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血清结合珠蛋白的研究进展
结合珠蛋白(Hp)是一种酸性糖蛋白.属急性期反应蛋白之一,由于所含轻链类型的不同.结合珠蛋白具有遗侍多态性.结合珠蛋白主要在肝脏合成,结合珠蛋白不同的表现型在临床上有不同的生物学功能.其多型性与许多炎症性疾病包括感染性疾病、动脉粥样硬化、自身免疫性痰病、溶血性疾病等的发生发展有关.
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卵巢癌患者血清中肿瘤特异标志物的鉴定研究
目的:通过分析卵巢癌患者血清中的蛋白质组分,寻找可能的肿瘤相关蛋白并对该蛋白鉴定,以期确定其作为卵巢癌血清学诊断的特异标志物.方法:采用双向凝胶电泳方法分离6例卵巢癌患者及2例正常健康妇女血清总蛋白,经考马斯亮蓝染色后对比找出差异蛋白斑点,该蛋白斑点经蛋白酶水解后进行液质联用串联质谱(LC-MS/MS)分析,用SEQUEST搜索软件查询Finngan公司提供的FASTA格式蛋白序列数据库.采用Western Blotting、ELISA、斑点印迹及亲和层析等方法对目标蛋白作进一步的分析.结果:经双向电泳分离,卵巢癌患者血清中有3～4个组分显示含量高于正常健康妇女血清,选其中明显的一个差异斑点进行质谱分析,对库检索确定为结合珠蛋白.进一步的分析证实,卵巢癌患者血清中结合珠蛋白总含量有高于正常健康妇女的趋势.此外,通过凝集素斑点印迹法检测发现,岩藻糖基化结合珠蛋白成分明显增加是该蛋白总量增高的主要特性.结论:检测血清结合珠蛋白总量以及特异的岩藻糖基化组分可能成为卵巢癌的血清诊断指标之一,可与其它检测方法相结合,提高卵巢癌早期诊断的有效性.
关键词： 卵巢癌 结合珠蛋白 岩藻糖基化结合珠蛋白 肿瘤标志物 蛋白质组 -
潮湿环境下大鼠脾组织差异蛋白组学研究
目的:通过比较正常及潮湿环境下大鼠脾组织蛋白质谱,筛选和鉴定与湿邪有关的疾病特异性蛋白,探寻湿邪致病的生物标志物.方法:选取SD大鼠20只随机分为对照组、外湿组,每组10只.造模成功后无菌摘除脾脏,取出脾组织10mg/只,进行双向电泳实验、双向凝胶电泳图象分析,肽质量指纹图谱与电喷雾串联质谱鉴定蛋白质,分析差异蛋白质意义.结果:通过比较正常及潮湿环境下大鼠脾组织差异蛋白质,发现3个有意义的蛋白质:表达上调的有2个:载脂蛋白A-I、肌动蛋白相关蛋白2/3复合物亚基5;表达下调的有1个:结合珠蛋白.结论:正常及潮湿环境下大鼠脾组织蛋白质存在差异表达,这些差异蛋白质可能是与湿邪致病相关的疾病特异性蛋白.
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结合珠蛋白基因多态性与急性冠脉综合征的相关性研究
目的 探讨结合珠蛋白(Hp)基因多态性与急性冠脉综合征(ACS)易感性的关系.方法 采用病例对照研究,选择2005年3月至2006年12月浙江大学医学院附属第二医院心内科住院并行冠脉造影检查证实的ACS患者112例(包括急性心肌梗死57例、不稳定性心绞痛55例)和同期年龄、性别匹配的健康体检者124例.采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测所有受试者Hp基因型,探讨Hp基因多态性与ACS发生的关系.用Hardy-Weinberg平衡检验样本群体代表性;各组基因型和等位基因频率差异比较采用x2检验,并以比值比(OR)及其95%可信区间(95%CI)表示相对的风险度;综合评价ACS危险性采用多因素Logistic回归分析;以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 ACS组Hp基因型分布与对照组相比差异具有统计学意义(P=0.003),表现为ACS组的Hp2-2基因型频率明显高于对照组(0.571 vs.0.355,P=0.001;OR=2.419,95%CI1.427～4.100),Hp2等位基因的频率也明显高于对照组(0.759 vs.0.616,P=0.001;OR=1.965,95%CI1.316～2.934).同时,多因素Logistic回归分析表明Hp2-2基因型是ACS的独立危险因素(P=0.002;OR=2.557,95%CI:1.410～4.639).结论 Hp2-2基因型与ACS的发生密切相关,可能是ACS发病的独立危险因子;Hp2等位基因可能是ACS的遗传易感基因.
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蛋白质组学方法鉴定强直性脊柱炎相关蛋白
北京大学第一医院血液科朱平教授课题组的刘静博士,对强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)一家系成员的血清蛋白质组学研究发现,结合珠蛋白前体蛋白与强直性脊柱炎发病相关.
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结合珠蛋白基因多态性与糖尿病血管并发症的研究进展
结合珠蛋白(Hp)又称血红素结合蛋白、触珠蛋白,是肝脏合成的一种急性时相反应蛋白.Hp可以与游离血红蛋白(Hb)结合形成Hp-Hb复合物,通过巨噬细胞清道夫受体CD163介导的内吞作用进行降解,从而阻断血红蛋白诱导的氧化损伤.人类Hp有Hp1-1、Hp2-1、Hp2-2共3种基因型.研究显示,不同Hp基因型对糖尿病患者血管并发症的影响不尽相同.本文就Hp基因多态性与糖尿病血管并发症的相关研究作一综述.
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结合珠蛋白基因多态性与糖尿病视网膜病变(二)
目的 探讨结合珠蛋白(Hp)多态性与2型糖尿病(T2DM)患者糖尿病视网膜病变(DR)发病的关系.方法 418例T2DM患者分为3组:糖尿病无视网膜病变(NDR)组、非增生型糖尿病视网膜病变(NPDR)组、增生型糖尿病视网膜病变(PDR)组,另选取100名性别构成、年龄与之相匹配的健康者作为对照(NC)组.采用.PCR技术扩增Hp1和Hp2特异目的 片段,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对Hp分型,分析Hp多态性及各项临床指标与DR的关系.结果 NDR组、NPDR组与PDR组两两组间,T2DM组与NC组间,Hp基因型及等位基因频率均无统计学差异(P>0.05).经Logistic回归分析显示:DM病程、SBP、TC、24h尿白蛋白(24h UA1b)是DR的独立危险因素(P<0.05),Hp与DR发病无关.结论 Hp多态性与天津地区DR发病可能无相关性.
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结合珠蛋白基因多态性与糖尿病视网膜病变(一)
目的 探讨结合珠蛋白(Hp)基因多态性与2型糖尿病(T2DM)患者糖尿病视网膜病变(DR)发病的关系.方法 将317例T2DM患者分为糖尿病无视网膜病变(NDR)组和DR组,并选取100名正常人作为对照(NC)组.采用PCR技术扩增Hp1和Hp2特异的目的 片段,分析Hp基因型及糖尿病(DM)病程、尿白蛋白(UA1b)等生化指标与DR的关系.结果 NDR组、DR组和NC组问Hp等位基因和基因型频率比较,均无统计学差异(P>0.05).经Logistic回归分析显示,DM病程和24h UA1b是DR的独立危险因素,Hp可能与DR无相关性.结论 Hp基因多态性可能与DR无相关性,而DM病程和24h UA1b是DR的独立危险因素.
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血浆结合珠蛋白浓度与早发冠心病的关系研究
目的 检测早发冠心病(PCHD)患者血浆结合珠蛋白(Hp)水平,观察不同类型早发冠心病患者血浆珠蛋白水平.方法纳入2010年5月～2011年1月PCHD患者72例,同期纳入健康体检者74例作为对照组.将PCHD组依诊断进一步分为稳定性心绞痛组(SA,n=15)、不稳定性心绞痛组(UA,n=36)和急性心肌梗死组(AMI,n=21);检测并比较各组Hp浓度的差异.结果 PCHD组Hp浓度高于对照组,差异有统计学意义[(1.785±0.525)ng/mL vs.(0.869±0.172)ng/mL,P<0.05];SA组、UA组和AMI组Hp浓度分别为(1.699±0.723)ng/mL、(1.685±0.453)ng/mL和(1.946±0.584)ng/mL,组间比较无明显差异(P=0.281).结论 PCHD患者血浆Hp浓度明显升高,且与类型无关.
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血清超敏C-反应蛋白、视黄醇结合蛋白4及血浆结合珠蛋白水平在冠心病患者中的变化及其意义
目的 探讨冠心病(CHD)患者血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)及血浆结合珠蛋白(Hp)水平的变化及其临床意义.方法 选取2014年2月至2017年2月广安市人民医院心血管内科经冠状动脉造影检查确诊的CHD患者140例作为CHD组,另选取同期在我院心血管内科住院的非CHD患者60例作为对照组.将CHD组患者根据临床表现分为3个亚组:急性心肌梗死(AMI)组(n=38)、不稳定型心绞痛(UAP)组(n=62)和稳定型心绞痛(SAP)组(n=40).依据病变支数分为3个亚组:单支病变组(n=27)、双支病变组(n=54)和三支病变组(n=59).检测各组患者的血清hs-CRP、RBP4、Gensini评分及血浆Hp水平,并分析各指标与病情严重程度的关系.采用SPSS 16.0软件进行数据处理.依据数据类型,组间比较分别采用t检验和χ2检验.相关性分析采用Pearson线性相关分析法.结果 CHD组患者的血清hs-CRP[(7.29±3.65)vs(2.84±1.16)mg/L]、RBP4[(49.64±8.32)vs(42.07±5.51)ng/ml]及血浆Hp[(95.26±19.14)vs(70.13±16.33)mg/L]水平均显著高于对照组(P<0.05).AMI亚组患者的血清hs-CRP、RBP4、Gensini评分及血浆Hp水平均显著高于SAP亚组和UAP亚组患者(P<0.05);UAP亚组患者的血清hs-CRP、RBP4、Gensini评分及血浆Hp水平均显著高于SAP亚组患者(P<0.05).三支病变亚组患者的血清hs-CRP、RBP4、Gensini评分及血浆Hp水平均显著高于双支病变和单支比病变亚组患者(P<0.05);双支病变亚组患者的血清hs-CRP、RBP4、Gensini评分及血浆Hp水平均显著高于单支病变亚组患者(P<0.05).CHD患者的Gensini评分与血清hs-CRP(r=0.619)、RBP4(r=0.554)及血浆Hp(r=0.592)水平均呈显著正相关(P<0.05).结论 CHD患者血清hs-CRP、RBP4及血浆Hp水平显著升高,且与冠状动脉病变严重程度密切相关.
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近10年新发阵发性睡眠性血红蛋白尿症的临床分析
阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种获得性克隆性造血干细胞疾病，临床表现多样，以持续性血管内溶血，阵发性加重为主要特征，易与再生障碍性贫血（AA）、骨髓增生异常综合征（MDS）等疾病相混淆。PNH患者的血细胞膜上缺乏多种糖化磷脂酰肌醇(GPI）-锚连蛋白，包括补体调节蛋白（如CD55、CD59），这是引起溶血等临床表现的主要原因。90年代以来，发现GPI-A基因突变导致GPI合成障碍，是引起GPI-锚连蛋白缺失的原因［1］。现将我院1990年以来诊断的PNH病例作回顾性分析如下。 一 、资料和方法 1. 病例： 78例均系1990年1月至1999年11月在我院住院诊治的患者。男48例，女30例，男∶女=1.6∶1，年龄6～70岁，中位年龄34岁。 2.检测方法：取髂骨骨髓组织做病理活检；用R显带法做骨髓单个核细胞的染色体核型分析；外周血检测以下溶血指标：游离血红蛋白（FHb）、结合珠蛋白（Hp）、尿含铁血黄素（Rous）、尿潜血（OB）、Ham试验、糖水溶血试验、蛇毒因子溶血试验（CoF）、微量补体溶血敏感试验（mCLST）；用间接免疫荧光法分别检测外周血粒细胞、红细胞、淋巴细胞的CD55、CD59抗原表达。
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荧光双向电泳和串联质谱技术检测卵巢上皮癌血清标志物的研究
目的 通过差异蛋白质组学的方法寻找卵巢上皮癌血清标志物,以提高卵巢癌诊断的灵敏度和特异度.方法 收集103例卵巢上皮癌、60例正常对照、63例卵巢良性肿瘤和63例盆腔良性病变患者的血清.按照患者年龄匹配,选取卵巢上皮癌、盆腔良性病变、卵巢良性肿瘤和正常对照者血清各20例,等容积混合,去除高丰度白蛋白和IgC后,进行荧光双向电泳(2-DE DIGE),实验重复3次.以OyCyder软件分析得出有显著差异的蛋白质点,以基质辅助激光解吸离子飞行时间串联质谱(MALDI TOF/TOF)鉴定差异蛋白质,分别采用Western blot和酶联免疫吸附实验(ELISA)验证获选的血清标志物.结果 2-DE DIGE得出有显著差异的蛋白质点41个,MALDI TOF/TOF成功鉴定出其中的28个蛋白质.上调显著的蛋白质为结合珠蛋白(Hp),下调显著的蛋白质为转铁蛋白(Tf).Western blot和ELISA验证结果显示,Hp和Tf在卵巢上皮癌与正常对照、卵巢上皮癌与卵巢良性肿瘤、卵巢上皮癌与盆腔良性病变之间的差异有统计学意义(均P=0.000).CAl25+Hp+Tf联合检测诊断卵巢上皮癌的灵敏度(81.6%)和特异度(76.9%)高于CA125(78.6%和70.4%)、Hp(69.9%和70.4%)和Tf(66.0%和70.4%)单独检测.结论 Hp和Tf是卵巢上皮癌血清中差异表达的蛋白质,可作为卵巢上皮癌的血清标志物,CAl25+Hp+Tf联合检测有助于提高卵巢上皮癌诊断的灵敏度和特异度.
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结合珠蛋白在阿萨希毛孢子菌小鼠皮肤感染中的表达与调控
目的 探讨结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)在阿萨希毛孢予菌皮肤感染过程中的免疫调节作用.方法 80只BALB/c小鼠分为免疫抑制组和非免疫抑制组,两组小鼠皮下均接种3.2×107cfu/ml的阿萨希毛孢子菌菌悬液,分别于接种后0.5d、1d、3d、5d处死小鼠,取皮损组织,提取总RNA,RT-PCR检测tJHp mRNA表达,基因芯片技术研究免疫相关基冈差异表达.结果 两组小鼠在第0.5d、1d、3d、5d后皮损组织均扩增出Hp mRNA,其中免疫抑制组皮损组织Hp mRNA表达水平明显高于非免疫抑制对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01).免疫抑制组感染1d后皮损组织Hp mRNA表达明显高于0.5d、3d、5d,组间比较均有显著性差异(p<0.01).筛选出的11条免疫相关差异表达基因中编码结合珠蛋白基凶表达上调.结论 结合珠蛋白参与了皮肤阿萨希毛孢子菌感染的过程.
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离子交换层析分离纯化人结合珠蛋白的研究
目的：探索应用离子交换层析从Cohn组分Ⅳ分离纯化人结合珠蛋白（haptoglobin，Hp）的方法，并对纯化产物进行初步鉴定及活性分析。方法 Cohn组分Ⅳ溶解液稀释后经利凡诺络合，收集上清并用50％硫酸铵进行沉淀，沉淀重溶后用Q Sepharose Fast Flow 层析分离纯化得到目的蛋白。然后利用SDS-PAGE及免疫印迹对目的蛋白进行鉴定，并利用Native-PAGE方法测定纯化产物的活性。结果 Cohn组分Ⅳ经过利凡诺络合及盐析处理后能有效去除部分杂蛋白，并使目的蛋白富集。利用离子交换层析方法从Cohn组分Ⅳ中纯化得到的主要产物为Hp2-2，SDS-PAGE显示Hp纯度较好，免疫印迹分析进一步证明，利用该法成功分离得到目的蛋白Hp，且利用Native-PAGE方法测得目的蛋白活性为2．8 U／ml。结论利用该法从Cohn组分Ⅳ中成功分离得到人Hp，方法简单，易于放大生产，具有较好应用前景。
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Hp/DNA双参数分析放射损伤小鼠骨髓细胞周期、凋亡和Hp
目的:建立结合珠蛋白(Hp)/DNA双参数流式细胞技术,以探讨放射损伤小鼠骨髓细胞中Hp含量与细胞周期和凋亡的关系.方法:小鼠骨髓细胞经70%乙醇固定后,Triton-X 100破膜,间接免疫荧光技术标记Hp,PI 标记DNA,上流式细胞仪测试.用ModFit软件设双门法分析Hp+和Hp-细胞的细胞周期和凋亡,CELLQuest软件分析Hp+细胞比例.结果:γ射线照射后6?h小鼠骨髓有核细胞中Hp+细胞的比例明显高于未照射对照组,骨髓细胞的凋亡来自于Hp-细胞,Hp+细胞未见凋亡,Hp-细胞发生的G2/M阻滞比Hp+细胞严重.这些信息是单用Western印迹法或单纯DNA分析所不能提示的.结论:Hp/DNA双参数流式细胞技术可用于分析Hp与细胞周期和凋亡的关系,是一种快速、客观的分析方法.
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γ射线诱导人单核细胞系THP-1细胞结合珠蛋白的表达
目的 探讨γ射线诱导THP-1细胞中结合珠蛋白的表达及调控的机制.方法 RT-PCR和Western blot检测结合珠蛋白mRNA和蛋白的变化.EMSA检测γ射线照射后THP-1细胞核提取物中与结合珠蛋白启动子区域寡聚核苷酸探针复合物的形成,抗体阻滞实验检测可能参与复合物形成的转录因子.结果 γ射线能够诱导THP-1细胞中结合珠蛋白的表达,而且有时间和剂量依赖效应,分别包含结合珠蛋白启动子区域的3个不同顺式作用元件的寡聚核苷酸探针均能与核提取物形成复合物,其中B和C区域的复合物形成受γ射线影响明显,stat-3在γ射线照射后表达升高,C/EBPβ-LIP出现先升高而后下降的过程.抗体阻滞实验中Anti-C/EBPα和Anti-C/EBPβ抗体能够形成明显的超迁移条带,Anti-stat3能够影响细胞核提取物与寡聚核苷酸探针复合物的形成.结论 γ射线能够诱导THP-1细胞中结合珠蛋白的表达,C/EBPβ-LIP和stat-3参与了其中的调控过程.
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γ射线全身照射小鼠后结合珠蛋白表达变化的研究
目的 研究小鼠受到不同剂量全身照射后血清和主要造血免疫器官中结合珠蛋白的表达,寻找可能的放射病诊断指标和治疗靶点.方法 运用Western blotting检测照射后小鼠血清中结合珠蛋白的变化,RT-PCR检测照射后小鼠器官组织中结合珠蛋白mRNA的表达情况.结果 照射后小鼠血清中结合珠蛋白和免疫造血相关组织中结合珠蛋白mRNA均较正常对照升高,而且随着照射后时间和照射剂量的增加出现了增加趋势.结论 电离辐射可以引起小鼠血清中结合珠蛋白和造血免疫相关组织中结合珠蛋白mRNA的增加,可能是急性放射损伤诊断的新指标和治疗新靶点.
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电离辐射后小鼠骨髓组成中结合珠蛋白的表达规律研究
目的研究照射前后结合珠蛋白在小鼠骨髓中的表达和分布,及其与骨髓细胞周期进程改变及凋亡的可能关联.方法用RT-PCR,Western blotting及流式细胞术的方法检测骨髓细胞Hp mRNA及细胞内外Hp蛋白的存在,及其辐射后的变化.用流式细胞术的方法分析了骨髓细胞中Hp阴性及阳性细胞群周期分布及凋亡率的差异.结果在骨髓细胞中检测到Hp mRNA的存在,而且8 Gy照射后24 h较正常小鼠有明显升高.骨髓细胞内及外液中检测到Hp蛋白的存在,同样8 Gy照射后24 h较正常小鼠亦呈明显升高.流式细胞术检测发现小鼠骨髓细胞中部分细胞含有Hp蛋白,照射后Hp阳性细胞的比例逐渐增加,并有着较好的时效关系和剂量依赖关系.骨髓Hp阳性细胞与阴性细胞的细胞周期分布存在显著的差异.在照射后6 h骨髓细胞凋亡率随照射剂量增加而明显增加,而Hp+细胞凋亡率增加不明显.结论小鼠骨髓组织中可以检测到结合珠蛋白的存在,并且在辐射后有明显的增加,骨髓细胞中Hp阴、阳性细胞的周期分布和凋亡存在明显的差异.推测Hp可能参与辐射诱导骨髓损伤的修复过程.
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克罗恩病患者蛋白质组学差异表达的研究
目的 探讨克罗恩病患者血清中的差异表达蛋白.方法 选取在本院诊治的克罗恩病患者20例,采用各种CyDve染料实施交叉标记后,依据顺序实施MALDI-TOF-MS、2-D DIGE等鉴定操作.结果 对二者双向电泳图对比,发现克罗恩病患者在表达异常蛋白质点方面有多个,其中1058蛋白质点,相比于正常成人组,则存在明显升高,即1.67倍(P<0.05),此蛋白质通过质谱鉴定得知,乃是一种结合珠蛋白质.结论 在克罗恩病血清中,结合珠蛋白所存在的高表达,提示在其病程中免疫系统失衡可能存在一定作用.
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CRP与儿童急性细菌性痢疾的诊断和治疗
目的 探讨CRP(C-反应蛋白)的检测对儿童急性细茵性痢疾诊断及治疗的价值.方法 测定50例急性细菌性痢疾患儿(茵痢组)、30例病毒性肠炎患儿(病毒组)及30例健康儿童(对照组)血清CRP、结合珠蛋白(HP)的含量及白细胞计数(W BC).茵痢组抗炎治疗5d后38例复查CRP,再细分为Ⅰ组(治疗5d停药组)和Ⅱ组(继续治疗至大便培养复查正常后停止治疗的治疗组),观察两组治疗时间及效果.结果 茵痢组血清CRP、HP高于病毒组和对照组(P均＜0.05).WBC三组比较无差异.茵痢组有效抗炎治疗5d后CRP明显下降(P＜0.001),Ⅰ组抗生素应用时间较Ⅱ组明显缩短(P＜0.001).结论 CRP对急性细菌性痢疾感染与病毒性肠炎的鉴别诊断有一定的价值；并能监控抗生素的疗效,有效指导抗生素治疗疗程,可能作为急性细茵性痢疾感染停用抗生素的标准.
