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血清结合珠蛋白的研究进展
结合珠蛋白(Hp)是一种酸性糖蛋白.属急性期反应蛋白之一,由于所含轻链类型的不同.结合珠蛋白具有遗侍多态性.结合珠蛋白主要在肝脏合成,结合珠蛋白不同的表现型在临床上有不同的生物学功能.其多型性与许多炎症性疾病包括感染性疾病、动脉粥样硬化、自身免疫性痰病、溶血性疾病等的发生发展有关.
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地中海贫血产前基因诊断现状和发展趋势
地中海贫血(地贫)是一组常染色体隐性遗传病.它是由于珠蛋白基因突变,使珠蛋白生物合成受阻,产量不足或缺如所致.对于重型地贫,除了输血之外,目前尚缺乏有效的治疗手段,重点在于预防.通过产前基因诊断,可以发现重型地贫胎儿并及时终止妊娠,从而减少重型地贫患儿的出生率及围产期并发症,提高人口的健康素质,减轻家庭及社会的精神及经济负担.现将α-及β-地贫产前基因诊断的现状与发展趋势综述如下.
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168例地中海贫血的基因诊断
地中海贫血(mediterranean anemia,简称"地贫")是我国南方常见、危害严重的遗传性疾病之一.地贫是珠蛋白基因突变导致珠蛋白链合成缺陷所引起的一种遗传性溶血性贫血病,可分为α地贫和β地贫,目前对此病尚无根治方法.地贫基因分析有助于了解该病的分子病理机制,对早期诊断、临床治疗、遗传咨询和婚育指导有重要意义[1].
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江西籍24例α地中海贫血患者三种常见缺失型及非缺失型结果分析
α地中海贫血(α地贫)为α珠蛋白基因缺失或点突变引起α珠蛋白合成障碍,形成极不稳定的血红蛋白,导致溶血性贫血.它是我国南方高发遗传性疾病~([1]),严重影响了患者的生存质量.
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乳腺癌乳腺珠蛋白mRNA表达及临床意义的研究
目的探讨乳腺珠蛋白(hMAM)mRNA在乳腺癌患者外周血中的表达及临床意义.方法采用逆转录-聚合酶链方法检测56例乳腺癌、8例乳腺增生和8例正常乳腺者外周血中hMAM mRNA的表达,并比较了hMAM mRNA表达与乳腺癌生物学特性的关系,术后早期化疗对hMAM mRNA表达的影响. 结果 56例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA表达阳性率为30.4%(17/56),8例慢性乳腺增生者和8例正常乳腺者hMAM mRNA表达均为阴性,2组hMAM mRNA表达差异有非常显著性意义(χ2=19.766,P<0.01).hMAM mRNA的表达与患者年龄、原发癌灶大小,临床分期差异无显著性意义(χ2=1.256,P>0.05).17例hMAM mRNA表达阳性者经术后早期短程化疗后,转阴率为41.2%(7/17),手术前hMAM mRNA表达阴性者无一例表达阳性. 结论 hMAM mRNA特异表达于乳腺癌患者外周血,有可能成为诊断乳腺癌和判断预后的一个独立指标.
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产前诊断泰国缺失型α地中海贫血1引起的胎儿巴氏水肿
地中海贫血(地贫)是由于珠蛋白基因缺失或突变导致珠蛋白链合成减少或缺乏,所致的一种遗传性溶血性贫血,是我国南方地区常见、危害大的遗传病,临床上主要分为α地贫和β地贫两种,以α地贫更为常见.目前,国内报道的α地贫产前基因诊断主要是针对常见的3种α地贫缺失型和非缺失型基因突变类型的胎儿产前基因诊断.本研究报道2例极为少见的泰国缺失型α地贫1和东南亚缺失型α地贫1双重杂合的产前诊断.
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人血红蛋白α、β基因以可溶形式在大肠杆菌中的表达
将人血红蛋白α、β珠蛋白基因分别克隆进pET-21b原核表达载体中,宿主菌经IPTG化学诱导,在1.6×105处有特异的蛋白带表达。表达产物以可溶形式存在,α珠蛋白的表达量达总菌体蛋白的5%,β珠蛋白的表达量达15%,并经Western-Blotting杂交证实。
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秀丽隐杆线虫双突变株系hif-1(ia04);glb-13(tm2825)的制备与鉴定
目的 以秀丽隐杆线虫为模式生物研究珠蛋白(globin)13(lgb-13)的生理作用,以回交2次的glb-13(tm2825)突变株系和hif-1(ia04)构建线虫双突变株系hif-1(ia04);glb-13(tm2825).方法 glb-13(tm2825)与野生型N2株系交配获得glb-13(tm2825)的雄虫,再与N2的雌雄同体线虫进行交配,回交2次后,通过单只线虫基因组PCR法鉴定出交配后的纯合体.使用hif-1(ia04)和野生型线虫N2进行交配得到hif-1(ia04)的雄虫,然后再与glb-13(tm2825)雌雄同体线虫交配,通过单只线虫基因组PCR法鉴定出交配后的纯合体.结果 获得hif-1(ia04);glb-13(tm2S25)双突变株系.结论 通过线虫交配回交可以使突变株系线虫保持稳定性状,而突变株系之间的交配可以制备出双突变株系,为深入开展glb-13的功能研究奠定了物质基础.
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肾上腺髓外造血一例
患者 男,6岁.贫血、皮肤黄染6年,发现右肾上腺肿物1年.实验室检查:红细胞1.28×1012/L,红细胞比积(HCT)14.8%,血红蛋白42g/L,总胆红素91.6 μmol/L,间接胆红索82.9 μmol/L,直接胆红素9.1 μmol/L;变性珠蛋白小体、异丙醇实验和热变性实验均阳性.
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特发性肺含铁血黄素沉着症5例
特发性肺含铁血黄素沉着症(idiopathic pulmonary hemosiderosis,IPH)为少见病,多见于儿童.成人约占20%,多在30岁以下发病[1].我院2000~2005年收治5例IPH患者,其中儿童4例,成人1例,与上述比例相仿.该病特点为肺泡毛细血管反复出血,渗出的血液溶解后,其中珠蛋白部分被吸收,而含铁血黄素沉着于肺组织.现报道如下.
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地中海贫血的分子机制及其相关microRNA表达调控的研究进展
地中海贫血是一种典型的常见的单基因遗传病,在地中海区域、东南亚及我国南方地区高发,目前国内外治疗方法有限.MicroRNA是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,在转录和转录后水平调控靶基因的表达,广泛参与了动物体内包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等.近年来,miRNA在地中海贫血等疾病过程中的表达隋况和发挥的作用也逐渐揭示,本文就地中海贫血的分子机制及其相关microRNA表达调控的研究进展进行综述.
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益髓生血颗粒治疗β-地贫与调控珠蛋白mRNA表达分子机制研究
1.高发区临床实践,探索出了中药治疗β-地贫新路子(1)首次在β-地贫高发的广西南宁周边地区及百色地区采用随机、单盲、安慰剂平行对照30例患者临床研究;服安慰剂后给益髓生血颗粒治疗30例患者自身对照的比较研究;进行中医证候量化评分与血液指标变化相关性的动态观察等;根据张之南主编《血液病诊断及疗效标准》(1991年版)及第四界国际血红蛋白基因开关会议提出的标准进行评价.
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实验诊断学讲座(7)
7异常血红素和血红素衍生物血红蛋白由珠蛋白和血红素所构成,血红蛋白之所以呈现红色,是由血红素决定的.珠蛋白分子结构复杂,其变异多由遗传控制.血红素的结构较简单,并具有与某些小分子物质(O2、CO、S、C N等)相结合的特性.血红素结合的小分子物质和亚铁、高铁不同,均可致血红蛋白的颜色变化,由此而改变对光的吸收.据此原理选用专用光度计进行直接测定,尤其定性检测十分快捷.此类方法为测定异常血红素及其衍生物提供了极大的方便.
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新的红细胞分化相关基因EDRF1增强HEL细胞的珠蛋白表达
目的观察EDRF1基因在HEL细胞中对红细胞终末分化和珠蛋白表达的扮演的角色.方法构建EDRF1真核正义和反义表达载体,转染HEL细胞并筛选稳定表达细胞克隆.然后利用Northern blot和反转录PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)的方法观察红系标志基因的表达水平改变.凝胶阻滞电泳(electrophoresis mobility shift assay, EMSA)的方法观察红系转录因子的DNA结合活性的改变.结果与对照相比,EDRF1过表达的HEL细胞中α-珠蛋白合成明显增加,EDRF1反义表达载体转染的HEL细胞中的α、γ-珠蛋白合成下调,而红细胞生成素受体(erythropoietin receptor, ER)表达水平没有明显改变,这提示EDRF1并非通过调控ER信号通路而影响HEL细胞的红细胞分化.红细胞特异的转录因子GATA-1和NF-E2 mRNA的表达在转染前后没有明显改变.另外,GATA-1转录因子的DNA结合活性在反义表达载体转染的HEL细胞中受到明显的抑制,而NF-E2的转录活性则没有明显的改变.结论 EDRF1下调珠蛋白的合成是通过抑制红系特异的转录因子GATA-1的DNA结合活性实现的.
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红细胞分化相关因子1对人红白血病细胞珠蛋白表达的影响
目的探讨红细胞分化相关因子(EDRF)1基因在人红白血病(HEL)细胞中珠蛋白表达的影响.方法构建EDRF1真核正义和反义表达载体,转染HEL细胞并筛选稳定表达细胞克隆.然后利用Northern blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法观察红系标志基因表达水平的改变,应用凝胶阻滞电泳(EMSA)的方法观察红系转录因子DNA结合活性的改变.结果与对照相比,EDRF1过表达的HEL细胞中α-珠蛋白合成明显增加,EDRF1反义表达载体转染的HEL细胞中的α-、γ-珠蛋白合成下调,而红细胞生成素(EPOR)表达水平没有明显改变.红细胞特异的转录因子GATA-1和NF-E2 mRNA的表达在转染前后没有明显改变.GATA-1转录因子的DNA结合活性在反义表达载体转染的HEL细胞中受到明显的抑制,而红系核因子(NF-E)2的转录活性则没有明显的改变.结论EDRF1下调珠蛋白的合成是通过抑制红系特异的转录因子GATA-1的DNA结合活性实现的.
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运用单管多重聚合酶链反应检测海南黎族人群中三种缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因
目的建立单管多重聚合酶链反应(mPCR)技术并将其运用于筛查海南黎族人群中3种常见的缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因(α-地中海贫血基因,简称α-地贫基因).方法在研究成功检测3种α-地贫基因,即--SEA、-α3.7、-α4.2的3个PCR反应的基础上,建立并优化单管mPCR反应的条件,检测了40例已知基因型的α-地贫患者基因,并筛查、诊断了116份海南黎族人血标本.结果运用新建立的单管mPCR检测40例α-地贫患者DNA,所得基因型与运用3个分别的PCR技术及Southern印迹杂交技术所得到的结果一致.在116份海南黎族人中,检出-α3.7和-α4.2缺失型基因的携带频率高达38.0%,且-α4.2稍高于-α3.7.但在该组标本中没测到--SEA.结论单管mPCR技术准确率及灵敏度都很高,且简便易行.海南黎族人群-α3.7和-α4.2携带频率居国内高.
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急性苯胺中毒血液中变性珠蛋白小体的检测
苯的氨基、硝基化合物进入人体后,作用于珠蛋白分子的巯基,使珠蛋白变性而成为变性的珠蛋白小体.某厂工人因维修装有苯胺的原料罐时 ,未注意防护,经皮肤及呼吸道粘膜吸收而发生急性苯胺中毒.
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高原世居藏族α、β珠蛋白编码基因的克隆与测序
目的:通过对高原世居藏族α、β珠蛋白编码基因的分析,探讨藏族Hb高氧亲合力的分子机制.方法:高原现场采集健康成年男性藏族人骨髓样品,提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得人α和β珠蛋白的cDNA,与PGEM-T Easy质粒连接后,将α和β珠蛋白的cDNA转化JM109大肠杆菌中扩增培养,经酶切鉴定后测序,结果与NCBI数据库进行同源性比较.结果:藏族人α珠蛋白的cDNA与NCBI数据库登录的人cDNA序列相同,没有突变位点.一例藏族人β珠蛋白143位密码子发生了氧亲和力增高的碱基突变(CAC->CGC),其对应的氨基酸由His变为Arg(即Hb Abruzzo).结论:藏族人高氧亲和力变种的发现,为今后高原低氧适应相关基因的研究提供了线索.
关键词: 高原 藏族 珠蛋白 基因 Hb Abruzzo -
跑台运动和营养补充对大鼠血红素代谢限速酶和珠蛋白mRNA表达与活性水平的影响
目的:研究血红素代谢限速酶和珠蛋白代谢在运动性贫血发生机理中的功能和作用,及营养补充对运动性贫血防治效果的作用机制.方法:本实验对30只雄性Wistar大鼠进行等量随机分为3组(n=10):对照组(C)、运动组(P)和运动+营养组(G).30 m/min、0%坡度、每次1 min为起始训练方式,前5周和后4周时训练时间的加速度为每次2 min,训练频率为每天2次(前两周例外).11周的跑台运动结束后应用RT-PCR和免疫组织化学的方法测试骨髓δ-氨基-γ酮戊酸合成酶(ALAS)、铁螯合酶(ferrochelatase)、α-珠蛋白、β-珠蛋白的基因表达和肝脏血红素氧合酶-1(HO-1)的活性.结果:11周跑台运动可以增加大鼠肝脏HO-1的活性和骨髓β-珠蛋白的基因表达(P<0.01,P<0.05),抗运动性贫血复合剂补充并不能改变大鼠运动后血红素代谢限速酶和珠蛋白基因表达和活性,且运动+营养组大鼠肝脏HO-1活性水平显著高于对照组(P<0.01),即递增负荷跑台运动不能影响大鼠骨髓血红素合成酶和α-珠蛋白的基因表达,但能够影响大鼠肝脏血红素分解酶的活性水平和骨髓β-珠蛋白的基因表达.结论:肝脏HO-1活性水平的升高可能是运动性贫血表现出低Hb、RBC和Hct水平的原因之一.
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应用实时荧光等位基因特异PCR检测β-珠蛋白基因突变
目前全世界已报道的β-地中海贫血(地贫)基因突变类型达200多种[人类血红蛋白变异和地贫突变的在线数据库(http://globin.cse.psu.edu)],在中国人中至少已发现36种,其中常见的突变为CD4142(-CTTT)、IVS Ⅱ654(C→T)、CD17(A→T)、TATA盒nt-28(A→G)、CD71-72(+A)和CD26(G→A),约占我国β-地贫基因突变总数的93%左右~([1]).