数字表法分为2组(n=12):转染大鼠假手术组(Rsham组)和转染大鼠坐骨神经慢性压迫损伤组(RCCI组);健康雄性SD大鼠24只,体重200～250 g,按照随机数字表法分为2组(n=12):正常大鼠假手术组(Nsham组)和正常大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤组(NCCI组).RCCI组和NCCI组大鼠行右侧坐骨神经四道环形结扎,Rsham组和Nsham组大鼠只暴露右侧坐骨神经,不予环形结扎.分别于术前1d和术后1、3和7d时测定大鼠的热痛阈和机械痛阈.术后7d时测定痛阈后处死大鼠,取k,5脊髓,采用免疫组化法检测0X-42的表达,RTPCR法检测MCP mRNA和DAF mRNA的表达.结果 与Nsham组比较,NCCI组大鼠术后1、3和7d时热痛阈和机械痛阈降低,脊髓OX-42表达上调,MCP mRNA和DAF mRNA表达下调(P＜0.05),Rsham组和RCCI组大鼠术后上述时点热痛阈、机械痛阈和脊髓OX-42表达差异无统计学意义(P＞0.05),MCP mRNA和DAF mRNA表达上调(P＜0.05);与NCCI组比较,RCCI组大鼠术后上述时点热痛阈和机械痛阈升高,脊髓OX-42表达下调,MCP mRNA和DAF mRNA表达上调(p＜0.05).结论 MCP/DAF表达上调抑制大鼠神经病理性痛的形成,其机制与调节脊髓小胶质细胞活化有关.
-
脊髓背角膜结合型补体调节蛋白表达在大鼠神经病理性痛形成中的作用
目的 评价脊髓背角膜结合型补体调节蛋白表达在大鼠神经病理性痛形成中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,体重200 ～ 250 g.取48只鞘内置管成功的大鼠,采用随机数字表法,将其分为4组(n=12):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、生理盐水组(NS组)和米诺环素组(M组).NP组、NS组和M组采用坐骨神经环形结扎法制备大鼠神经病理性痛模型,S组只分离坐骨神经后逐层缝合.M组于结扎坐骨神经前ld开始鞘内注射米诺环素50 μg,NS组鞘内注射等容量生理盐水,1次/d,连续7d.于结扎坐骨神经前1 d(T0)、结扎后1 d(T1)、3 d(T2)和7 d(T3)时测定大鼠机械痛阈和热痛阈.于T3痛阈测定结束后断头处死大鼠,取L4.5脊髓背角组织,分别用Western blot法和RT-PCR法检测CD46、CD55、CD59蛋白及其mRNA的表达水平.结果 与S组比较,NP组、NS组和M组T1-3时机械痛阈和热痛阈降低,T3时脊髓背角CD46、CD55、CD59蛋白及其mRNA表达下调(P＜0.05)；与NS组和NP组比较,M组T2.3时机械痛阈和热痛阈升高,T3时脊髓背角CD46、CD55、CD59蛋白及其mRNA表达上调(P＜0.05).结论 脊髓背角膜结合补体调节蛋白表达下调,补体异常活化参与了大鼠神经病理性痛的形成.
-
小儿危重症正压通气时机策略选择对CD55、CD59表达的影响研究
目的 通过观测CD55、CD59变化探讨两种不同正压通气时机策略对机体预后影响.方法 选取2012年8月-2014年11月该院儿内科收治的正压通气危重症患儿70例为研究对象,随机分成双水平正压通气(DuoPAP)治疗组35例,持续呼吸道正压通气(CPAP)对照组35例,若这两种方式不能维持患儿生命体征则使用气管插管机械通气.记录两组正压通气天数、住院天数、抢救成功率、两组治疗前后红细胞、中性粒细胞CD55、CD59(补体调节蛋白)表达变化.结果 与对照组相比,治疗组在正压通气天数、住院天数均显著缩短,差异有统计学意义(x2=3.29,P＜0.01;x2 =3.04,P＜0.01),抢救成功方面差异无统计学意义(x2 =0.85,P＞0.05).治疗组通气后红细胞CD59、中性粒细胞CD55、CD59表达较通气前均升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).对照组通气后红细胞CD59、中性粒细胞CD59表达较通气前升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).治疗组通气后红细胞CD59、中性粒细胞CD55、CD59表达比对照组通气后数值升高,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).结论 两种不同通气策略均能上调血细胞补体调节蛋白表达,治疗组策略上调更加明显,治疗组能缩短正压通气时间及住院时间,两种策略均有良好抢救成功率.
-
CD4+CD25+调节性T细胞与母胎耐受的研究进展
在正常妊娠时,胎儿作为"半同种移植物"不被母体排斥即母胎免疫耐受机制一直受到人们的关注.多年的研究结果表明母胎耐受的建立和维持涉及到多种机制的参与,如:妊娠早期胎儿滋养层细胞MHCI表达与母体子宫NK(uNK)细胞的相互作用、胎盘分泌的白血病抑制因子(LIF)及保护抗体、外周免疫无反应性、滋养层细胞和子宫巨噬细胞表达的吲哚胺2,3-双加氧酶(Indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)通过分解色氨酸来抑制T细胞的活性、滋养层细胞表达FasL诱导表达Fas的活化T细胞的凋亡、补体调节蛋白的表达等因素.
-
CD55和CD59表达的调节因素和调节机制的研究进展
补体系统是天然免疫的一个重要组成部分,具有免疫防御、免疫监视和免疫调节功能.补体活化参与了多种慢性炎症性疾病如动脉粥样硬化、缺血再灌注损伤、糖尿病血管并发症、风湿性关节炎、炎症性肠病及系统性红斑狼疮等[1-6].补体调节蛋白通过控制补体过度活化防止宿主细胞损伤,其主要成员CD55和CD59 的表达与涉及补体活化的疾病密切相关,在这些疾病中的有益作用使其成为新一代治疗药物,这使CD55和CD59上调及下调的研究备受关注,但对其调节的具体分子机制尚未完全清楚,对调节补体调节蛋白靶分子的干预尚需进一步探索,信号转导路径的深入研究成为阐明以上机制的重要途径.
-
补体调节蛋白Crry对树突状细胞的调控及诱导同种移植免疫低反应
目的:探讨补体调节蛋白Crry对树突状细胞(DC)的调节作用及诱导同种移植免疫低反应性的机制.方法:分离BALB/c小鼠的骨髓来源树突状细胞,试验分为2组:①脂多糖(LPS)刺激组,即培养结束前加入外源性脂多糖(1 mg/L)刺激24小时；②Crry处理组,加入抗小鼠Crry抗体5μg/ml,结束前加入外源性脂多糖(1 mg/L)刺激24小时,流式细胞仪检测树突状细胞表面分子CD86 、CD40、MHCⅡ的表达,ELISA法检测其细胞上清液中IFN-γ、IL-10和IL-12的水平,ELISA法检测细胞上清液中C3、C5、C3a和C5a的含量,并以BALB/c小鼠的DC作为刺激细胞,以C57 BL/6小鼠的淋巴细胞作为反应细胞进行同种混合淋巴细胞培养,MTT法检测淋巴细胞增殖活性.结果:经LPS刺激后,培养的DC表面共刺激分子CD40、CD86和MHCⅡ分子的表达显著增加(P ＜0.05)；Crry处理组DC表面共刺激分子CD86和MHCⅡ分子的表达较LPS刺激组显著降低(P＜0.05),而CD4O的表达无显著性差异；Crry处理组培养上清液中C3和C5的含量无明显变化,但C3a、C5a的含量较LPS刺激组显著减少(P＜0.05)；培养DC上清液中IFN-γ和IL-12的含量较LPS刺激组显著降低(P＜0.05),IL-10的含量较LPS刺激组显著增加(P＜0.05)；培养的DC加入Crry抗体后,其淋巴细胞增殖活性显著降低(P＜0.05).结论:补体调节蛋白Crry可以对DC具有重要的调控作用,可以影响其共刺激分子的表达、补体的生成以及细胞因子的合成等,从而诱导同种移植免疫低反应性,丰富先天免疫对获得性免疫的调节作用.
-
补体调节蛋白CD59基因表达及转化生长因子β1在血液透析中的变化及其意义
尿毒症患者的免疫功能存在缺陷,其发生机制尚不完全清楚[1].转化生长因子β1(TGF-β1)是一种多效的免疫调控介质,其血浆浓度增高可通过双向调节多种细胞因子或免疫调节物质的活性,加重免疫功能紊乱[2].近年来,补体调节蛋白CD59在各种异常补体激活导致的免疫功能损伤中的作用已引起人们的重视,已有研究表明TGF-β1可上调CD59基因表达[3],但目前对补体调节蛋白CD59基因表达及TGF-β1在血液透析中(HD)的变化及其意义尚不清楚.本研究采用流式细胞术和酶联免疫吸附法分别观察血透时CD59基因表达和TGF-β1水平变化,探讨人工肾脏对免疫细胞生物相容性的影响以及不同透析膜的干预作用.
